El trasplante renal en ratones es esencial para el estudio de los mecanismos de rechazo agudo y crónico del aloinjerto. Aquí presentamos una nueva técnica quirúrgica para la anastomosis de vasos y la implantación ureteral en el modelo de trasplante renal abdominal en ratones. En los modelos tradicionales de trasplante renal de ratón, la parte superior de la aorta se liga aproximadamente a las arterias renales.
La vena renal izquierda del donante se transecta en la vena cava y la aorta del donante se divide por igual debajo de la arteria renal para ser posteriormente anastomosis a la aorta abdominal del receptor. En esta técnica modificada del trasplante de riñón de ratón, la vena renal izquierda del donante también se transecta en la vena cava, pero la aorta del donante se corta por encima de la descendencia de la arteria renal y su anastomosis a la aorta abdominal receptora. Mientras que el extremo donante de la aorta se liga, la arteria ureteral se conserva deliberadamente.
Ahora comenzamos la demostración del procedimiento quirúrgico. Para la anestesia, coloque el ratón en la caja para la inhalación de isoflurano unos 40 a 60 segundos con el fin de inducir la inconsciencia. Una vez que el ratón esté anestesiado, pese el ratón.
De acuerdo con el peso del ratón, la inyección intraperitoneal de ketamina, xilazina, acepromazina se administra al ratón anestesiado. Cuando la anestesia haya hecho efecto, recorte el pelaje abdominal. Luego, fije y desinfecte el mouse en la mesa de operaciones.
Corte la piel con la incisión abdominal cruzada. Cortar los músculos de la pared abdominal. A continuación, cubra con precaución aleje las vísceras con una gasa salina bebida.
Exponga el riñón izquierdo, la aorta y la vena cava inferior. Cauterice cuidadosamente las venas lumbares izquierdas, incluidas sus ramas subyacentes y otros vasos pequeños, incluido el vaso suprarrenal izquierdo. Movilizar la región aórtica entre las arterias renales izquierda y derecha de aproximadamente dos milímetros de longitud.
Separe la vena cava inferior infrarrenal y la aorta. Y pase pinzas curvas debajo de la aorta para colocar una corbata suelta de sutura 7.06 alrededor de este vaso. Pinza cruzada el área de la aorta por debajo de la arteria renal derecha y la vena cava inferior utilizando dos pinzas microvasculares de cinco milímetros.
Transecte la vena renal izquierda de la vena cava. Enjuague la aorta con un mililitro de solución de heparina. Apriete la ligadura y corte la aorta por debajo de la ligadura, así como por debajo de la pinza proximal.
Prepárese cuidadosamente, de modo que la delicada arteria ureteral se conserve por completo. liberar completamente el riñón izquierdo y los vasos asociados cauterizando cautelosamente todos los vasos que rodean el tejido. Retire el riñón y guárdelo en una solución de línea celular a cuatro grados.
Los pasos iniciales de la operación son similares a los mostrados previamente para el ratón donante, incluida la anestesia y la desinfección. Abra el abdomen a través de la incisión mediana, luego cubra los órganos abdominales con una gasa húmeda con solución salina. Conserve cuidadosamente la aorta infrarrenal y asegúrese de que cada rama de vaso grande esté cauterizada.
Use el cauterizado eléctrico para diseccionar el uréter izquierdo cuidadosamente en una posición proximal a la pelvis renal. Luego, retire el riñón izquierdo. Exponga la vena cava inferior y la aorta abdominal y deséctelas del tejido adiposo circundante de aproximadamente más de cuatro milímetros de longitud.
A continuación, pinza cruzada cada una con dos pinzas microvasculares aproximadamente y distalmente de ellas. Use un soporte de microaguja para guiar una aguja de sutura de monofilamento 10/0, que se coloca a través de la pared de la aorta de manera proximal a distal. Una arteriotomía elíptica de aproximadamente un milímetro se logra mediante una suave tracción hacia arriba de la sutura, mientras se corta directamente debajo de la cara inferior de la aguja con tijeras finas y curvas.
Realizar la anastomosis de la aorta donante-receptor de forma integral. Coser los extremos proximal y distal de la anastomosis. Última puntada usando dos suturas 10.0 separadas.
