다른 식물 종에서 촬영 정점 Meristems의 confocal 라이브 영상

apical 메리스템 제어 식물의 성장과 번식을 촬영합니다. 이 방법은 우리가 모델 종뿐만 아니라 다른 작물에서 뿐만 아니라 촬영 apical 메리스템의 형태와 내부 구조를 조사하는 데 도움이됩니다. 이 기술은 매우 효율적인 절차입니다.

촬영 apical 메리스템은 노동 집약적 인 샘플 고정 및 조직 단면 단계없이 높은 세포 해상도로 직접 시각화 할 수 있습니다. 먼저 텍스트 프로토콜에 자세히 설명된 대로 애비독증, 토마토 및 대두 식물을 성장시려면. 볼트 아라비도시스 식물에서 꽃발광 촬영 정점을 잘라.

주요 줄기의 기저 부위를 잡고, 주 줄기에서 가능한 한 많은 오래된 꽃 장기를 제거하기 위해 집게를 사용합니다. 촬영 apical 메리스템이 안구에서 볼 수 있을 때까지 스테레오 현미경의 필드에 있는 꽃의 나머지 부분을 계속 제거합니다. 토마토 나 대두에서 식물 촬영 정액 메리스템을 보려면 식물의 코틸레톤, 잎 및 뿌리를 해부하십시오.

스테레오 현미경 아래 식물의 저혈압을 잡고, 더 식물 촬영 apical 메리 스템을 덮고 잎과 잎 원시를 해부하는 집게를 사용합니다. 깨끗하고 빈 페트리 접시에 프로피듐 요오드 용액의 파이펫 50 마이크로 리터. 해부된 촬영 정점을 2분간 염료에 담급다.

염색 과정에서 전체 플로럴레스세니언 촬영 에액칼 메리스템 또는 식물 성 메리스템을 프로디움 요오드 용액에 몰입하여 균일한 염색을 달성하십시오. 멸균, 탈온 물에 두 번 스테인드 촬영 정점을 헹구. 이제, 포셉을 사용하여 준비된 이미징 접시의 중앙에 구멍을 뚫고, 스테인드 촬영 정점을 매체에 똑바로 붙입니다.

이미징 접시를 멸균된 탈온된 물로 채우면 시료를 완전히 담급니다. 스테레오 현미경을 통해 샘플을 볼 수 있습니다. 피펫을 위아래로 움직여 메리스템 주변에 갇힌 기포를 제거합니다.

그런 다음, 화고에서 줄기의 각도를 조정하여 촬영 에피칼 메리스템이 바로 위에서 완전히 볼 수 있는지 확인합니다. 지금, 공초점 현미경의 견본 단계에 화상 진찰 접시를 놓습니다. 수질 담그렌즈를 낮추고 현미경 샘플 스테이지를 올려 렌즈 의 끝이 물에 담그도록 합니다.

공초점 현미경 소프트웨어를 열고, 찾고 밝은 필드에서 촬영 apical 메리 스템에 초점을 안구를 사용합니다. 공초점 현미경 소프트웨어에서 획득 기능을 운영합니다. 라이브 모드를 시작하여 컴퓨터 화면에서 샘플을 보고 레이저 스캐닝 실험의 모든 매개 변수를 설정합니다.

매개 변수를 조정할 때 범위 표시기 함수를 사용하여 신호가 포화 상태인지 여부를 정의합니다. 이미징 수집에 사용된 동일한 소프트웨어를 사용하여 3차원 투명 프로젝션을 시각화할 수 있습니다. 원래 공초점 파일을 열고 3D 메뉴를 클릭하고 투명을 선택하여 3D 프로젝션 뷰를 생성합니다.

선택적으로 투명도를 선택하여 3D 이미지의 투명도에 대한 임계값, 램프 및 최대값을 포함하여 투영의 세 가지 매개 변수를 조정합니다. 이제 라이트를 선택하여 3D 이미지의 밝기를 조정합니다. 투영된 이미지를 내보내고 TIFF 파일로 저장합니다.

3D 이미지의 깊이 코딩 뷰를 시각화하기 위해 동일한 소프트웨어를 사용합니다. 다시 3D 메뉴를 클릭하고 모양을 선택합니다. 특수를 선택하고 깊이 코딩을 선택합니다.

투영된 이미지를 내보내고 TIFF 파일로 저장합니다. 아라비도시스 의 중간을 통해 직교 섹션에서이 이미지는 수평 벽이 여러 세포 층에서 거의 모든 세포에서 프로피듐 요오드로 얼룩진 것을 보여줍니다. 꽃무성의 코퍼스를 통과하는 하나의 횡단 구간의 뷰는 정량적 메리스템의 세포도 명확하게 이미지된다는 것을 보여줍니다.

3D 프로젝션 뷰는 꽃무늬 메리스템이 돔과 같은 구조를 형성하고 개발 중인 꽃 원시에 둘러싸여 있음을 보여줍니다. 토마토 촬영의 중간을 통해 직교 섹션에서 이 이미지는 또한 깊은 내부 영역에서 프로피듐 요오드 신호가 약간 낮지만, 여러 세포 층에서 프로피듐 요오드로 염색되는 수평 벽이 있음을 보여줍니다. 식물 촬영 의 깊은 층을 통해 하나의 횡단 섹션에서 이미지는 XY 평면과 식물성 메리 스템과 잎 원시 사이에 형성 된 경계에서 세포를 드러낸다.

3D 프로젝션 뷰는 토마토에서 식물성 메리스템의 모양과 조직에 대한 포괄적인 뷰를 더욱 제공할 수 있습니다. 여기에 표시된 대두 촬영 의 중간을 통해 직교 보기 apical 메리 스템과 동일한 촬영 apical 메리 스템의 3D 프로젝션. 돔 같은 식물성 메리스템과 유래된 새로운 잎 프리모르디아도 관찰할 수 있습니다.

프로피듐 요오드쉽게 손상 되 거나 죽은 세포를 얼룩 수 있습니다., 크게 이미지의 품질에 영향을 미칠 것입니다., 그래서 촬영 apical 메리 스템 샘플을 준비 하는 동안 어떤 물리적 손상을 방지 하는 것이 중요 하다.