Bu protokol axolotl omurilik rejenerasyon araştırmalarında standart kontüzyon tipi yaralanma tanıtmak için ilk. Bu tekniğin en büyük avantajı, günlük klinikte görülen travmayı taklit ederek gelecekteki bir bulgunun tercüme edilme olasılığını artırmasıdır. Çürük yaralanma cihazı omurilik yaralanması başka bir küçük hayvan modeli nde kullanılabilir.
Cerrahi teknik zordur, özellikle laminektomi. Bu nedenle, in vivo cerrahi ilerlemeden önce hayvanların ex vivo çok sayıda prosedürü eğitmek için tavsiye edilir. Başlamak için, bir cerrahi tekstil bezi üstüne, bir stereo mikroskop altında standart bir Petri çanak yerleştirerek bir cerrahi tablo kurmak.
Anestezili axolotl'ı Petri kabının üzerine yatkın bir pozisyonda yerleştirin ve kuyruğun açığa olması için kağıt havlulara sarın. Arka ekstremiteleri tanımlayın ve onlara sadece kaudal ilk kesi yapmak için mikro makas bir çift kullanın. Spinous süreçlerin kemik çıkıntısı hissedilene kadar omurgadan dikey kesi yapın.
Kesiği yanal olarak genişletin, böylece kesi kuyruğun tüm genişliğini geçer ve uygun derinliği sağlamak için spinous prosesleri çertelerle kavrar. Daha sonra dikey kesiyi her iki taraftaki spinous işleminin bir milimetre altında genişletin. Bir tarafta hayvan yerleştirin ve dikey kesi ventral noktadan başlayarak, ağırlığı 10 ila 20 gram olan hayvanlar için yaklaşık 15 milimetre yatay bir kesi yapmak.
Vertebral kolon orta hatta hissedilene kadar yatay kesi ile hemen incelemek için makas kullanın. Sonra diğer tarafa hayvan açın ve işlemi tekrarlayın. Her iki taraftan derin medial düzlemde diseksiyon sonra, iki yatay kesibağlamak için orta hattan inceleyin.
Daha sonra, spinous süreçleri ortaya çıkarmak için kuyruk ve omurga serbest parçası bir tarafa taşıyın. Baş cerrahın baskın olmayan tarafına bakacak şekilde hayvanı yatkın bir konuma getirin ve dikenli süreçleri kavramak için bir çift çaksilik kullanın, sadece arka ekstremitelere kaudal. Hayvanın kafasına doğru hafifçe bir asansör uygulayın.
Mikro makas bir çift bıçakları sürecin etrafında yatay yerleştirin ve yavaşça kes, omurilik açığa. Az önce kaldırılan ait olana doğru spinous proses kaudal'ı tutun ve işlemi tekrarlayın. Çıkarıldığında omurilik hasar vermez emin olmak için spinous süreci üzerinde sürekli bir asansör tutmak zorunludur.
Maruz kalan alan yeterince geniş değilse, omuriliğin her iki tarafındaki laminayı kavramak için iki çift forseps kullanın ve hafif bir hareketle onları yanal olarak bükün. Spinous işlemini kaldırırken, bunu birden çok adımda yapmak gerekebilir. Bu nedenle, omurilik açığa birkaç dakika sürebilir.
Bir kontüzyon tipi yaralanma tanıtmak için, travma birimine hayvan transfer ve omurilik üzerinde bir el feneri parlaklık için bir Petri çanak kullanın. Daha sonra, mikro ayarlayıcıları kullanarak maruz kalan omuriliğin üzerine kontüzyon travma ünitesi silindirini yerleştirin ve silindiri lamina ile aynı seviyeye gelene kadar indirin. Düşen çubuğu elektro mıknatısa takın ve istenilen düşen yükseklik ayar silindirini travma ünitesine yerleştirin.
Daha sonra, düşen çubuğu silindirin üzerine yerleştirin, elektromıknatısı kapatıp çubuğu açıkta kalan omuriliğe bırakın ve çubuğu yukarı kaldırmak için yükseklik ayarlama vidasını kullanın. Keskin bir yaralanma tanıtıyorsanız, mükemmel bir dikey kesim omurilik kesmek, sonra vücudun kaudal tarafına iki milimetre kesikler tekrarlayın. Kesiklerin tamamlandığından emin olmak için omurilik kanalının ventral kısmı boyunca kazınan makanın bıçaklarını hissedin ve omurilik parçasını kanaldan kaldırın.
Cerrahi yarayı kapatmak için, 10 nokta o naylon dikişleri yatay kesinin en kaudal kısmından bir tabaka halinde yaraları kapatArak ve kesiğin dikey kısmına doğru çalışarak yerleştirin. Bir açı yada, Petri kabını çevirin ve diğer yatay kesileri dikin, sonra dikey kesilere dikişler yerleştirin. Anesteziyi sonlandırmadan önce, yaralanmanın görüntülerini elde etmek için yüksek frekanslı ultrason kullanın.
Dönüştürücünün ucunu hayvanın uzunluk ekseni ile hizalayın ve hayvanın arka ekstremitelerinin arkasındaki omurganın sadece birkaç milimetre yukarısına kadar benzocaine çözeltisine batırın. Yaralanma bölgesini belirleyin ve el yazması talimatlara göre resimler elde edin. Bittiğinde, petri kabını beş santimetre derin tatlı suya batırarak ve hayvanın kaymasını sağlayarak axolotl'ı anesteziiçermeyen çözeltiye geri döndürün.
Bu protokol kullanılarak oluşturulan omurilik yaralanmaları yaralı ve sahte aksokolotllarda hematoksilin ve eozin boyama kullanılarak doğrulandı. Rejenerasyonu doğrulamak için, histolojik bölümler yaralanma dan dokuz hafta sonra hazırlandı. Görüntülerde yaralı hayvanlarda yeniden kurulan omurilik bağlantısı ortaya çıktı.
Yaralanma ve yenilenme de nörolojik fonksiyonu inceliyoruz. Kuyruğun uyarılmasıiçin hayvanın tepkisi daha yüksek dokunsal ve nosiseptif duyusal fonksiyonları gösteren daha yüksek puanlar ile puanlandı. Yaralı hayvanlar arasında, nörolojik fonksiyon kaybı üç hafta sonra yaralanma, ve dokuz hafta içinde kademeli bir restorasyon oldu.
Omurilik yaralanması da ultrasonik grafik görüntüleme kullanılarak görselleştirilmiş, hangi damar bütünlüğünün bir belirteç olarak dorsal arter görselleştirilmesi için izin. Hi-field MRG taramaları yaralanmadan hemen sonra ve üç, altı ve dokuz hafta uygulandı. Bu taramalar ödem ve omurilik bütünlüğünün restorasyonu görselleştirmek başardık.
Taramalar hemen yaralanma sonrası, gürültüeğilimli idi. Hasta ve titiz cerrahi omurilik erken hasar olmadan laminektomi sonrası başarılı bir sonuç için önünü açacaktır. Bu işlemden sonra görüntüleme ve elektrofizyolojik teknikler gibi çeşitli in vivo yöntemler uygulanabilir.
