Aqui apresentamos um protocolo, usado para examinar os efeitos sobre os níveis de estresse biofísico e psicológico após uma visitação a três locais com diferentes níveis de natureza. Estamos interessados em saber se um site com níveis mais altos de naturalidade será mais eficaz em ajudar os participantes a reduzir seus níveis de estresse. Além do uso do questionário de autorre relato, a principal vantagem do uso dessa técnica é que analisar os níveis de cortisol e amilase coletados das amostras de saliva dos participantes pode nos dar uma leitura mais precisa e uma melhor compreensão de como nosso corpo realmente responde após a visitação aos locais de recreação.
Demonstrando o procedimento estará o Dr. Hocevar, professor da Universidade de Indiana. Comece se apresentando ao assunto. Fornecer-lhes um formulário de consentimento para assinar explicando a natureza voluntária, propósito e procedimentos do estudo.
Dê ao sujeito uma braçadeira vermelha para identificação futura. Obtenha medidas fisiológicas e psicológicas dos níveis de estresse através de amostras de saliva, pouco antes da experiência recreativa, e imediatamente após a conclusão da experiência. Colete uma amostra de saliva de um a dois mililitros usando um método de baba passiva.
Instrua os sujeitos a permitir que a saliva se acumule em suas bocas, em seguida, babar pela palha de duas polegadas e para o frasco de criogeno até que um mililitro tenha sido coletado. Rotular amostras com um número de identificação de três dígitos atribuído e uma letra para indicar o tempo de coleta de dados. Então, congele temporariamente a amostra em uma caixa de espuma de esteroides cheia de gelo seco por não mais do que duas horas.
Transporte as amostras marcadas para um laboratório e armazene a menos 80 graus Celsius até ser analisado. Finalmente, use um reagente de amilase líquido para quantificar amilase alfa em amostras de saliva. Em seguida, use um leitor multi-modo capaz de ler uma densidade óptica a 405 nanômetros com a temperatura controlada a 37 graus Celsius durante o ensaio.
Primeiro, adquira um kit de aminoácidos de enzima de cortisol para quantificar o cortisol em amostras de saliva, um espectótmetro para ler uma densidade óptica, ou OD, a 450 nanômetros, bem como software capaz de usar gravações de OD do leitor de placas para realizar quatro encaixes de curva logística de parâmetro. Deixe que todos os reagentes se equilibrem a 20 a 25 graus Celsius por um mínimo de 30 minutos. Diluir o tampão de ensaio de cortisol de um a cinco utilizando água deionizada e diluir o tampão de lavagem de um a 20 usando água deionizada.
Em seguida, descongele as amostras no gelo antes da análise. Em seguida, diluir amostras de um a dez com tampão de ensaio de cortisol e usar dentro de duas horas de preparação. Para preparar os padrões, rotule os tubos de teste de vidro de um a sete.
Em seguida, pipet 225 microliters de tampão de ensaio em tubo número um, e 125 microliters de buffer em tubos de dois a sete. Em seguida, adicione 25 microliters da solução de estoque de cortisol ao tubo número um, e vórtice. Finalmente, remova 125 microliters de tampão do tubo número um e adicione-o ao tubo número dois, em seguida, vórtice novamente.
Os resultados indicaram uma diminuição nos níveis significativos de cortisol salivar após a visita ao local A, o ambiente natural. Não foram observadas alterações significativas nos níveis de cortisol nos locais B e C.Além disso, os níveis de amilase alfa aumentaram após os sujeitos visitarem o local C.Após a visitação aos três locais e utilizando os questionários de autorre relato, foram observadas reduções significativas nos fatores de demandas e preocupação. Não foram observadas alterações significativas na tensão do fator para nenhum dos três locais e aumentos significativos foram relatados nos locais A e local B para a alegria do fator.
Normalmente, grande parte das pesquisas feitas sobre redução do estresse tem se baseado em questionários de auto-relato. Neste estudo, coletamos amostras de saliva do participante para analisar como nosso corpo realmente responde após a visitação a três locais com diferentes níveis de naturalidade. Nessa visualização, apresentamos tanto uma técnica de laboratório quanto um exemplo da coleta de dados preenchida.
Essa técnica permite que o pesquisador capture a reação do nosso corpo a diferentes ambientes. Confirma nossa hipótese de que o ambiente natural pode ter efeitos positivos na saúde humana. Sugere-se que pesquisas futuras apliquem medidas biofísicas de nível de estresse em diferentes ambientes naturais ou diferentes atividades ao ar livre com verdadeiro design experimental.
