저자는 AH에 생명 수상 Un​​iversity of Florida의 과학 하워드 휴즈 의학 연구소 감사

1. 카세트를 준비 <ol><li> 클린 앞면과 뒷면 사용 Invitrogen Nupage Novex minigel 카세트, 또는 기타 상업적 minigel 카세트의 접시. </li><li> 플라스틱 에폭시의 약 1-3 ML을 준비하고 제조 업체의 지시에 따라 잘 섞는다. </li><li> 카세트가 조립되면 두 접시가 접촉되는 전면 판의 안쪽 가장자리에 에폭시를 적용합니다. </li><li> 오프닝을 막기에서 초과 에폭시을 방지하기 위해 카세트를 조립하면 다시 접시의 바닥 슬릿을 통해 필터 종이 또는 판지의 조각을 밀어 넣습니다. 즉시 두 접시가 조립되는대로 필터 종이를 제거합니다. </li><li> 꽉 도장을위한 가장자리를 따라 바인더 클립을 놓고 카세트가 완전히 치료 에폭시를 위해 하룻밤 사이에 앉자. </li><li> 전기 테이프로 다시 접시의 바닥에 슬릿을 봉쇄해. </li></ol> 2. 해결 젤을하고 있는걸 <ol><li> 125 ML 사이드 암 플라스크에 다음을 추가합니다4X 트리스 - 자료 해결 젤 버퍼 산도 8.70, 30.8 %의 아크릴 아미드 / bisacrylamide의 3.50 ML, 유형 3.25 ML의 2.25 ML 9 ML의 총 부피를 위해서 시약 학년 물 (IRG-H 2 O). </li><li> 드 가스 진공 장치로 플라스크의 측면 팔을 부착하고, 플라스크의 상단에 거꾸로 마개를 삽입하여 10 분, 대한​​ 솔루션입니다. </li><li> 50 ML 일회용 폴리 프로필렌의 원심 관에 드 기름 솔루션의 9​​ ML 전송 30 10 % ammounium의 persulfate (APS)의 μl와 N의 μl 6, N, N &#39;, N&#39;- tetramethylethylenediamine (TEMED)와 믹스를 추가 거품을 도입 피하기 위해 솔루션을 소용돌이에 의해 잘. </li><li> 바로 그것이 겔 접시 사이에 형성에서 모든 거품을 방지하기 위해 카세트의 측면을 실행할 수 있도록 카세트에 솔루션을 붓는다. 앞면 (짧은) 접시의 맨 가장자리에서 약 2cm로 카세트를 채우십시오. </li><li> 부드럽게 1X 해결 겔 버퍼로 포화 1-butanol 0.5 ML을 추가하고 젤은 1 중합하자시간. </li></ol> 3. 스태킹 젤을하고 있는걸 <ol><li> 4X 트리스베이스 스태킹 겔 버퍼 산도 6.80, 30.8 %의 아크릴 아미드 / bisacrylamide의 0.40 ML, 3 ML 총 볼륨 IRG-H 2 O의 1.85 ML의 0.75 ML : 125 ML 사이드 암 플라스크에 다음을 추가합니다. </li><li> 드 가스 단계는 2 단계에 설명된대로 10 분, 대한​​ 솔루션입니다. </li><li> 스태킹 겔 솔루션 degassing되는 동안 해결 젤 상단에서 1X 해결 젤 버퍼로 포화 1-butanol을 붓는다. IRG-H 2 O를 함께 한 해결 젤의 상단을 씻어 물을 붓고하고 남은 액체를 흡수하기 위해 물을 빨아들이는이나 워트 먼지 필터 용지를 사용합니다. </li><li> 당신의 degassed 솔루션 3 ML을 제거하고 10 %의 APS와 TEMED 2 μl 9 μl를 추가하고 잘 섞는다. </li><li> 신속하게 그것이 짧은 프런트 겔 판의 상단 가장자리 근처에까지 그것이 카세트의 측면을 실행할 수 있도록 카세트에 솔루션을 붓는다. </li><li> , 겔 카세트 상단으로 클린 겔 빗을를 삽입그 장소에서 개최 빗 위에 카세트에서 바인더 클립을 넣으십시오. 스태킹 겔은 하룻밤 사이에 1 시간 동안 중합하자. </li></ol> 4. 젤 저장 <ol><li> 겔 완전히 polymerized되면​​ 바인더 클립을 제거하고 열을 sealable 플라스틱 주머니에있는 카세트, 또는 다시 sealable 비닐 봉투를 넣습니다. </li><li> 주머니에 0.1 %의 나트륨 azide를 포함 1X 스태킹 겔 버퍼 20 ML 하거라. </li><li> 5 초 동안 주머니를 밀봉하고 봉투에는 누수가 없는지 확인 열정. </li><li> 4 ° C.