저자는 아낌없이 α-catenin의를 제공하기 위해 박사 르 트린 박사 토빈 감사 : 황수정 물고기 라인과 빌 잭맨 우리 자신의 실험실에서 촬영을 할 수 있도록합니다. 저자는 자금 출처 국립 보건원 (보조금 5P20RR016463, 8P20GM103423 및 R15AI094406)과 USDA 인정 (프로젝트 # ME0-H-1-00517-13). 이 원고는 주요 농업 및 임업 실험 역 게시 번호 3371로 게시됩니다.

참고 : 모든 제브라 피쉬의 치료 프로토콜과 실험 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC) 프로토콜 A2012-11-03에서 NIH의 지침에 따라 수행되었다. 4 일 포스트 시비 1. Zebrafish의 양육 <ol><li> 다른 동영상 34에 도시 된 바와 같이, 제 3 시간 포스트 시비 내에 AB 제브라 피쉬, 또는 다른 형질 전환 계통 모아서. </li><li> (0.17 mM의 KCl을 0.33 mM의 염화칼슘이 0.33 mM의의 MgCl 2, 2 mM의 HEPES, pH가 6.8 5 mM의 NaCl을) 메틸렌 블루 (0.3 ㎍ / ml의 최종 E3 미디어 150 ㎖를 포함하는 15cm 페트리 접시에 120 알을 품어 12/12 / 암 광주와 33 ° C 배양기에서 농도). </li><li> E3 + PTU (1- 페닐 -2- 티오, 10 ㎍ / ml의 최종 농도)와 6 시간 후 용지를 교체하고 죽은 계란을 제거합니다. </li><li> 이일 후 신선한 E3 + PTU와 미디어를 교환, 33 ° C에서 4 일 동안 품어. </li></ol> 2.에서켜졌 마이크로 니들 준비 <ol><li> 다음 설정을 사용하여 바늘 풀러를 사용하여 미세 바늘로, 붕 규산염 모세관 (ID 0.69 mm OD 1.2 mm)를 당겨 (550 열을 0 풀을 130 속도 110 시간). 주 : 설정 필라멘트 다를 것이다 (도 1 참조)와 마찬가지로 형상의 미세 니들을 얻었다 필라멘트와 새로운 필라멘트가 설치 될 때마다 재조정 될 필요가있을 것이다. </li><li> 0.4 μm의 필터링 된 인산 완충 식염수 3 μL와 마이크로 바늘을 채우기 (137 mM의 NaCl을, 2.7 mM의 KCl을, PBS 10 mM의 나 2 HPO 4 1.8 mM의 KH 2 PO 4 7.4의 pH) 20 μL의 microloader 피펫을 사용하여 팁. </li><li> 압력 분사 시스템에 부착 된 미세 조작기에 마이크로 피펫 홀더에 마이크로 바늘을 설정합니다. 30 PSI 및 분사 압력에서 30 msec의 펄스 지속 시간을 설정한다. </li><li> 바늘의 1/5이 될 때까지 물을 증류수로 페트리 접시를 사용하여, 미세 니들을 낮출. 마이크로 니들 위스콘신 클립그냥 물 수준 이하로 미세 핀셋을 토륨. 물 밖으로 미세 바늘을 가져오고 러스가 나타날 때까지 페달을 여러 번 누릅니다. </li><li> 한 방울 형 침지 오일 계층화 혈구에 마이크로 바늘을 하강시킴으로써 루스의 직경을 측정한다. 원하는 부피를 얻기 위해 펄스 폭을 조정한다 (표 1 참조). </li><li> 기름에 안정적으로 유지 (루스가 볼륨을 증가하면 압력을 낮추고 일시 볼륨이 감소하면 배압을 증가) 할 러스에 대한 배압을 설정합니다. 각각의 마이크로 니들의 펄스 지속 시간을 기록한다. </li><li> microloader 피펫 팁을 사용하여 흡입하여 미세 바늘에서 PBS를 제거하고 인젝터에 다시 배치하고 연속 펄스 스위치를 젖혀 왼쪽 위에 PBS를 추방. 각각의 마이크로 바늘을 보유합니다. </li></ol> 3. 