ここでは、異なるレベルの自然を持つ3つの場所を訪問した後、生物物理学的および心理的ストレスのレベルへの影響を調べるために使用されるプロトコルを提示する。私たちは、自然度の高いサイトが参加者のストレスレベルを下げるのを助けるのにより効果的であるかどうかを知ることに興味があります。自己報告アンケートを使用することに加えて、この技術を使用する主な利点は、参加者の唾液サンプルから収集されたコルチゾールとアミラーゼのレベルを分析することで、レクリエーションサイトへの訪問後に私たちの体が実際にどのように反応するかをより正確に読み取り、より良い理解を得ることができるということです。
この手順のデモンストレーションは、インディアナ大学の教授であるHocevar博士です。まず、自己紹介から始めます。研究の自主的な性質、目的、手順を説明する署名の同意書を提出します。
今後の識別のために被験者に赤い腕章を与えます。レクリエーション体験の直前、そしてその経験の結論の直後に、唾液サンプルを介してストレスレベルの生理学的および心理的尺度を取得する。受動よだれ法を用いて1~2ミリリットルの唾液サンプルを採取する。
被験者に唾液が口の中に溜まるのを許し、2インチのわらを下によだれを垂らし、1ミリリットルが採取されるまでクライオバイアルに入るように指示する。3 桁の ID 番号と文字が割り当てられたサンプルにラベルを付けて、データ収集のタイミングを示します。その後、ドライアイスを満たしたステロイドフォームボックスにサンプルを2時間以下で一時的に凍結する。
マークされたサンプルを実験室に運び、分析されるまでマイナス80°Cで保管してください。最後に、液体アミラーゼ試薬セットを使用して、唾液サンプル中のαアミラーゼを定量化します。次に、アッセイ中に温度制御温度を摂氏37度にして405ナノメートルで光学密度を読み取ることができるマルチモードリーダーを使用する。
まず、唾液サンプル中のコルチゾールを定量するコルチゾール酵素アミノ酸キットを取得し、450ナノメートルで光学密度、またはODを読み取る分光光度計と、プレートリーダーからのOD記録を使用して4つのパラメータロジスティックカーブフィッティングを行うことができるソフトウェアを取得します。すべての試薬を最低30分間摂氏20~25度に平衡させます。脱イオン水を用いてコルチゾールアッセイバッファーを1~5個希釈し、脱イオン水を用いて洗浄バッファーを1~20に希釈する。
次に、分析前に氷上のサンプルを解凍します。次いで、サンプルをコルチゾールアッセイ緩衝液で1~10に希釈し、調製後2時間以内に使用する。標準を準備するには、ガラス試験管に1から7のラベルを付けます。
次いで、225マイクロリットルのアッセイバッファーをチューブ番号1にパイプし、125マイクロリットルのバッファーを2〜7個のチューブに入れる。次に、25マイクロリットルのコルチゾールストック溶液をチューブ1に加え、渦を加える。最後に、チューブ番号1から125マイクロリットルのバッファーを取り除き、チューブナンバー2に追加してから、再び渦を加えます。
結果は、サイトA、自然の設定を訪問した後、唾液コルチゾールの有意なレベルの減少を示した。サイトBおよびCでコルチゾールのレベルに有意な変化は見られなかったが、さらに、被験者が3つの場所を訪問した後にアルファアミラーゼのレベルが増加し、自己報告アンケートを使用した後、要求および心配の要因に有意な減少が観察された。3つの場所のいずれにも因子張力に有意な変化は認められず、因子の喜びについてはサイトAとサイトBで有意な増加が報告された。
通常、ストレス軽減に関する研究の多くは、自己申告アンケートに依存しています。今回の研究では、参加者の唾液サンプルを採取し、自然度の異なる3つの部位を訪問した後、実際に身体がどのように反応するかを分析しました。この可視化では、実験室の技術と、充填されたデータ収集の一例の両方を取り上げました。
この技術は、研究者が異なる環境に対する私たちの体の反応をキャプチャすることができます。自然環境が人間の健康にプラスの影響を及ぼす可能性があるという仮説を確認する。今後の研究では、異なる自然環境や異なる屋外活動にストレスのレベルの生物物理学的測定を真の実験設計で適用することが示唆されています。
