1차 항체의 첨가를 시작하기 위해, 10 마이크로리터의 BSA 용액을 웰에 남겨두고 고정되고 차단된 형질주입된 HeLa 세포로부터 소 혈청 알부민 또는 BSA를 흡인한다. 그런 다음 PBS에 3 % BSA로 제조 된 1 차 항체 용액 10 마이크로 리터를 넣고 섭씨 4 도의 어두운 곳에서 밤새 배양합니다. 인큐베이션 후, 100 마이크로리터의 PBS로 각 웰을 4회 헹구고, 마지막 세척 후 10 마이크로리터를 남긴다.
다음으로, 10 마이크로리터의 2차 항체 용액을 384 웰 플레이트에 첨가한다. Alexa Fluor 488 및 Alexa Fluor 555와 같은 형광색소에 접합된 이소타입 특이적 항체를 사용합니다. 플레이트를 1시간 동안 암실에서 인큐베이션한 후, 각 웰을 100 마이크로리터의 PBS로 4회 헹구고, 마지막 세척 후 웰에 50 마이크로리터의 PBS를 남겨둔다.
항-DNA 항체의 사용은 주어진 실험 조건 하에서 세포에서 미토콘드리아 DNA 분포의 모니터링을 허용하였다. 미토콘드리아 전사 인자 A TFAM의 하향 조절은 대조군 세포보다 미토콘드리아 DNA 스팟이 적고 미토콘드리아 DNA 분포에 급격한 변화를 가져왔습니다. 항-DNA 항체로부터의 평균 형광 신호를 정량화하는 것은 시험된 다른 조건들에 비해 TFAM 침묵 시 몇 배 증가를 보여주었다.
