이 연구는 국립 보건원 (CH와 NS051630/MH076090/MH078972에 PJ에 GM071440)에 의해 부분적으로 지원되었다.

1. 게놈 DNA 조각 원하는 크기 범위로 sonication을 사용하여 조각 게놈의 DNA는 게놈 전체 시퀀싱 플랫폼에 가장 적합합니다. (우리는 보통 ~ 300 BP에 sonicate.) 1% 아가로 오스 겔 (그림 1)에 조각 게놈의 DNA의 크기 분포를 확인합니다. 2. DNA 준비 게놈 DNA의 5 HMC의 풍부한에 따라 시작 DNA 금액을 확인합니다. 5 HMC 수준이 다른 조직 유형에 크게 다르므로, 시작 DNA의 금액은 샘플 5 HMC 수준에 따라 달라집니다. 예제 표 1을 참조하십시오. 3. β-GT 촉매 반응 (포도당 전송 반응) <ol><li> 1 시간에 37 ° C 물 목욕의 표 2와 배양에 명시된 바와 같이 혼합물을 pipetting하여 섞는다. </li><li> 부화 후, DNA의 10 μg을 당 사용 QIAquick 염기 제거 키트와 반응을 정리열. 열 30 μl 물 Elute과 조화를 이루고 있습니다. </li></ol> 4. Biotinylation 반응 (클릭 화학) <ol><li> 150 μm의 최종 농도 (즉, 30 μl DNA 솔루션에 따라 솔루션을 작업 5 μl)에 용출 DNA 솔루션 (3 단계에서) DBCO-SS-PEG3 - 비오틴 공액 작업 솔루션 (1 MM)를 추가합니다. </li><li> 2 시간에 37 ° C 물 목욕에 pipetting 및 배양하여 섞는다. </li><li> QIAquick 염기 제거 키트와 반응을 정리. 이상적인 총 용출 볼륨은 100 μl입니다. </li><li> 마이크로 리터 규모 분광 광도계 (예를 들면., NanoDrop)를 사용하여 복구 DNA 금액을 수량화. </li></ol> 5. 5 HMC 함유 DNA의 캡처 <ol><li> 제조업체의 지시에 따라 1X B &amp; W 버퍼 1 ML과 Dynabeads MyOne Streptavidin C1의 50 μl 3 번 씻으십시오. 자기 스탠드로 구슬을 분리합니다. </li><li> 복구 biotinylated D에 배 B &amp; W 버퍼의 동등한 볼륨을 추가세척 구슬로 NA (100 UL). </li><li> 회선 근의 부드러운 회전 실온에서 15 분에 품다. </li><li> 자기 스탠드로 구슬을 분리하고 1X B &amp; W 버퍼 1 ML과 구슬에게 3 번 씻는다. </li><li> 회선 근의 부드러운 회전 상온에서 2 시간에 신선하게 조리 된 50 ㎜의 DTT의 100 μl의 구슬을 잠복기하여 DNA를 Elute. </li><li> 자기 스탠드로 구슬을 분리합니다. DTT를 제거 할 수있는 제조 지침에 따라 마이크로 바이오 스핀 6 열로 eluent와 부하를 대기음. 대상 DNA는 이제 솔루션입니다. </li><li> EB 버퍼의 10 μl의 Qiagen PCR MinElute 정화 키트 및 elute의 DNA에 의해 이전 단계에서 용출 DNA를 정화. 농도가 20 NG / UL보다 높은 경우 큐빗 Fluorometer, 또는 NanoDrop를 사용하여 DNA를 정량화. DNA는 다운 스트림 게놈 전체 시퀀싱 도서관 준비 할 준비가되었습니다. </li></ol> 6. 대표 결과 품질 O 경우F 게놈 DNA가 높은, β-GT와 biotinylation 반응 후 일반적인 복구 수율은 ~ 60-70% 있습니다. 그러나, 캡처 효율은 샘플의 5 HMC 수준에 따라 서로 다른 조직 유형 상당히 다릅니다. 일반적으로, 뇌 게놈의 DNA에 대한 캡처 효율은 ~ 4-9%이며, 일부 극단적 인 경우에 효율은 12 %까지 도달 할 수 있습니다. ES 세포의 경우 평균 캡처 효율은 신경 줄기 세포에 대한 ~ 0​​.5 %로 대조적으로, ~ 2-4%입니다. 본 최저 효율은 지금까지 암 세포의 게놈 DNA에 대한했습니다. 모든 농축 DNA는 표준 차세대 도서관 준비 프로토콜 준비가되었습니다. 또한 캡처 한 DNA는 또한 관련 프리 머를 사용할 경우 입력 DNA에 비해 몇 조각의 강화를 감지하는 실시간 PCR을위한 템플릿으로 사용할 수 있습니다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/4441/4441fig1.jpg" /> 1 그림. 