에서 젤을 저장 </li></ol> 5. 샘플 준비 <ol><li> 얇은 벽으로 둘러싸인 microcentrifuge 튜브에서 단백질 샘플의 6.5 μl, 대한 2X Novex 트리스 - 글리신 SDS 샘플 버퍼, 100 MM dithiothreitol (DTT)과 IRG-H 2 O 1 μl (필요한 경우) 7.5 μl에 추가 15 μl의 총 부피. </li><li> vortexing하여 샘플을 섞어서하고, 간략하게 튜브의 바닥에 내용을 가져 샘플을 원심 분리기. </li> &lt;리&gt; 변성 70 샘플 ° C ~ 10 분입니다. </li></ol> 6. 젤 실행하기 <ol><li> Novex 겔 장치를 설정합니다. </li><li> 내부 챔버에 Nupage 항산화 500 μl, 그리고 트리스 - 글리신은 바깥 실로 버퍼를 실행하면 300 ML을 포함 트리스 - 글리신 나오는 버퍼 200 ML을 추가합니다. </li><li> 겔로드 피펫 팁을 사용하는 우물에 변성 단백질 샘플 (15 μl)을로드합니다. </li><li> 60-70 분 200 V에서 젤을 실행합니다. </li></ol> 7. 젤 염색법 <ol><li> 겔 장치에서 카세트를 제거하고 겔 나이프 또는 빳빳한 퍼티 나이프를 사용하여 별개의 두 플라스틱 겔 접시를 떼어 내려고하면 에폭시 도장을 깰. 젤 찢어하지 않도록 돌보는 접시에서 젤을 조심스럽게 분리. </li><li> IRG-H와 젤 부드러운 선동 2 O를 세 번 씻어. </li><li> 부드러운 교반과 1 시간 Invitrogen SimplyBlue SafeStain와 젤 청바지. </li><li> 염색법 솔루션을 붓고IRG-H 2 O를 가진 젤 destain </li></ol> 8. 카세트 청소 <ol><li> 그들이 다시 재사 용할 수 있도록 카세트의 모든 에폭시 긁어서거나 껍질하는 금속 주걱을 사용합니다. </li><li> 순한 세제 용액으로 플라스틱 겔 접시 각각 씻어하고, 증류수 다음 수돗물로 잘 씻어. </li></ol> 9. 대표 결과 에폭시가 물 방지 시일 (그림 1)을 형성하므로, 카세트는 아크릴 아미드 솔루션은 그들에 부어 때 누출되지 않습니다. 또한, 겔 카세트 쉽게 염색법을위한 젤을 검색할 열 수 있으며 에폭시들은 지속적인 재사용을 허용하기 위해 카세트 놔 벗겨 수 있습니다. 그림 2에 표시된 바와 같이, 젤은 단백질 마커와 일상 단백질 전기 영동에 적합한 샘플 밴드의 명확한 분리를 보여줍니다. <img src="/files/ftp_upload/3465/3465fig1.jpg" alt="그림 1" /> 1 그림. Appliminigel 카세트를 봉인하기 위해 에폭시의 양이온이. 에폭시의 박막 층을 조립 이전 카세트 중 하나의 가장자리에 적용됩니다. 에폭시를 강조하기 위해서는 해당 이미지의 허위 - 붉은 색이었다. <img src="/files/ftp_upload/3465/3465fig2.jpg" alt="그림 2" /> 그림 2. SDS-트리스 - 글리신 젤의 단백질의 분리는 다시 사용 minigel 카세트를 사용하여 부어. 위에서 설명한대로 SDS-PAGE이 수행되었다. 다음은 전기 영동은 겔이 제조 업체의 지침에 따라 SimplyBlue SafeStain으로 물들일 minigel 카세트, 제거 및 전송 하얀 빛을 이용하여 촬영되었다. 레인 M은 SeeBlue Plus2 사전 묻은 단백질 표준을 포함​​하고 있습니다. 차선 M의 단백질의 분자 무게는 kilodaltons (kDa)에서 젤 오른쪽에 표시됩니다. 다른 차선은 글루타티온-S-transferase (GST) - 태그가 단백질을 표현 박테리아로부터 허가 lysate에서 단백질을 보여줍니다. 표시된 단백질은 g에서 씻어 복이 있나니GST-태그를 단백질의 용출 이전 lutathione 비즈.

