Dada a ampla gama de sequências curtas de peptídeos, este método pode ser estendido a muitos outros desenhos de nanopartículas. A modificação do peptídeo pode tornar o sistema adequado para fins de diagnóstico. Encapsular a platina anticâncer a drogas com agente estabilizador biodegradável e de baixa toxicidade é altamente relevante para aplicações farmacêuticas.
Estudos in-vivo preliminares com câncer de ovário são promissores e serão investigados. Para começar, suspenda 50 miligramas de cisplatina em quatro mililitros de água ultra-pura a 60 graus Celsius. Adicione a solução de nitrato de prata em termos de gota à solução cisplatina e mexa a mistura de 300 a 400 RPM por duas horas a 60 graus Celsius no escuro.
Depois disso, use 10% por ácido clorídrico de peso para confirmar que não há íons de prata livres na solução. Se não for mais um cloreto de prata ao adicionar ácido clorídrico, centrifugar a mistura a 3.220 vezes a gravidade por 10 minutos. Decante o supernatante e filtre-o através de um filtro de seringa de 0,2 micrômetro.
Em seguida, teste o filtrado para platina aplicando duas a três gotas a 10 cloretos. A platina está presente se a suspensão ficar marrom escuro ou laranja. Em seguida, adicione 13,3 miligramas de hidróxido de sódio em um mililitro de água em 94,2 miligramas de suspensão de ácido oleico em três mililitros de água a 60 graus Celsius.
Mexa a mistura por duas horas a 60 graus Celsius. Em seguida, desligue o fogo e continue mexendo à temperatura ambiente por 16 a 24 horas para obter o produto bruto como um precipitante oleoso e marrom-amarelo. Centrifugar a mistura de reação a 3.220 vezes a gravidade por 10 minutos, e remova o supernante.
Seque os produtos em um evaporador rotativo a 25 graus Celsius. Suspenda o produto bruto em cinco mililitros de acetonitrilo por vórtice e recuperação do produto por centrifugação. Repita este processo de lavagem pelo menos mais duas três vezes para obter o ácido puro e oleico platina II conjugado como um sólido amarelo pálido.
Primeiro, mergulhe 5,7 gramas de Fmoc protegida L-fenilalanina funcionalizada resina Wang funcionalizada em 25 mililitros de dimetilformamida por uma hora. Em seguida, mergulhe a resina em 15 mililitros de 20% piperidina em DMF por cinco minutos enquanto treme a 80 RPM para des protegir a amina. Escorra a resina e repita a desproteção por 20 minutos.
Lave a resina com DMF e álcool isopropílico depois. Uma vez confirmada a desproteção, adicione OFoc protegido L-tyrosine TBTU e DIPEA e agitar a mistura por 16 a 24 horas para realizar o acoplamento. Lave a resina com DMF e álcool isopropílico.
Realize o teste kaiser e continue com a desproteção e lavagem como descrito anteriormente. Casal e des proteção Fmoc protegem a lise da mesma forma. Lave a resina com DMF, IPA, metanol, diclorometano e éter dietil depois.
Reserve um grama de resina de rolamento KYF para modificação FITC. Mergulhe a resina restante em ácido trifluoroacético de 95%. 2,5% triisopropilano e 2,5% de água por três horas para cortar o tripeptídeo da resina.
Precipitar o peptídeo bruto com éter dietil resfriado a 20 graus Celsius. Lave o precipitado três vezes por centrifugação em 30 a 40 mililitros porções de éter de ditil frio e seque-o sob vácuo. Em seguida, misture o restante grama de resina KYF com 120,1 miligramas de ácido 6-acetohexanoico em 30 mililitros de DMF com TBTU e DIPEA.
Agitar a mistura por 16 a 24 horas em temperatura ambiente para obter o tripeptida modificado de azide. Em seguida, misture 253 miligramas desta resina com 3,78 miligramas de cobre sólido (I)iodeto 71,9 miligramas de propargia florisean e 2,24 miligramas de DIPEA. Deixe a mistura reagir enquanto treme por 24 horas.