에 Sonicated 인간 게놈의 DNA 조각1퍼센트 아가로 오스 겔. 1X TE 버퍼 120 μl 인간의 IPS 세포로부터 격리 게놈 DNA의 10 μg은 sonication 장치 (Covaris)를 사용하여 sonicated되었습니다. sonication 후, sonicated DNA의 2 μl은 sonicated DNA 조각의 크기를 비교하는 DNA 마커의 100 BP를 사용하여 1퍼센트 아가로 오스 겔에로드했습니다. <table border="1"><tbody><tr><td> 구성 요소 </td><td> 음량 </td><td> 최종 농도 </td></tr><tr><td> 물 </td><td> _ μl </td><td></td></tr><tr><td> 10 X β-GT 반응 버퍼 </td><td> 2 μl </td><td> 1 X </td></tr><tr><td> 최대 10 μg의 게놈의 DNA에 </td><td> _ μl </td><td> 최대 500 μl / NG </td></tr><tr><td> UDP-6-N 3-Glc (3 ㎜) </td><td> 0.67 μl </td><td> 100 μM </td></tr><tr><td> β-GT (40 μM) </td><td> 1 μl </td><td> 2 μM </td></tr><tr><td> 총 볼륨 </td><td> 20 μl </TD&gt; <td></td></tr></tbody></table> 조직 게놈의 DNA (높은 5 HMC 내용&gt; 0.1 %)의 경우 I) <table border="1"><tbody><tr><td> 구성 요소 </td><td> 음량 </td><td> 최종 농도 </td></tr><tr><td> 물 </td><td> _ μl </td><td></td></tr><tr><td> 10 X β-GT 반응 버퍼 </td><td> 10 μl </td><td> 1 X </td></tr><tr><td> 20 μg의 게놈의 DNA에 </td><td> _ μl </td><td> 최대 500 μl / NG </td></tr><tr><td> UDP-6-N3-Glc (3 ㎜) </td><td> 1.33 μl </td><td> 100 μM </td></tr><tr><td> β-GT (40 μM) </td><td> 2 μl </td><td> 2 μM </td></tr><tr><td> 총 볼륨 </td><td> 40 μl </td><td></td></tr></tbody></table> II) 줄기 세포 게놈의 DNA (평균 5 HMC 내용 ~ 0.05 %)의 경우 <table border="1"><tbody><tr><td> 구성 요소 </td><td> 음량 </td><td> 최종 농도 </td></tr><tr><td> 물 </td><td> _ μl </td><td></td></tr><tr><td> 10 X β-GT 반응 버퍼 </td><td> 10 μl </td><td> 1 X </td></tr><tr><td> 최대 50 μg의 게놈의 DNA에 </td><td> _ μl </td><td> 최대 500 μl / NG </td></tr><tr><td> UDP-6-N3-Glc (3 ㎜) </td><td> 3.33 μl </td><td> 100 μM </td></tr><tr><td> β-GT (40 μM) </td><td> 5 μl </td><td> 2 μM </td></tr><tr><td> 총 볼륨 </td><td> 100 μl </td><td></td></tr></tbody></table> III) 암 세포 게놈의 DNA (낮은 5 HMC 내용 ~ 0.01 % 용) 표 1. 입력 DNA와 선택 화학 라벨 방식에 의한 다양한 5 HMC 수준으로 샘플을 사용하여 라벨 반응 금액의 예. <table border="1"><tbody><tr><td> 견본 </td><td> 5 HMC 수준 </strong&gt; </td><td> 시작 DNA (μg) </td><td> 라벨 후 복구 (구슬로 입력) (μg) </td><td> 복구 수율 </td><td> 풀다운 DNA (NG) </td><td> 풀다운 얻을 수 </td></tr><tr><td> 성인 마우스 소뇌 </td><td> 0.4 % </td><td> 10 </td><td> 7.5 </td><td> 75% </td><td> 236 </td><td> 3.1 % </td></tr><tr><td> 출생 후의 일 7 마우스 소뇌 </td><td> 0.1 % </td><td> 11 </td><td> 9 </td><td> 82% </td><td> 140 </td><td> 1.6 % </td></tr><tr><td> 마우스 ES 세포 E14 </td><td> 0.05 % </td><td> 60 </td><td> 42 </td><td> 70% </td><td> 350 </td><td> 0.8 % </td></tr></tbody></table> 표 2. 마우스 뇌 조직 및 ES 세포의 대표 결과입니다.