Después de atar, deje las dos suturas largas, incluida la aguja, en su lugar. Cose el lado izquierdo de la pared aortal de la anastomosis continuamente con dos puntos espaciados uniformemente en dirección distal-proximal. Después de la última puntada, guíe la sutura a través de un grosor parcial de la pared del recipiente por encima de la atadura de sutura de soporte superior y al mismo tiempo ejerza una tracción suave hasta el extremo corto de la atadura de sutura inferior.
Tenga en cuenta que, en esta nueva técnica sin nudos, la última puntada no está atada al extremo corto de la corbata superior. Voltee el riñón trasplantado a su posición normal. Ahora cose continuamente la pared derecha de la anastomosis aortal de manera proximal a distal utilizando tres puntos de sutura de manera proximal a distal.
Tenga en cuenta que, en comparación con la técnica quirúrgica convencional, la última sutura se fusiona con la corbata distal cercana. No lo ate al extremo de la sutura inferior, córtelo para dejar una longitud libre de alrededor de dos a tres milímetros en su lugar. Cortar la vena cava inferior longitudinal con una longitud suficiente de aproximadamente 1,5 milímetros.
Coloque esta incisión ligeramente por debajo de su contraparte aórtica. Realice la anastomosis venosa utilizando el mismo procedimiento de sutura descrito anteriormente con la diferencia de que se necesitan de cuatro a cinco puntos de sutura para cada lado de la anastomosis. La puntada final se deja como un extremo libre de longitud similar a la anastomosis aortal descrita anteriormente.
Y la nueva técnica de anastomosis sin nudos, la última puntada no se ata sino que se deja libre. Esto acorta el tiempo de la operación y permite al cirujano aumentar o disminuir el tamaño de la anastomosis. Esta mejora reduce la dificultad y las complicaciones posteriores a la operación de la anastomosis vascular.
Después de completar ambas anastomosis, use un hisopo seco para ejercer una presión suave hacia el área suturada durante aproximadamente 10 a 20 segundos. Después de eso, se pueden quitar ambas abrazaderas. Penetre a través de la vejiga urinaria del receptor con una aguja recta con sutura 10.0 e insértela en un lumen de aguja de 21 G para guiarlo.
Ahora guíe la aguja de 21 G para coser un agujero en el lugar de la aplicación anterior de la aguja y extraiga la aguja. Sutura el extremo del uréter recortado y perfore la vejiga con esta sutura 10.0 nuevamente en el lugar de su entrada. Remolcar el filamento 10.0 y el uréter a la vejiga de orina a través del orificio construido.
Anastomose el uréter del donante a la vejiga urinaria del receptor. Aquí, conecte la membrana externa del uréter a la membrana externa de la pared de la vejiga y realice suturas intermitentes con tres o cuatro puntos de sutura. Saque la sutura de tracción.
Coloque los intestinos de nuevo en la cavidad abdominal. Realizar suturas de dos capas, primero los músculos abdominales seguidos de la piel para cerrar la herida abdominal. Coloque a los ratones trasplantados en una cámara de oxígeno y temperatura controlada para recuperarse después de la cirugía.
Administrar analgesia postoperatoria adecuada cuatro días consecutivos después de la operación. Realizar nefrectomía contralateral del ratón receptor cinco días después de la anestesia del trasplante. Eleva y registra el estado del ratón.
Se compararon las técnicas de trasplante convencionales y modificadas mediante la evaluación de los cambios histológicos de los riñones del isonjerto trasplantado versus los riñones contralaterales del receptor nativo. No se encontró que tanto el grado del trofeo de los túbulos renales como la fibrosis intersticial renal fueran significativamente diferentes cuatro y 12 semanas después del trasplante, respectivamente. Previamente investigamos el resultado de esta nueva técnica sin nudos y lo comparamos con el enfoque clásico en cuanto a los aspectos técnicos del procedimiento interoperativo y las complicaciones postoperatorias.
La técnica modificada que se muestra aquí se asoció con una menor ocurrencia de eventos trombóticos venosos arteriales intrainjertos. El tiempo para realizar la estenosis fue significativamente menor y se logró un excelente isograma renal, supervivencia a largo plazo. El trasplante de riñón en ratones es un procedimiento complicado y de vanguardia.
Se trata de una nueva técnica quirúrgica para la anastomosis de un vaso y la implantación renal comprometida con mejorar la tasa de éxito general, lo que la convierte en una herramienta fiable para estudiar la respuesta autoinmune tras el trasplante renal.