칸디다 준비 <ol><li> 킬 칸디다 알비 칸스 코돈 최적화 dTomato, GFP, BFP, EOS 또는 원거리로 형질 전환효모 peptine 덱 스트로스 (YPD) 한천 플레이트 (10g /의 L 효모 추출물, 20g / L 펩톤에 멸균 나무 앵커를 사용하여 냉동 주식에서 (-80 ° C 주식 25 % 글리세롤) 레드, 20g / L의 포도당 , 20g / L의 한천은, 멸균 및 배양 접시에 25 ml에 부어) 30 ° C에서 하룻밤 배양한다. </li><li> 멸균 나무 앵커를 사용하여 하나의 식민지를 선택하고 YPD 액체 (10g /의 L 효모 추출물, 20g / L 펩톤, 20g / L의 포도당을 5 ml에 접종, 멸균 및 무균 16 × 150mm 유리 문화 5ml에 분주 튜브). </li><li> 60 rpm에서 롤러 드럼에서 30 ° C에서 밤새 인큐베이션. </li><li> C. 1 ㎖를 수집 1.7 ml의 멸균 원심 분리기 튜브에 알비 칸스 문화 및 전송. </li><li> 초 몇 5,000 XG에 원심 분리기. 뜨는을 비우고 철저하게 멸균 PBS, 소용돌이 1 ㎖를 추가합니다. 이 두 번 반복합니다. </li><li> 멸균 PBS에서 1,000 : 1 ml의 수량 1 개를 희석하여 혈구를 사용하여 식민지를 계산합니다. </li></ol> 4에 Zebrafish의 주입Swimbladder <ol><li> 33 ° C의 배양기에서 30 분 동안 주입 접시 (2 % 아가 로스)을 따뜻하게. </li><li> 원하는 시간에, 어떤 제브라 피쉬를 흡입하지 않고 25ml를 피펫을 사용하여 주입하는 물고기를 포함 15cm 페트리 접시에서 E3 + PTU의 150 ml의 100를 제거합니다. </li><li> 나머지 50 ㎖ 미디어 (최종 농도 200 ㎍ / ㎖)에 4 ㎎ / ㎖ 버퍼 tricaine 메탄 설포 네이트 재고 (TR) 2 ㎖를 추가하여 제브라 피쉬 DPF (4) 마취 15 분 동안 기다립니다. </li><li> 해부 현미경, 팽창 swimbladder 물고기를 선택합니다. 물고기는 또한 MPO에서 호중구 분포로, 균일 한 표현형을 위해 그 시간에 상영 할 수 있습니다 GFP 라인은 해부 현미경 표면 형광을 사용. </li><li> C. 희석 원래의 농도에서 알비 칸스의 재고 1.5 × 10 7 식민지 PBS에서 ㎖ (CFU / ㎖) 당 단위를 형성한다 (단계 3.8). </li><li> 플라스틱 전열관을 사용하여 사출 접시 (30) 상으로 전송 지브라 피쉬TTE 및 초과 용지를 제거합니다. </li><li> 낚시 선 도구 (0.012 인치 직경 낚시 줄 보로 실리케이트 모세관에 슈퍼 접착)를 사용하여, 수직 사출 접시를 들고 10 물고기의 3 선을 수직으로 물고기의 방향을. </li><li> 초과 한 용지를 제거합니다. </li><li> 철저히 1.5 × 107 CFU로 튜브 와동 / ㎖ C. 알비 칸스. </li><li> C. 3 ㎕를 하나의 마이크로 바늘을 채우기 알비 새로운 microloader 피펫 팁을 사용하여 적절한 설정으로 펄스 지속 시간을 설정한다 (단계 2.9 참조). </li><li> swimbladder (도 3a)의 후방을 향해 조준, 미세 니들 및 물고기의 머리 사이의 20 °의 각도를 만들기 위해 분사 접시 돌린다. </li><li> , swimbladder로 마이크로 바늘을 밀어 바늘의 구멍은 루멘에 확인하고, 한 번 페달을 누르십시오. </li><li> 각각의 물고기를 반복 E3와 함께 요리를 홍수에 의해 복구 접시 (25 ml의 E3 + PTU)로 전송D 복구 접시에 그것을 비우는. </li><li> 사출 접시에 다른 30 ​​물고기를 전송합니다. </li><li> 철저하게 가득 새로운 마이크로 바늘 반복 주입은 C를 와동 알비 칸스. </li><li> 필요한 경우 오염을 방지하고 별도의 복구 접시 (단계 4.10)로 전송하기 위해 다른 주사 접시를 사용하여, PBS 제어를 주입하여 마침. </li></ol> 5. 원하는 접종의 물고기 상영 <ol><li> 용해 될 때까지 레인지 작동, 37 ° C로 냉각 비등, E3의 40 ml의 0.4 % 아가로 오스 솔루션 (LMA) 낮은 용융 160 mg을 추가하여 낮은 용융 아가로 오스 40 ml의를 준비합니다. 