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	<li>Jaenisch, R., Bird, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+regulation+of+gene+expression:+how+the+genome+integrates+intrinsic+and+environmental+signals.">Epigenetic regulation of gene expression: how the genome integrates intrinsic and environmental signals.</a> Nat. Genet. , 245-254 (2003).</li><li>Ito, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Tet+proteins+in+5mC+to+5hmC+conversion,+ES-cell+self-renewal+and+inner+cell+mass+specification.">Role of Tet proteins in 5mC to 5hmC conversion, ES-cell self-renewal and inner cell mass specification.</a> Nature. 466, 1129-1133 (2010).</li><li>Tahiliani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conversion+of+5-methylcytosine+to+5-hydroxymethylcytosine+in+mammalian+DNA+by+MLL+partner+TET1.">Conversion of 5-methylcytosine to 5-hydroxymethylcytosine in mammalian DNA by MLL partner TET1.</a> Science. 324, 930-935 (2009).</li><li>Kriaucionis, S., Heintz, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+nuclear+DNA+base+5-hydroxymethylcytosine+is+present+in+Purkinje+neurons+and+the+brain.">The nuclear DNA base 5-hydroxymethylcytosine is present in Purkinje neurons and the brain.</a> Science. 324, 929-930 (2009).</li><li>Ko, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+hydroxylation+of+5-methylcytosine+in+myeloid+cancers+with+mutant+TET2.">Impaired hydroxylation of 5-methylcytosine in myeloid cancers with mutant TET2.</a> Nature. 468, 839-843 (2010).</li><li>Koh, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tet1+and+tet2+regulate+5-hydroxymethylcytosine+production+and+cell+lineage+specification+in+mouse+embryonic+stem+cells.">Tet1 and tet2 regulate 5-hydroxymethylcytosine production and cell lineage specification in mouse embryonic stem cells.</a> Cell Stem Cell. 8, 200-213 (2011).</li><li>Iqbal, K., Jin, S. G., Pfeifer, G. P., Szabo, P. 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G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=5-Hydroxymethylcytosine:+a+new+kid+on+the+epigenetic+block.">5-Hydroxymethylcytosine: a new kid on the epigenetic block.</a> Mol. Syst. Biol. 7, 562 (2011).</li><li>Szwagierczak, A., Bultmann, S., Schmidt, C. S., Spada, F., Leonhardt, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+enzymatic+quantification+of+5-hydroxymethylcytosine+in+genomic+DNA.">Sensitive enzymatic quantification of 5-hydroxymethylcytosine in genomic DNA.</a> Nucleic Acids Res. 38, 181 (2010).</li><li>Terragni, J., Bitinaite, J., Zheng, Y., Pradhan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+characterization+of+recombinant+&#946;-glucosyltransferase+and+analysis+of+global+5-hydroxymethylcytosine+in+unique+genomes.">Biochemical characterization of recombinant &#946;-glucosyltransferase and analysis of global 5-hydroxymethylcytosine in unique genomes.</a> Biochemistry. , (2012).</li><li>Rusmintratip, V., Sowers, L. 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U.S.A. 97, 14183-14187 (2000).</li><li>Globisch, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+distribution+of+5-hydroxymethylcytosine+and+search+for+active+demethylation+intermediates.">Tissue distribution of 5-hydroxymethylcytosine and search for active demethylation intermediates.</a> PLoS One. 5, e15367 (2010).</li><li>Yildirim, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mbd3/NURD+Complex+Regulates+Expression+of+5-Hydroxymethylcytosine+Marked+Genes+in+Embryonic+Stem+Cells.">Mbd3/NURD Complex Regulates Expression of 5-Hydroxymethylcytosine Marked Genes in Embryonic Stem Cells.</a> Cell. 147, 1498-1510 (2011).</li><li>Szulwach, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrating+5-hydroxymethylcytosine+into+the+epigenomic+landscape+of+human+embryonic+stem+cells.">Integrating 5-hydroxymethylcytosine into the epigenomic landscape of human embryonic stem cells.</a> PLoS Genet. 7, e1002154 (2011).</li><li>Szulwach, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=5-hmC-mediated+epigenetic+dynamics+during+postnatal+neurodevelopment+and+aging.">5-hmC-mediated epigenetic dynamics during postnatal neurodevelopment and aging.</a> Nat. Neurosci. 14, 1607-1616 (2011).</li></ol>