Em seguida, lave bem a resina de rolamento KYF modificada FITC. Aperte o FITC modificado KYF da resina e purfique-o da mesma forma que o tripeptídio não modificado. Para começar a preparar a nanoemoulsion, dissolva 10 miligramas do ácido oleico que a platina II conjugar em 1,5 mililitros de IPA.
Desenhe esta solução em uma seringa de 5 mililitros, conecte uma agulha de calibre 20 e monte a seringa em uma bomba de seringa sobre a área de reação. Coloque a bomba de seringa em 0,1 mililitros por minuto. Para uma nanoemulsão com KYF modificado FITC, dissolva um miligrama de KYF modificado fitc e um miligrama de KYF não modificado em 20 mililitros de água.
Para uma nanoemulsão com KYF não modificado, em vez disso, dissolva dois miligramas de KYF em 20 mililitros de água. Aqueça a solução KYF modificada ou não modificada do FITC a 37 graus Celsius. Certifique-se de que a solução KYF está mexendo em cerca de 400 RPM, e que a seringa está alinhada com a solução.
Em seguida, inicie a bomba de seringa para começar a adicionar o ácido oleico platina duas gota conjugada sábia. Uma vez adicionado o conjugado, reduza a velocidade de agitação para 150 RPM e deixe a solução esfriar à temperatura ambiente. Continue mexendo por 16 a 24 horas.
Então, concentre a nanoemulção em uma unidade de filtro centrífugo daltons 10.000 daltons. Lave a nanoemulsão em uma unidade de filtro centrífugo três vezes com quatro porções mililitros de água ultrapura. E então armazená-lo como uma solução aquosa a quatro graus Celsius.
O produto final é opalescente para nanopartículas KYF e fluorescente para nanopartículas modificadas pelo FITC. As gotículas em uma nanoemulsão preparada com KYF não modificada eram esféricas, bem dispersas e relativamente uniformes em tamanho. Com base em imagens de microscopia eletrônica de transmissão, os núcleos tinham cerca de 107 nanômetros de diâmetro.
A nanoemulsão modificada pelo FITC, que aparece aqui em verde, pode entrar em células de várias linhas de células cancerígenas do ovário. Enquanto o diâmetro hidrodinâmico de ambas as formulações aumentou durante quatro meses de armazenamento na água, as dimensões gerais foram preservadas. Além disso, não foi observada opsonização da emulsão após um dia de incubação em soro bovino fetal de 20%.
O lançamento de platina da emulsão foi mais lento no pH 7.4 com apenas 20,8% da platina lançada após quatro horas. A liberação de platina acelerou à medida que o pH diminuiu. A nanoemulsão revestida de KYF contendo platina reduziu a viabilidade dessas linhas de células cancerígenas de ovário a um grau muito maior do que foi alcançada pela carboplatina, o analógico clinicamente relevante.
A nanoemulsão também mostrou uma redução comparável ou maior na viabilidade do que a cisplatina em cinco das seis linhas celulares. A nanoemulsão revestida de KYF induziu consistentemente uma redução comparável ou maior na viabilidade do que o ácido oleico platina II conjugado sozinho. Este é um método simples e eficiente para encapsular terapêuticas hidrofóbicas dentro do andaime de nanopartículas da base tripécida.
Peptídeos curtos são biodegradáveis, e têm baixa toxicidade, o que é significativo para medicina e biotecnologia. Realize este procedimento sob a capa de fumaça para evitar a exposição a solventes orgânicos. O ácido oleico de platina e as nanoemulsões de platina KYF têm propriedades anticâncomas e, portanto, devem ser tratadas com cuidados especiais.
Este método é simples em termos de baixa atividade filabilator e equipamento, porém se baseia na aplicação adequada da estratégia de síntese e conceitos químicos subjacentes. Nosso método pode ser estendido para entregar outras pequenas moléculas de drogas. O núcleo de nanopartículas consiste em ácido oleico e, portanto, é adequado para encapsulamento de agentes hidrofóbicos.
