Qui presentiamo un protocollo, utilizzato per esaminare gli effetti sui livelli di stress biofisico e psicologico a seguito di una visita in tre luoghi con diversi livelli di natura. Siamo interessati a sapere se un sito con livelli più elevati di naturalezza sarà più efficace nell'aiutare i partecipanti a ridurre i loro livelli di stress. Oltre a utilizzare il questionario di auto-report, il vantaggio principale dell'utilizzo di questa tecnica è che l'analisi dei livelli di cortisolo e amilasi raccolti dai partecipanti campioni di saliva può darci una lettura più accurata e una migliore comprensione di come il nostro corpo risponde effettivamente dopo la visita ai siti ricreativi.
A dimostrare la procedura sarà il Dr.Hocevar, professore dell'Università dell'Indiana. Inizia presentandoti all'argomento. Fornire loro un modulo di consenso per firmare spiegando la natura volontaria, lo scopo e le procedure dello studio.
Dare al soggetto una fascia rossa per un'identificazione futura. Ottenere misure fisiologiche e psicologiche dei livelli di stress tramite campioni di saliva, appena prima dell'esperienza ricreativa e immediatamente dopo la conclusione dell'esperienza. Raccogliere un campione di saliva da uno a due millilitri utilizzando un metodo di sbavatore passivo.
Istruisci i soggetti a consentire alla saliva di mettere in comune in bocca, quindi sbava lungo la cannuccia da due pollici e nella fiala crio fino a quando non è stato raccolto un millilitro. Esempi di etichette con un numero ID a tre cifre assegnato e una lettera per indicare la tempistica della raccolta dei dati. Quindi, congelare temporaneamente il campione in una scatola di schiuma steroidea piena di ghiaccio secco per non più di due ore.
Trasportare i campioni contrassegnati in un laboratorio e conservare a meno 80 gradi Celsius fino a quando non vengono analizzati. Infine, utilizzare un reagente liquido di amilasi impostato per quantificare l'amilasi alfa nei campioni di saliva. Quindi, utilizzare un lettore multimobile in grado di leggere una densità ottica a 405 nanometri con la temperatura controllata a 37 gradi Celsius durante il saggio.
In primo luogo, acquisire un kit amminoacido enzimatico cortisolo per quantificare il cortisolo nei campioni di saliva, uno spettrofotometro per leggere una densità ottica, o OD, a 450 nanometri e un software in grado di utilizzare registrazioni OD dal lettore di lastre per eseguire il montaggio della curva logistica a quattro parametri. Lasciare che tutti i reagenti equilibrano a 20-25 gradi Celsius per un minimo di 30 minuti. Diluire il tampone di dosaggio del cortisolo da uno a cinque utilizzando acqua deionizzata, quindi diluire il tampone di lavaggio da uno a 20 utilizzando acqua deionizzata.
Quindi, scongelare i campioni sul ghiaccio prima dell'analisi. Quindi, diluire i campioni da uno a 10 con tampone di dosaggio di cortisolo e utilizzare entro due ore dalla preparazione. Per preparare gli standard, etichettare le provette in vetro da una a sette.
Quindi, pipettare 225 microlitri di tampone di dosaggio nel tubo numero uno e 125 microlitri di tampone in tubi da due a sette. Successivamente, aggiungere 25 microlitri della soluzione di cortisolo al tubo numero uno e al vortice. Infine, rimuovere 125 microlitri di tampone dal tubo numero uno e aggiungerlo al tubo numero due, quindi di nuovo vortice.
I risultati hanno indicato una diminuzione dei livelli significativi di cortisolo salivare dopo aver visitato il sito A, l'ambiente naturale. Non sono stati osservati cambiamenti significativi nei livelli di cortisolo nel sito B e C.Inoltre, i livelli di alfa amilasi sono aumentati dopo che i soggetti hanno visitato il sito C.Dopo la visita nelle tre località e l'utilizzo dei questionari di auto-segnalazione, sono state osservate diminuzioni significative dei fattori di domanda e preoccupazione. Non sono stati osservati cambiamenti significativi nella tensione del fattore per nessuna delle tre località e sono stati segnalati aumenti significativi nei siti A e nel sito B per la gioia del fattore.
In genere, gran parte della ricerca sulla riduzione dello stress si è basata su questionari di auto-segnalazione. In questo studio, abbiamo raccolto i campioni di saliva dei partecipanti per analizzare come il nostro corpo risponde effettivamente dopo la visita a tre siti con diversi livelli di naturalezza. In questa visualizzazione, abbiamo presentato sia una tecniche di laboratorio che un esempio della raccolta di dati riempiti.
Questa tecnica consente al ricercatore di catturare la reazione del nostro corpo a diversi ambienti. Conferma la nostra ipotesi che l'ambiente naturale possa avere effetti positivi sulla salute umana. Si suggerisce una ricerca futura per applicare misurazioni biofisiche del livello di stress in diversi ambienti naturali o diverse attività all'aperto con un vero design sperimentale.
