이 프로토콜은 축소척수척수 재생 연구에서 표준화된 타박상 형 상해를 최초로 도입한 것입니다. 이 기술의 주요 장점은 일상적인 클리닉에서 볼 수있는 외상을 모방하여 미래의 발견이 번역 될 가능성을 향상시키는 것입니다. 타박상 부상 장치는 척수 손상의 다른 작은 동물 모델에서 활용할 수 있습니다.
수술 기술은 어렵습니다, 특히 laminectomy. 따라서 생체 내 수술로 진행하기 전에 많은 수의 동물 ex vivo에서 절차를 훈련하는 것이 좋습니다. 먼저, 스테레오 현미경 아래에 표준 페트리 접시를 수술 용 섬유 천 위에 올려 놓아 수술 테이블을 설정하십시오.
마취된 축축산틀을 페트리 접시의 경향이 있는 위치에 놓고 꼬리가 노출되도록 종이 타월로 감쌉니다. 뒷다리를 식별하고 마이크로 가위 쌍을 사용하여 첫 번째 절개만 하는 것을 만듭니다. 가시 공정의 뼈가 두드러질 때까지 용골에서 수직 절개를 합니다.
절단을 측면으로 확장하여 절개는 꼬리의 전체 너비를 통과하고 적절한 깊이를 보장하기 위해 집게로 가시 공정을 파악합니다. 그런 다음 양쪽의 가시 공정 보다 수직 절개를 1밀리미터 연장합니다. 한쪽에 동물을 놓고 수직 절개의 복부 지점에서 시작하여 무게가 10~20g인 동물의 경우 약 15밀리미터의 수평 절개를 합니다.
가위를 사용하여 중간선에서 척추 기둥이 느껴질 때까지 수평 절개를 통해 즉시 해부합니다. 그런 다음 동물을 다른 쪽으로 켜고 과정을 반복합니다. 양쪽에서 깊은 내측 평면에서 해부 한 후, 두 개의 수평 절개를 연결하기 위해 중간선을 통해 해부.
그런 다음, 꼬리와 용골의 자유 조각을 한쪽으로 이동하여 가시 공정을 노출시합니다. 머리를 외과 의사의 지배적 인 측면을 향한 경향이있는 위치에 동물을 놓고, 가시 적인 과정을 파악하기 위해 집게 한 쌍을 사용하여 뒷다리에 단지 caudal. 부드럽게 들어 올려 동물의 머리쪽으로 바하십시오.
마이크로 가위 한 쌍의 블레이드를 가공 과정 주위에 수평으로 놓고 부드럽게 잘라 척수를 노출시십시오. 방금 제거한 것으로 가시프로세스 를 파악하고 프로세스를 반복합니다. 제거시 척수에 손상을 입히지 않도록 가시 적 과정에 일정한 리프트를 유지하는 것이 필수적입니다.
노출된 부위가 충분히 넓지 않은 경우 두 쌍의 포셉을 사용하여 척수 양쪽의 라미네를 파악하고 부드러운 움직임으로 측면으로 비틀어 보냅니다. 가시 프로세스를 제거할 때 여러 단계에서 이 작업을 수행해야 할 수 있습니다. 따라서 척수를 노출하는 데 몇 분이 걸릴 수 있습니다.
타박상 형 부상을 소개하려면 페트리 접시를 사용하여 동물을 외상 유닛으로 옮기고 척수에 손전등을 비춥춥춥습니다. 그런 다음, 마이크로 조절기를 사용하여 노출된 척수 위에 타박상 외상 단위 실린더를 놓고 라미네와 수평이 될 때까지 실린더를 낮춥타민을 낮춥시다. 낙하막대를 전자 자석에 부착하고 원하는 낙하 높이 조정 실린더를 외상 장치에 놓습니다.
다음으로, 실린더에 떨어지는 막대를 놓고 전자석을 끄고 노출된 척수에 막대를 떨어뜨리고, 높이 조정 나사를 사용하여 막대를 다시 들어 올립니다. 날카로운 부상을 도입하는 경우, 완벽한 수직 절단에 척수를 잘라, 다음 신체의 caudal 측면에 2 밀리그램 컷을 반복합니다. 척수관의 복부 부분을 따라 긁어내는 가위의 칼날을 느끼고 절단이 완료되었는지 확인하고 운하에서 척수 조각을 들어 올립니다.
수술 상처를 닫기 위해, 1층으로 상처를 닫고 절개의 수직 부분을 향해 작업하는 수평 절개의 가장 caudal 부분에서 10 점 O 나일론 봉합사를 배치합니다. 각도에 도달하면 페트리 접시를 돌리고 다른 수평 절개를 봉합한 다음 수직 절개에 봉합사를 설정합니다. 마취를 종료하기 전에 고주파 초음파를 사용하여 부상 이미지를 얻습니다.
트랜스듀서의 끝을 동물의 길이 축과 정렬하고 동물의 뒷다리 뒤에 있는 용골 보다 몇 밀리미터 위에 도달할 때까지 벤조카인 용액에 담급됩니다. 상해 부위를 식별하고 원고 의 지시에 따라 이미지를 수집합니다. 완료되면, 5 센티미터 깊은 담수에 Petri 접시를 잠그고 동물이 미끄러지게함으로써 무모탈 용액에 도끼를 반환합니다.
이 프로토콜을 사용하여 생성된 척수 손상은 헤마톡시린과 에신을 사용하여 부상과 가짜 액졸로틀에 염색하여 검증되었습니다. 재생을 확인하기 위해 조직학적 섹션은 부상 후 9주 동안 준비되었습니다. 이미지는 부상당한 동물에서 다시 확립 된 척수 연결을 보여 주었다.
부상과 재생은 또한 신경 기능을 검사에 따라. 꼬리의 자극에 동물의 반응은 높은 촉각과 향각 감각 기능을 나타내는 높은 점수로 득점되었다. 부상당한 동물 중, 3 주 후 신경 기능의 손실, 그리고 9 주 이내에 점진적 복원.
척수 손상은 또한 혈관 무결성의 마커로 등동맥의 시각화를 허용 초음파 그래픽 이미징을 사용하여 시각화되었다. 하이필드 MRI 스캔은 부상 직후3주, 6주, 9주 후에 수행되었습니다. 이 검사는 척수 무결성의 부종 과 복원을 시각화 할 수 있었다.
검사는 즉시 부상을 게시, 소음하는 경향이 있었다. 환자와 세심한 수술은 척수에 조기 손상없이 laminectomy 후 성공적인 결과를위한 길을 열 것입니다. 이 절차에 따라 이미징 및 전기 생리학적 기술과 같은 여러 생체 내 방법을 적용할 수 있습니다.
