Die Nierentransplantation bei Mäusen ist für die Untersuchung der Mechanismen der akuten und einer chronischen Allotransplantatabstoßung unerlässlich. Hier stellen wir eine neue Operationstechnik zur Gefäßanastomose und der ureteralen Implantation im abdominalen Nierentransplantationsmodell bei Mäusen vor. In traditionellen Nierentransplantationsmodellen der Maus ist der obere Teil der Aorta ungefähr zu den Nierenarterien ligiert.
Die linke Nierenvene des Spenders wird an der Hohlvene durchblutet und die Spenderaorta wird unterhalb der Nierenarterie gleichmäßig geteilt, um später an die Bauchaorta des Empfängers anastomosiert zu werden. Bei dieser modifizierten Technik der Mausnierentransplantation wird die linke Nierenvene des Spenders auch an der Hohlvene transzediert, aber die Spenderaorta wird oberhalb des Nachwuchses der Nierenarterie und ihrer Anastomose zur abdominalen Aorta des Empfängers geschnitten. Während das Spenderende der Aorta ligiert ist, bleibt die Harnleiterarterie bewusst erhalten.
Nun beginnen wir mit der Demonstration des chirurgischen Eingriffs. Für die Anästhesie, legen Sie die Maus in die Box zum Einatmen von Isofluran etwa 40 bis 60 Sekunden, um Bewusstlosigkeit zu induzieren. Sobald die Maus betäubt ist, wiegen Sie die Maus.
Entsprechend dem Gewicht der Maus wird der betäubten Maus intraperitoneale Injektion von Ketamin, Xylat und Acepromazin verabreicht. Wenn die Anästhesie wirksam geworden ist, schneiden Sie das Bauchfell ab. Beheben und desinfizieren Sie dann die Maus auf dem Operationstisch.
Schneiden Sie die Haut mit dem Kreuzbauchschnitt ab. Schneiden Sie die Muskeln der Bauchdecke ab. Als nächstes bedecken Sie vorsichtig die Eingeweide mit einer salzhaltigen Gaze weg.
Legen Sie die linke Niere, die Aorta und die Hohlvene inferior frei. Kauterisieren Sie die linken Lendenwirbelvenen, einschließlich ihrer darunter liegenden Äste und andere kleine Gefäße einschließlich des linken Nebennierengefäßes, sorgfältig. Mobilisieren Sie die Aortenregion zwischen den linken und rechten Nierenarterien von etwa zwei Millimetern Länge.
Trennen Sie die infrarenale Vena cava inferior und die Aorta. Und passieren Sie gekrümmte Pinzetten unter der Aorta, um eine lose Bindung von 7,06 Naht um dieses Gefäß zu legen. Kreuzklemmen Sie den Bereich der Aorta unterhalb der rechten Nierenarterie und der unteren Hohlvene mit zwei fünf Millimeter Mikrovaskulärklemmen ein.
Transsektieren Sie die linke Nierenvene aus der Vena cava. Spülen Sie die Aorta mit einem Milliliter Heparinlösung. Ziehen Sie die Ligatur fest und schneiden Sie die Aorta sowohl unterhalb der Ligatur als auch unterhalb der proximalen Klemme ab.
Bereiten Sie sich sorgfältig vor, damit die empfindliche Harnleiterarterie vollständig erhalten bleibt. Befreien Sie die linke Niere und die damit verbundenen Gefäße vollständig, indem Sie vorsichtig alle Gefäße, die das Gewebe umgeben, kauterisieren. Entfernen Sie die Niere und lagern Sie sie in Zelllinienlösung bei vier Grad.
Die ersten Operationsschritte ähneln denen, die zuvor für die Spendermaus gezeigt wurden, einschließlich Anästhesie und Desinfektion. Öffnen Sie den Bauch über einen medianen Schnitt und bedecken Sie dann die Bauchorgane mit einer feuchten Gaze mit Kochsalzlösung. Bewahren Sie die infrarenale Aorta sorgfältig auf und stellen Sie sicher, dass jeder große Gefäßzweig kauterisiert ist.
Verwenden Sie die elektrische Kauterisation, um den linken Harnleiter vorsichtig an einer Position proximal zum Nierenbecken zu sezieren. Entfernen Sie dann die linke Niere. Legen Sie die untere Hohlvene und die Bauchaorta frei und lösen Sie sie vom umgebenden Fettgewebe mit einer Länge von etwa vier Millimetern.
Dann Kreuzklemme jeweils mit zwei mikrovaskulären Klemmen ungefähr und distal von ihnen. Verwenden Sie einen Mikronadelhalter, um eine 10/0 monofile Nahtnadel zu führen, die von proximaler zu distaler Weise durch die Aortenwand gelegt wird. Eine elliptische Arteriotomie von etwa einem Millimeter wird durch sanftes Aufwärtsziehen der Naht erreicht, während mit einer feinen, gebogenen Schere direkt unterhalb der unteren Nadelfläche geschnitten wird.
Führen Sie die Spender-Empfänger-Aorta-Anastomose in einer End-to-Side-Weise durch. Stitchen Sie die proximalen und distalen Enden der Anastomose. Letzter Stich mit zwei separaten 10.0-Nähten.