한 번 냉각 TR (최종 농도 200 ㎍ / ㎖)의 400 μl를 추가합니다. </li><li> (25 ㎖ E3 + PTU, 최종 농도 200 ㎍ / ㎖의에 TR 만 1 ml의 사용 단계 4.3) 기술로 30 분 복구 후 물고기를 마취시키다. </li><li> 무게 보트 LMA 2 ㎖에 (가능한 한 작은 매체) 전송 (30) 물고기. </li><li> 기음 개별 전송 피펫과 물고기와 만 10 × 6 중앙 우물을 사용하여, 96 웰 이미징 플레이트에 LMA 1 방울과 물고기를 접시. </li><li> 화면에 모든 물고기가 이미징 플레이트에 장착 될 때까지 반복합니다. </li><li> 미디어가 5 분 동안 실온에서 고화하자. </li><li> 그들은 유리 바닥과 접촉 확인하고, 그들의 편에서 물고기를 놓습니다. </li><li> 반전 표면 형광 / 공 초점 현미경 및 적절한 필터 20X 대물 렌즈를 사용하면, C.의 수를 기록 각 물고기의 swimbladder에 알비 칸스의 효모 세포. </li><li> , swimbladder 15-25 효모 세포와 물고기 (또는 원하는 접종)을 선택 안락사 선택되지 않은 물고기 (E3에서 TR 800 μg의 / ㎖)에 의해 E3 + PTU 50 ml로 깊은 페트리 접시에 선택한 생선을 반환 촬상 선택된 웰 플레이트 E3의 3 방울을 첨가하고, 플라스틱 전송 피펫으로 흡입 물고기. </li><li> 원하는 기간 동안 33 ° C에서 품어. </li></ol> 6. 물고기 사후 심사 이미징 <ol><li> 원하는 시간, 이미지를 포함하는 어류 깊은 페트리 접시에서 E3 + PTU 매체의 50 ㎖의 25을 제거한다. </li><li> (25 ml의 E3 + PTU 나머지, 최종 농도 200 ㎍ / ㎖의에 TR 만 1 ml의 사용 단계 4.3) 기술로 물고기를 마취시키다. </li><li> 적절하게 96 웰 이미징 플레이트와 위치로 물고기 플레이트 (5.7 - 5.3 단계). </li><li> 적절한 레이저와 방출 필터를 사용하여 공 초점 현미경을 스캔하여 이미지. 제 1 차동 간섭 대비 (DIC) 하에서 4X 목적을 사용 물고기 초점과 2 마이크로 초 / 화소 ​​속도 및 1,024 × 600 화소 종횡비 스캔 모드에서, 공 초점 레이저를 20X 대물 렌즈를 이용하여 관심 영역의 화상을 취득. 3 프레임 칼만 필터 모드를 적용, 1 ㎛의 크기를 갖는 Z-스택을 획득. </li><li> 50 ㎖ E3 + PTU 또는 individua에 깊은 페트리 접시로 돌아 가기L 우물 (24 웰 배양 접시, 3 ㎖ E3 + PTU), 33 ° C에서 품어. </li></ol> 7. Swimbladder 해부 <ol><li> 높은 진공 그리스와 10 ML의 주사기를 입력합니다. </li><li> 2 % LMA (아가로 오스 E3 8 ml의 낮은 녹는 160 MG와 단계 5.3)을 준비합니다. </li><li> 원하는 시간, 물고기 (단계 5.2)를 마취시키다. </li><li> 이전 10 E3 1 ㎖와 함께 1.7 ㎖의 원심 분리 관에 물고기와 원심 분리 튜브에 4 ㎎ / ㎖ Tricaine (최종 농도 800 ㎍ / ㎖) 200 μL를 첨가하고, 실온에서 15 분 동안 인큐베이션에 의해 안락사. </li><li> 마이크로 슬라이드 (75 X 25mm, 그림 2)에 1cm 간격, 광장에 진공 그리스의 4 방울을 배치하여 영상 유리 슬라이드를 준비합니다. </li><li> 광장의 중앙에 2 % LMA 2 방울을 놓습니다. </li><li> 해부 현미경 별도의 유리 슬라이드에 하나의 물고기를 놓고 심장이 박동을 멈 추면 확인, 여분의 수분을 제거합니다. </li><l미세 핀셋을 사용하여 난&gt; 왼쪽 핀셋으로 고정 된 위치에 머리를 유지하고 오른쪽 핀셋 (그림 4A)과 전방 장을 아래로 당겨서 swimbladder을 해부하다. </li><li> 소화 기관에서 분리, 왼쪽 핀셋 공기 덕트에 의해 swimbladder을 선택하고,이 응고되기 전에 2 % LMA의 중심에 배치합니다. </li><li> 이미징 유리 슬라이드의 상단에 커버 슬립 (18 X 18mm)를 놓고는 진공 그리스뿐만 아니라 LMA (그림 2)에 닿을 때까지 밀어 넣습니다. </li><li> 해부의 10 분 내 이미지 단계 6.4에 설명 된대로. 단계를 반복 7.7-7.11 다른 물고기와. </li></ol>