관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

5 hydroxymethylcytosine (5 HMC)는 특정 포유류의 세포 유형에서 상당한 양의 최근 확인 epigenetic 수정 존재입니다. 여기에 제시된 방법은 5 HMC의 게놈 전체의 분포를 결정하기위한 것입니다. 우리는 5 HMC의 수산기 그룹에 azide 그룹을 포함하는 엔지니어링 포도당 잔기를 전송하는 β-glucosyltransferase T4 박테리오파지를 사용합니다. azide 그룹은 화학적으로 포유류의 genomes에 5 HMC 함유 DNA 조각의 감지, 연관성 ?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 이름 </td><td> 회사 </td><td> # 카탈로그를 </td><td> 논평 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 시약 </td></tr><tr><td> 5M 나트륨 염화물 (NaCl) </td><td> Promega </td><td> V4221 </td><td></td></tr><tr><td> 0.5M pH8.0 Ethylenediaminetetraacetic 산 (EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산)) </td><td> Promega </td><td> V4231 </td><td></td></tr><tr><td> 1M Trizma베이스 (트리스) pH7.5 </td><td> Invitrogen </td><td> 15567-027) </td><td></td></tr><tr><td> HEPES 1M, pH7.4 </td><td> Invitrogen </td><td> 15,630 </td><td></td></tr><tr><td> 염화 마그네슘 (MgCl 2) 1M </td><td> Ambion </td><td> AM9530G </td><td></td></tr><tr><td> 디메틸 sulfoxide (DMSO) </td><td> 시그마 </td><td> D8418 </td><td></td></tr><tr><td> 십대 초반 20 </td><td> 피셔 BioReagents </td><td> BP337-100 </td><td></td></tr><tr><td> DBCO-SS-PEG3 - 비오틴 공액 </td><td> 화학 도구를 클릭합니다 </td><td> A112P3 </td><td></td></tr><tr><td> 1,4 - Dithiothreitol, ultrapure (DTT) Superpure </td><td> Invitrogen </td><td> 15508-013 </td><td></td></tr><tr><td> QIAquick 염기 제거 키트 </td><td> Qiagen </td><td> 28,304 </td><td></td></tr><tr><td> 마이크로 바이오 스핀 6 열 </td><td> 바이오 RAD </td><td> 732-6222 </td><td></td></tr><tr><td> Dynabeads MyOne </td><td> Invitrogen </td><td> 650-01 </td><td></td></tr><tr><td> Streptavidin C1 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Qiagen PCR MinElute 정화 키트 </td><td> Qiagen </td><td> 28,004 </td><td></td></tr><tr><td> UltraPure 아가로 오스 </td><td> Invitrogen </td><td> 16500500 </td><td></td></tr><tr><td> UDP-6-N 3 포도당 </td><td> 활성 Motif로 </td><td> 55,013 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 효소 </td></tr><tr><td> β-glucosyltransferase (β-GT) </td><td> 뉴 잉글랜드 Biolab </td><td> M0357 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 장비 </td></tr><tr><td> Sonication 장치 </td><td> Covaris </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 데스크탑 원심 분리기 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 열탕 목욕 </td><td> 피셔 과학 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 젤 실행 장치 </td><td> 바이오 RAD </td><td></td><td></td></tr><tr><td> NanoDrop1000 </td><td> 열 과학 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Labquake 튜브 쉐이커 </td><td> Barnstead </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Labquake 튜브 쉐이커 </td><td> Thermolyne </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 자기 분리 스탠드 </td><td> Promega </td><td> Z5342 </td><td></td></tr><tr><td> 큐빗 2.0 Fluorometer </td><td> Invitrogen </td><td></td&gt; <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 시약 설정 10 X β-GT 반응 버퍼 (500 MM의 HEPES 산도 7.9, 250 MM MgCl 2) 2 X 구속력과 (10 MM 트리스 산도 7.5, 1 ㎜ EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산), 2 M NaCl, 0.02 % 십대 초반 20) (B &amp; W) 버퍼를 세척 . </td></tr></tbody></table>

