幅広い短いペプチド配列を考えると、この方法は他の多くのナノ粒子設計に拡張することができる。ペプチドの修飾は、診断目的に適したシステムを作ることができます。生分解性の薬剤に抗癌白金を封入し、低毒性安定化剤は、医薬品用途に対して非常に関連性が高い。
卵巣癌の予備的なインビボ研究は有望であり、さらに調査される。まず、摂氏60度で4ミリリットルの超純水に50ミリグラムのシスプラチンを吊り下げます。硝酸銀溶液を滴下してシスプラチン溶液に加え、暗闇の中で摂氏60度で2時間300〜400RPMで混合物をかき混ぜます。
その後、溶液中に遊離の銀イオンがないことを確認するために10重量%の塩酸を使用してください。塩酸を添加しても追加の塩化銀が形成しない場合は、混合物を10分間重力の3倍220倍にして遠心分離する。上清をデカントし、0.2マイクロメートルのシリンジフィルターを通してそれをフィルタリングする。
次に、2~3滴を20個の塩化物結晶に塗布して、白金の濾液を試験します。懸濁液が濃い茶色またはオレンジ色に変わる場合は、プラチナが存在します。次に、1ミリリットルの水に13.3ミリグラムの水酸化ナトリウムを加え、60°Cの3ミリリットルの水にオレイン酸の94.2ミリグラムの懸濁液を加えます。
60°Cで2時間かき混ぜます。次に、火を消し、室温で16〜24時間攪拌を続け、粗生成物を油性の黄褐色沈殿剤として得る。反応混合物を3、220倍の重力で10分間遠心し、上清を除去した。
25°Cのロータリーエバポレーターで製品を乾燥させます。粗物を5ミリリットルのアセトニトリルで、ボルテックスで懸濁し、遠心分離によって回収します。この洗浄工程を少なくとも2回以上繰り返して、純白色の白金IIを淡黄色の固体として得る。
まず、5.7グラムのFmoc保護されたLフェニルアラニンを25ミリリットルのジメチルホルムアミドで1時間浸漬する。次いで、80RPMで振盪しながら、DMFに20%ピピリジンの15ミリリットルに樹脂を5分間浸し、アミンを保護解除する。樹脂を水切りし、保護解除を20分間繰り返します。
その後、DMFとイソプロピルアルコールで樹脂を洗浄します。脱保護が確認されたら、Fmoc保護されたL-チロシンTBTUとDIPEAを加え、カップリングを行うために16〜24時間混合物を攪拌する。DMFおよびイソプロピルアルコールで樹脂を洗浄します。
カイザー試験を行い、前述のように保護解除と洗浄を続行します。カップルと保護解除Fmocは同じようにリジンを保護しました。その後、DMF、IPA、メタノール、ジクロロメタン、ジエチルエーテルで樹脂を洗浄します。
FITCの修正のためのKYF軸受樹脂の1グラムを脇に置きます。残りの樹脂を95%トリフルオロ酢酸に浸します。2.5%トリイソプロピルシランおよび2.5%水は、樹脂からトリペプチドを切断するために3時間。
20°Cまで冷却したジエチルエーテルで粗ペプチドを沈殿させます。沈殿物を冷たいジエチルエーテルの30~40ミリリットルの部分で遠心分離して3回洗浄し、真空下で乾燥させます。次に、KYF樹脂の残りのグラムを、TBTUおよびDIPEAと共に30ミリリットルのDMF中の6-アセトヘキサン酸の120.1ミリグラムと混合する。
混合物を室温で16〜24時間攪拌し、アジド修飾トリペプチドを得た。次に、この樹脂の253ミリグラムを3.78ミリグラムの固体銅(I)ヨウ化物71.9ミリグラムのプロパルギルフロリサンと2.24ミリグラムのDIPEAと組み合わせます。24時間振りながら混合物を反応させてください。
その後、FITC変性KYF軸受樹脂を十分に洗浄します。FITCを修飾したKYFを樹脂から切断し、未修飾トリペプチドと同様に精製します。ナノメモルシオンの調製を開始するには、10ミリグラムのオレイン酸白金IIを1.5ミリリットルのIPAに溶解します。
この溶液を5ミリリットルのシリンジに引き込み、20ゲージの針を取り付け、シリンジをシリンジポンプに付けます。注射器ポンプを毎分0.1ミリリットルに設定します。FITC修正KYFを用いたナノエマルジョンの場合、FITC改変KYFの1ミリグラムと20ミリリットルの水に1ミリグラムの未改変KYFを溶解する。
未修飾のKYFを用いたナノエマルジョンの場合、代わりに20ミリリットルの水にKYFの2ミリグラムを溶解する。FITCを改変または変更されていないKYF溶液を摂氏37度に加熱します。KYF溶液が約400RPMで撹拌され、シリンジが溶液に合っていることを確認してください。
次に、シリンジポンプを開始し、オレイン酸白金2個のコンジュゲートドロップをワイズして添加開始する。コンジュゲートを加えたら、撹拌速度を150RPMに下げ、溶液を室温まで冷まします。16~24時間撹拌を続けます。
次いで、ナノマルチオンを10,000ダルトン遠心フィルターユニットに濃縮する。ナノエマルジョンを遠心フィルターユニットで3回、超純水の4ミリリットルの部分で洗浄します。そして、摂氏4度で水溶液として保存します。
最終製品は、KYFナノ粒子の青白色化、FITC修飾ナノ粒子の蛍光です。未修飾のKYFで調製されたナノエマルジョン中の液滴は球状で、十分に分散し、比較的均一な大きさであった。透過電子顕微鏡画像を用いて、コアの直径は約107ナノメートルであった。
ここに緑色で現れるFITC修飾ナノエマルジョンは、様々な卵巣癌細胞株から細胞に入る可能性がある。両方の製剤の流体力学的直径は、水中での貯蔵の4ヶ月の間に増加したが、全体の寸法は保存された。さらに、20%のウシ胎児血清中の1日のインキュベーションの後にエマルジョンのオプソニンゼーションは観察されなかった。
エマルジョンからの白金の放出はpH 7.4で最も遅く、4時間後に放出された白金のわずか20.8%であった。白金放出はpHが減少するにつれて加速した。白金含有KYF被覆ナノエマルジョンは、これらの卵巣癌細胞株の生存率を、臨床的に関連する類似体であるカルボプラチンによって達成されたよりもはるかに大きな程度に低下させた。
ナノエマルジョンはまた、6つの細胞株のうち5個においてシスプラチンよりも生存率の同等または大きな減少を示した。KYFコーティングされたナノエマルジョンは、オレイン酸白金IIコンジュゲート単独と比較可能またはより大きな生存率の低下を一貫して誘導した。これは、トリペプチド基底ナノ粒子足場内に疎水性治療薬をカプセル化するための簡単で効率的な方法です。
短いペプチドは生分解性であり、毒性が低く、医学やバイオテクノロジーにとって重要です。この手順は、有機溶剤への暴露を避けるために、ヒュームフードの下で行ってください。白金オレイン酸およびKYF白金ナノエマルションは抗癌特性を有するため、特別な注意を払って取り扱う必要があります。
この方法は、低いフィラビレーター活性および装置の点では簡単であるが、それは合成戦略の適切な適用、および基礎となる化学概念に依存している。私たちの方法は、他の小さな薬物分子を提供するために拡張することができます。ナノ粒子コアはオレイン酸から構成されているため、疎水性薬剤のカプセル化に適しています。