The authors have nothing to disclose.

swimbladder의 미세 주입 질환 모델의 발전과 한계 여기에 제시된 모델은 Gratacap 등에 설명 된 점막 칸디다증 침수 모델의 확장이다 (2013).; 이는 제어 된 감염 시간의 장점, 높은 재현성 감염 도즈, 따라서 효율 향상을 추가한다. 우리는 여기서 비 침습적 훌륭한 세부 사항에 감염 역학의 시간적 문서뿐만 아니라 swimbladder의 높은 해상도 생체 이미징을 허용하는 ?...

Mucosal infections can lead to life threatening bloodstream infections due to the damage of the epithelial barrier, which allows pathogens access to the systemic environment1,2. In addition, mucosal infections can also cause significant immunopathology even when contained externally3-5. The commensal unicellular fungus Candida albicans is present in the majority of the population in the oral cavity and other mucosal sites6-9. Although normally contained by innate and adaptive immune responses, innate immune defects and medical interventions can lead to severe mucosal candidiasis. The assault on the epithelial barrier results in an increased risk of life threatening disseminated disease as well as immunopathology, as in the case of vulvo-vaginal candidiasis, additionally C. albicans colonization has been linked with lung immune homeostasis10,11. Disseminated candidiasis is now the fourth most common bloodstream infection in intensive care units12 and mortality as high as 40% makes it a major concern. Due to the increase in immunomodulatory treatments for patients with autoimmune diseases, cancer or organ transplants, it is imperative to understand the interaction between this pathogen and the mucosal immune compartment.
The majority of cell biological advances regarding C. albicans-cell interactions at the mucosal level come from in vitro13-15 and murine models16-18. Both these approaches have distinct advantages, but the ability to image live cells at high resolution in an intact host has limited the temporal and spatial characterization of the infection. For these studies, there is the need for an in vivo model where the interaction of pathogen, innate immune and epithelial cells can be visualized in an intact vertebrate host.
The zebrafish has emerged as an invaluable tool for the understanding of human disease, mainly due to its transparency and amenability to genetic manipulation. Cell and organ development have been imaged in exquisite detail, which has led to the description of novel immune cell behaviors, such as T cell behavior in the developing thymus19 or the battle between intracellular mycobacteria and phagocytes20-22. Recent work has described intestinal microbe-host interactions in zebrafish and shown that microbial colonization of the intestinal tract affects host intestinal physiology and resistance to other infections23,24. Furthermore, infection through the gut epithelium has been described for several pathogens.
In contrast to the intestinal tract, the swimbladder represents a more isolated and complementary mucosal model. This organ is an extension of the developing gut tube and forms anteriorly to the liver and pancreas25,26. It produces surfactant, mucus and antimicrobial peptides27,28 and anatomically, as well as ontogenetically, this organ is considered a homologue of the mammalian lung29,30. Since the pneumatic duct remains connected to the gut in the zebrafish, this allows for immersion infection to occur naturally. Remarkably, the only known naturally occurring infections of fish with Candida species are C. albicans infections in the swimbladder31. We recently described an experimental immersion infection model where C. albicans infects the swimbladder, and found that this infection recapitulates some of the hallmarks of C. albicans-epithelial interaction in vitro32,33. 
In the method presented here, the original immersion infection model is improved by directly injecting C. albicans into the swimbladder of 4 days post fertilization (dpf) zebrafish. This allows for precise temporal control of infection as well as a highly reproducible inoculum. It permits detailed intravital imaging, coupled with the versatility of the zebrafish model. As an example of what can be done with this method, we present the spatio-temporal dynamics of C. albicans growth along with neutrophil recruitment to the site of infection. Because zebrafish swimbladder tissue is challenging to image intravitally, we also present a rapid swimbladder dissection technique that improves fluorescence signal and microscopic resolution. These methods expand the toolbox for fungal, immunological, and aquaculture research as well as describing a novel infection route that may be translated to model other fungal, bacterial or viral infections of mucosal surfaces.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="784">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">Name</td>
			<td style="width:259px;">Company</td>
			<td style="width:176px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:88px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1.7 mL tubes</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>MCT-175-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Deep Petri dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>89107-632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Transfer pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-711-7M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Yeast Extract</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>90000-726</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Peptone</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>90000-264</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dextrose</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>D16-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Agar</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>90000-760</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fine tweezers (Dumont Dumoxel #5)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11251-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Wooden Dowels</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>10805-018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Low Melt Agarose</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>12001-722</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flaming Brown Micropipette Puller</td>