selective capture of 5-hydroxymethylcytosine from genomic dna

5 methylcytosine (5-MC)는 인간 게놈 DNA의 총 cytosines의 ~ 2-8%를 구성하고 유전자 발현, 게놈 무결성 유지, 부모의 각인, X-염색체 불 활성화, 규제 등의 생물학적 기능의 광범위한 영향을 개발, 노화, 암 1. 최근 산화 5 MC, 5 hydroxymethylcytosine (5 HMC)의 존재는 배아 줄기 (ES) 세포와 neuronal 세포 2-4, 특히 포유류의 세포에서 발견되었습니다. 5 HMC는 TET 가족 철 (II) / α-ketoglutarate에 따라 달라 dioxygenases 2, 3 5 - MC 촉매의 산화에 의해 생성됩니다. 5 HMC는 배아 줄기 (MES) 세포, 정상 조혈 및 malignancies, 그리고 접합자 개발이 5-10의 유지에 참여 제안합니다. 더 나은 5 HMC의 기능을 이해하기 위해서는 안정적이고 간단한 시퀀싱 시스템이 필수적입니다. 전통 bisulfite 배열은 5 - MC 11 일부터 5 HMC을 구별 할 수 없습니다 </sup&gt;. 5 HMC의 생물학을 해명하기 위해, 우리는 특별히 5 HMC에 12 포도당 잔기를 추가 박테리오파지 효소 활용, 라벨 및 5-HMC를 캡처 할 수있는 매우 효율적이고 선택적 화학 접근 방식을 개발했습니다. 여기 5 HMC의 선택적 화학 라벨에 대한 간단한 두 단계 절차를 설명합니다. 첫 번째 라벨 단계에서, 게놈 DNA의 5 HMC는에서 5 HMC에 6 azide 포도당를 전송하는 방식으로, β-GT, T4 박테리오파지에서 glucosyltransferase로 6 azide-포도당 촉매으로 표시됩니다 수정 cofactor, UDP-6-N3-Glc (6 N3UDPG). 두 번째 단계, biotinylation에서 이황화 비오틴의 링커는 클릭 화학으로 azide 그룹에 연결되어 있습니다. 두 단계는 게놈 지역에서 5 HMC의 풍부한 관계없이 라벨 매우 낮은 배경을 제공 완료로 이어지는, 매우 구체적이고 효율적이다. 5 HMC의 후 biotinylation, 5 HMC 함유 DNA 조각을 한 후 선택적으로 캡처되어밀도 독립적 인 방식으로 streptavidin 비즈를 사용합니다. 그 결과 5 HMC 강화 DNA 조각은 차세대 시퀀싱 등의 다운 스트림 분석을 위해 사용될 수있다. 우리의 선택 레이블 및 캡처 프로토콜은 다양한 / 변수 5 HMC의 abundances과 게놈 DNA의 소스에 해당 높은 감도를, 수여. 이 프로토콜의 주요 목적은 자사의 다운 스트림 응용 프로그램 (예., 차세대 시퀀싱은 게놈의 5 HMC 배포를지도)이지만, 단일 분자입니다 실시간 SMRT (DNA) 시퀀싱과 호환됩니다 5 HMC의 단일 기본 해상도 시퀀싱을 제공 할 수.

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Selective Capture of 5-hydroxymethylcytosine from Genomic DNA

설명이 쉽고 밀도에 독립적 인 강화를위한 비오틴 링커를 전송할 클릭 화학에 이어, 5 HMC에 azide - 포도당를 전송하는 β-glucosyltransferase (β-GT)를 사용하여 두 단계 라벨 프로세스입니다. 이 효율적이고 특정 라벨 방식은 차세대 시퀀싱을 통해 매우 낮은 배경과 높은 처리량 epigenomic 매핑과 5 HMC의 농축이 가능합니다.

게놈 DNA에서 도보로 5 hydroxymethylcytosine의 선택적 캡처

5-methylcytosine (5-mC) constitutes ~2-8% of the total cytosines in human genomic DNA and impacts a broad range of biological functions, including gene ...

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11.9K 조회수.  Emory University School of Medicine. 설명이 쉽고 밀도에 독립적 인 강화를위한 비오틴 링커를 전송할 클릭 화학에 이어, 5 HMC에 azide - 포도당를 전송하는 β-glucosyltransferase (β-GT)를 사용하여 두 단계 라벨 프로세스입니다. 이 효율적이고 특정 라벨 방식은 차세대 시퀀싱을 통해 매우 낮은 배경과 높은 처리량 epigenomic 매핑과 5 HMC의 농축이 가능합니다.