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	<li>Laemmli, U. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleavage+of+structural+proteins+during+the+assembly+of+the+head+of+bacteriophage+T4.">Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4.</a> Nature. 227, 680-685 (1970).</li><li>Raymond, S., Weintraub, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acrylamide+gel+as+a+supporting+medium+for+zone+electrophoresis.">Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis.</a> Science. 130, 711-711 (1959).</li><li>Sch&#228;gger, H., von Jagow, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tricine-sodium+dodecyl+sulfate-polyacrylamide+gel+electrophoresis+for+the+separation+of+proteins+in+the+range+from+1+to+100+kDa.">Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa.</a> Anal. Biochem. 166, 368-379 (1987).</li><li>Shapiro, A. L., Vi&#241;uela, E., Maizel, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+weight+estimation+of+polypeptide+chains+by+electrophoresis+in+SDS-polyacrylamide+gels.">Molecular weight estimation of polypeptide chains by electrophoresis in SDS-polyacrylamide gels.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 28, 815-820 (1967).</li></ol>

관심의 어떠한 충돌 선언 없습니다.

단백질 겔 전기 영동은 대부분의 분자 생물학 연구소를위한 indispensible 방법입니다. 상용 minigels의 편의를 높은 수준을 제공하지만, 치명타가 될 수 있습니다. 여기 상용 minigels의 인기 브랜드에서 minigel 카세트를 다시 사용하는 방법을 보여줍니다. 이 방법은 젤의 기성품 소스를 가지고있는 편리함을 유지하지만, 상용 minigels 비용의 분수에. 이 절차의 주요 단계는 완전히 유출을 방지하기 위해 unpo...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> Invitrogen Nupage Novex Minigel 카세트 (1.0 ㎜) </td><td> Invitrogen </td><td> NC2010 </td><td> 2, 5, 10, 12, 15 및 2D 우물에서 사용 가능 </td></tr><tr><td> 플라스틱 에폭시 </td><td> Loctite </td><td> 108,771 </td><td></td></tr><tr><td> 전기 테이프 </td><td> 스카치 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 125 ML 사이드 암 플라스크 </td><td> Pyrex </td><td> 5360 </td><td></td></tr><tr><td> 4X 트리스베이스 해결 겔 버퍼 </td><td></td><td></td><td> 1.5 M 트리스 -베이스 산도 8.7 </td></tr><tr><td> 아크릴 아미드 </td><td> 피셔 과학 </td><td> 01065-500 </td><td></td></tr><tr><td> 비스 아크릴 아미드 </td><td> MP의 Biomedicals 주식 회사 </td><td> 800,173 </td><td></td></tr><tr><td> 30.8 %의 아크릴 아미드 용액 </td><td></td><td></td><td> 30:0.8 아크릴 아미드 : 비스 아크릴 아미드 IRG-H 2 O의 </td></tr><tr><td> 10 % APS </td><td> 피셔 과학 </td><td> BP179-25 </td><td> 한 ML IRG-H 2 O에 0.1 g의 암모늄 persulfate는 사용하기 전에 즉시 준비 </td></tr><tr><td> TEMED </td><td> Arcos의 생명체 </td><td> 138,450,500 </td><td></td></tr><tr><td> 1-butanol 1X 해결 젤 버퍼로 포화 </td><td></td><td></td><td> 1X 해결 겔 버퍼에 5시 2분는 1-butanol </td></tr><tr><td> 4X 트리스베이스 스태킹 겔 버퍼 </td><td></td><td></td><td> 1.5 M 트리스 -베이스 산도 6.8 </td></tr><tr><td> 젤 빗 </td><td> Invitrogen </td><td> NC3015 </td><td> 15 음, 1.0 밀리미터 두께 </td></tr><tr><td> 충동 실러 </td><td> TEW 전기 난방 장비 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 히트 Sealable 파우치 </td><td> Kapak / Scotchpak </td><td></td><td> 1 파인트 크기 (6.5 &quot;X 8&quot;) </td></tr><tr><td> 젤 저장 버퍼 </td><td></td><td></td><td> 1X는 0.1 %의 나트륨 azide와 겔 버퍼를 스태킹 </td></tr><tr><td> Novex SDS 트리스 - 글리신 샘플 버퍼 (2X) </td><td> Invitrogen </td><td> LC2676 </td><td></td></tr><tr><td> DTT </td><td> FisherBiotech </td><td> BP172-5 </td><td></td></tr><tr><td> 10X 트리스 - Gylcine 나오는 버퍼 </td><td> Invitrogen </td><td> LC2675 </td><td> 10X 재고 1L : 29.0 g 트리스베이스, 144.0 g 글리신, 10.0 g SDS </td></tr><tr><td> XCell SureLock 미니 셀 </td><td> Invitrogen </td><td> EI0001 </td><td></td></tr><tr><td> 젤 나이프 </td><td> Invitrogen </td><td> EI9010 </td><td></td></tr><tr><td> SimplyBlue 금고 청바지 </td><td> Invitrogen </td><td> LC6065 </tD&gt; <td></td></tr></tbody></table>

