시작하려면 작업 플랫폼에 필요한 실험 재료를 정렬합니다. 100 마이크로 리터의 멸균 0.4 % 젤라틴 용액을 검은 색 벽의 96 웰 투명 바닥 플레이트의 웰에 추가합니다. 접시를 섭씨 37도, 이산화탄소 5%에서 30분 동안 배양합니다.
도립 현미경으로 T75 플라스크의 내피 세포가 80-100% 합류하는지 확인합니다. 흡입을 통해 플라스크에서 DMEM complete medium을 제거합니다. 세포를 세척하려면 PBS 10ml를 넣고 플라스크를 부드럽게 흔듭니다.
PBS를 5mL의 세포 해리 용액으로 교체합니다. 플라스크를 섭씨 37도, 이산화탄소 5%에서 약 12분 동안 배양합니다. 6분 후에 플라스크를 누릅니다.
해리를 촉진하는 데 도움이 됩니다. 5ml의 예열된 DMEM complete medium을 플라스크에 넣고 셀 현탁액을 혼합합니다. 10 밀리리터 혈청학적 피펫을 사용하여 세포 현탁액을 멸균 50 밀리리터 튜브에 옮기고 150 G에서 5분 동안 원심분리합니다.
그 동안 진공 장치에 연결된 목사 피펫을 사용하여 96 웰 플레이트에서 젤라틴 용액을 흡입합니다. 세포의 원심분리 후에, 펠릿을 방해하지 않고 튜브에서 슈퍼나틴을 제거하십시오. 혈청학적 피펫을 사용하여 8ml의 신선한 DMEM complete medium을 튜브에 넣고 현탁액을 부드럽게 피펫팅하여 세포 펠릿을 분해합니다.
혈구계에서 trippen blue를 사용하여 세포를 계산합니다. 600의 조밀도를 만들기 위하여 DMEM 완전한 매체, 밀리리터 현탁액 당 000의 세포를 추가하십시오. 튜브를 부드럽게 뒤집어 셀 현탁액을 혼합합니다.
셀 현탁액을 50 mL 멀티채널 피펫 reservoir에 추가합니다. 30초마다 저장소를 좌우로 부드럽게 흔들어 현탁액을 혼합하고 다중 채널 피펫을 사용하여 젤라틴으로 코팅된 100웰 플레이트의 각 웰에 96마이크로리터를 추가합니다. 투명 플레이트 커버를 교체하고 멸균 후드 표면에 플레이트를 북쪽에서 남쪽으로, 동쪽에서 서쪽으로 밀어 플레이트를 부드럽게 흔듭니다.
섭씨 37도에서 16-24시간 동안 이산화탄소 5%와 함께 접시를 배양합니다.