			<td>Sutter Instruments</td>
			<td>P-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Borosilicate capillary</td>
			<td>Sutter Instruments</td>
			<td>BF120-69-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MPPI-3 Injection system</td>
			<td>Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td>MPPI-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Back Pressure Unit</td>
			<td>Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td>BPU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micropipette Holder kit</td>
			<td>Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td>MPIP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Foot Switch</td>
			<td>Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td>FSW</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micromanipulator</td>
			<td>Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td>MM33</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Magnetic Base</td>
			<td>Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td>Magnetic Base</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tricaine methane sulfonate</td>
			<td>Western Chemical Inc.</td>
			<td>MS-222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dissecting Scope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td colspan="2">SZ61 top SZX-ILLB2-100 base</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Confocal Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td colspan="2">IX-81 with FV-1000 laser scanning confocal system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">20x microscope objective</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>UPlanSApo 20x/0.75</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Roller drum</td>
			<td>New Brunswick Scientific</td>
			<td>TC-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microloader pipette tips</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>930001007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass culture tubes (16 x 150 mm)</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>60825-435</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaCl</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>BDH4534-500GP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">KCl</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>BDH4532-500GP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MgSO4</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>BDH0246-500GP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HEPES (Corning)</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>BDH4520-500GP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Children clay (Play-Doh)</td>
			<td>Hasbro</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CaCl2</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C69-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Methylene Blue</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>VW6276-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PTU</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7629-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Petri dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hemocytometer (Hausser scientific)</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>15170-172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Type A immersion oil</td>
			<td>Blue Marble Products</td>
			<td>51935</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5424</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vortex Genie</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>14216-184</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Agarose (Lonza)</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>12001-870</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Na2HPO4</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S374-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">KH2PO4</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P285-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fishing wire</td>
			<td>Stren</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">96 well imaging plate (Sensoplate)</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>655892</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">High vacuum grease (Dow Corning)</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>59344-055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microslide (25 x 75 mm)</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>48300-025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cover slips (18 x 18 mm), No 1.5</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>48366-045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 cm Petri dish (Olympus plastics)</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>32-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glycerol (EMD chemicals)</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>EMGX0185-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">24-well culture dish (Olympus plastics)</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>25-107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Weight boats (8.9 cm)</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>89106-766</td>
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modeling mucosal candidiasis in larval zebrafish by swimbladder injection