pouring and running a protein gel by reusing commercial cassettes

나트륨 dodecyl 황산염의 polyacrylamide 겔 전기 영동 (SDS-PAGE) 분석을 사용하여 단백질의 평가는 생화학 및 분자 생물학 연구 1-4에서 사용하는 일반적인 기법입니다. 단백질의 일상 분석을 수행하는 실험실의 경우 상용 polyacrylamide의 젤 (~ $ 10/gel)의 비용은 시간의 경과에 상당한 될 수 있습니다. 이 비용을 완화하기 위해 일부 연구자들은 자신의 polyacrylamide 젤을 준비합니다. 이러한 젤류를 따르고 전통적인 방법은 일반적으로 전문 장비와 비용이 많은 젤류를 따르고과 향후 사용을 위해 그들을 저장할 수 있습니다 배제 유리 겔 접시를 사용합니다. 또한, 붓는 청소 또는 젤 동안 유리 조각으로 취급하는 것은 대학 연​​구실 교실에서 자신들의 사용을 배제 있습니다 안전 위험을 작성, 우발적인 파손이 발생할 수 있습니다. 우리의 프로토콜은 재활용 Invitrogen Nupage Novex minigel 카세트에 의해 동시에 여러 단백질 젤을 잡다, 그리고 저렴한 mA하는 방법을 보여줍니다terials는 인테리어 가게에서 구입했습니다. 이것은 경제적이고 능률적인 방법은 몇 주 동안 4 ° C에서 젤을 저장하는 방법을 포함하고 있습니다. 상용 젤, 자주 단백질 젤을 실행 실험실에서 플라스틱 겔 카세트를 다시 사용함으로써 상당한 비용을 절약하고 환경에 도움을 줄 수 있습니다. 또한, 플라스틱 겔 카세트는 학부 실험실 교실에 이상적하게 파손에 매우 저항력이 있습니다.

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Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes

우리의 프로토콜은 홈 개선 스토어에서 구입 재활용 Invitrogen Nupage Novex minigel 카세트, 그리고 저렴한 재료로 한 번에 여러 개의 단백질 젤을 부어하는 방법을 보여줍니다. 이것은 경제적이고 능률적인 방법은 몇 주 동안 4 ° C에서 젤을 저장하는 방법을 포함하고 있습니다. 상용 젤, 자주 단백질 젤을 실행 실험실에서 플라스틱 겔 카세트를 다시 사용함으로써 상당한 비용을 절약하고 환경에 도움을 줄 수 있습니다.

상업 카세트를 재사용하여 물을 붓는과 단백질 젤 러닝

The evaluation of proteins using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) analysis is a common technique used by biochemistry ...

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24.8K 조회수.  University of Florida. 우리의 프로토콜은 홈 개선 스토어에서 구입 재활용 Invitrogen Nupage Novex minigel 카세트, 그리고 저렴한 재료로 한 번에 여러 개의 단백질 젤을 부어하는 방법을 보여줍니다. 이것은 경제적이고 능률적인 방법은 몇 주 동안 4 ° C에서 젤을 저장하는 방법을 포함하고 있습니다. 상용 젤, 자주 단백질 젤을 실행 실험실에서 플라스틱 겔 카세트를 다시 사용함으로써 ?...