Lassen Sie nach dem Binden die beiden langen Nähte, einschließlich der Nadel, an Ort und Stelle. Nähen Sie die linke Seite der Aortenwand der Anastomose kontinuierlich mit zwei gleichmäßig verteilten Stichen in distal-proximaler Richtung. Nach dem letzten Stich führen Sie die Naht durch eine Teildicke der Gefäßwand oberhalb der oberen Schrägnahtbindung und üben gleichzeitig sanfte Traktion bis zum kurzen Ende der unteren Nahtbindung aus.
Beachten Sie, dass bei dieser neuen knotenlosen Technik der letzte Stich nicht an das kurze Ende der oberen Bindung gebunden ist. Drehen Sie die transplantierte Niere in ihre normale Position. Nähen Sie nun kontinuierlich die rechte Wand der Aortenanastomose proximal zu distal mit drei Stichen proximal zu distal.
Beachten Sie, dass im Vergleich zur herkömmlichen Operationstechnik die letzte Naht mit der distalen Krawatte in der Nähe verschmolzen wird. Binden Sie es nicht an das Ende der unteren Naht, sondern schneiden Sie es ab, um stattdessen eine freie Länge von etwa zwei bis drei Millimetern zu erhalten. Schneiden Sie die untere Hohlvene längs mit einer ausreichenden Länge von ca. 1,5 Millimetern ab.
Positionieren Sie diesen Schnitt leicht unter seinem Aortengegenstück. Führen Sie die venöse Anastomose mit dem gleichen Nahtverfahren wie zuvor beschrieben durch, mit dem Unterschied, dass für jede Seite der Anastomose vier bis fünf Stiche erforderlich sind. Der letzte Stich wird als freies Ende von ähnlicher Länge ähnlich der oben beschriebenen Aortenanastomose belassen.
Und die neue knotenlose Anastomose-Technik, der letzte Stich wird nicht gebunden, sondern frei gelassen. Dies verkürzt die Operationszeit und ermöglicht es dem Chirurgen, die Größe der Anastomose zu erhöhen oder zu verringern. Diese Verbesserung reduziert die Schwierigkeit und die Komplikationen nach der Operation der vaskulären Anastomose.
Nachdem Sie beide Anastomosen abgeschlossen haben, verwenden Sie ein trockenes Tupfer, um etwa 10 bis 20 Sekunden lang sanften Druck auf den vernähten Bereich auszuüben. Danach können beide Klemmen entfernt werden. Dringen Sie mit einer geraden Nadel mit 10.0-Naht durch die Urinblase des Empfängers ein und führen Sie sie zur Orientierung in ein 21-G-Nadellumen ein.
Führen Sie nun die 21 G Nadel, um ein Loch an der Stelle der vorherigen Nadelapplikation zu nähen und die Nadel herauszuziehen. Nähen Sie das getrimmte Harnleiterende und perforieren Sie die Blase mit dieser 10.0-Naht erneut an der Stelle ihres Eintritts. Schleppen Sie das 10.0-Filament und den Harnleiter durch das konstruierte Loch in die Urinblase.
Anastomose des Harnleiters des Spenders an die Urinblase des Empfängers. Verbinden Sie hier die äußere Membran des Harnleiters mit der äußeren Membran der Blasenwand und führen Sie intermittierende Nähte mit drei bis vier Stichen durch. Ziehen Sie die Traktionsnaht heraus.
Legen Sie den Darm zurück in die Bauchhöhle. Führen Sie zweischichtige Nähte durch, zuerst die Bauchmuskeln, gefolgt von der Haut, um die Bauchwunde zu schließen. Legen Sie die transplantierten Mäuse in eine sauerstoff- und temperaturkontrollierte Kammer, um sich nach der Operation zu erholen.
Geben Sie eine angemessene postoperative Analgesie vier aufeinanderfolgende Tage nach der Operation. Führen Sie fünf Tage nach der Transplantationsanästhesie eine kontralaterale Nephrektomie der Empfängermaus durch. Heben Sie den Zustand der Maus an und zeichnen Sie ihn auf.
Wir verglichen die konventionellen und modifizierten Transplantationstechniken, indem wir histologische Veränderungen der transplantierten Isotransplantatnieren im Vergleich zu den kontralateralen Nieren des nativen Empfängers bewerteten. Sowohl der Grad der Trophäe der Nierentubuli als auch die renale interstitielle Fibrose unterschieden sich vier bzw. 12 Wochen nach der Transplantation nicht signifikant. Zuvor haben wir das Ergebnis dieser neuen knotenlosen Technik untersucht und mit dem klassischen Ansatz in Bezug auf die technischen Aspekte des Verfahrens interoperative und postoperative Komplikationen verglichen.
Die modifizierte Technik, die hier gezeigt wird, war mit einem geringeren Auftreten von intratransplantierten arteriellen venösen thrombotischen Ereignissen verbunden. Die Zeit, um die Stenose durchzuführen, war signifikant kürzer und ein ausgezeichnetes Nierenisotransplantat, ein langfristiges Überleben wurde erreicht. Die Nierentransplantation bei Mäusen ist ein kompliziertes und innovatives Verfahren.
Dies ist eine neue chirurgische Technik für eine Gefäßanastomose und Nierenimplantation, die die Gesamterfolgsrate verbessern soll, was sie zu einem zuverlässigen Werkzeug für die Untersuchung der Autoimmunreaktion nach einer Nierentransplantation macht.