점막 병원균에 대한 초기 방어는 상피 장벽과 선천성 면역 세포로 구성됩니다. 모두의 immunocompetency, 그들의 상호는 감염에 대한 보호를 위해 매우 중요하다. 병원체와 상피 및 선천성 면역 세포의 상호 작용은 가장 복잡한 문제는 시간과 공간에 펼쳐지는 생체 내에서 조사하고 있습니다. 그러나, 기존 모델은 점막 수준에서 병원균과 전투의 쉬운 공간 - 시간 영상을 허용하지 않습니다. 여기에 개발 된 모델은 청소년 제브라 피쉬의 swimbladder에 곰팡이 병원균, 칸디다 알비 칸스의 직접 주입하여 점막 감염을 만듭니다. 얻어진 감염 질환의 점막 상피에 걸쳐 개발 및 선천성 면역 세포 행동의 고해상도 영상화를 가능하게한다. 이 방법의 다양성은 산도로 이어지는 면역 이벤트의 상세한 순서를 조사하기 위해 호스트의 심문을 허용agocyte 모집 특정 세포 유형과 보호 분자 경로의 역할을 조사하고. 또한, 면역 공격의 함수로서 병원체의 동작은 형광 단백질 발현을 C. 동시에 사용하여 묘화 될 수 알비 칸스. 호스트 병원체 상호 작용의 증가 된 공간 해상도는 설명 빠른 swimbladder 해부 기술을 사용하는 것도 가능하다. 여기에 기재된 점막 감염 모델은 점막 칸디다증의 연구를위한 가치있는 도구 만드는 간단하고 높은 재현성이다. 이 시스템은 또한 일반적으로 상피 표면을 통해 감염, 마이코 박테리아 세균 또는 바이러스 성 미생물로 다른 점막 병원균에 광범위하게 번역 될 수있다.

후방 swimbladder에 미세 주입 여기에 제시된 실험 방법은 C의 일관된 용량의 주입을 설명 제브라 피쉬 DPF 4의 swimbladder에서 알비 칸스의 효모 세포. 침지 모델과 이전 작업 제안이 C.에 swimbladder 면역 반응 알비 칸스 (Candida albicans)는 포유류의 점막 칸디다증 (32)와 유사하다. 여기에서 우리는 더 간단 재현하고 빠르다 수정 감염 방법을 보여; 제브?...

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Modeling Mucosal Candidiasis in Larval Zebrafish by Swimbladder Injection

In vivo spatio-temporal interactions of pathogen and immune defenses at the mucosal level are not easily imaged in existing vertebrate hosts. The method presented here describes a versatile platform to study mucosal candidiasis in live vertebrates using the swimbladder of the juvenile zebrafish as an infection site.

Swimbladder 주입에 의해 애벌레 Zebrafish의 점막 칸디다증 모델링

Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their ...

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

10.1K 조회수.  University of Maine. In vivo spatio-temporal interactions of pathogen and immune defenses at the mucosal level are not easily imaged in existing vertebrate hosts. The method presented here describes a versatile platform to study mucosal candidiasis in live vertebrates using the swimbladder of the juvenile zebrafish as an infection site.