이 프로토콜은 상처 유발 폴리플로이드화를 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 세포가 성인 과일 비행에서 분할하는 대신 성장하는 조직 수리 과정을 보존하십시오. 간단한 천자 상처는 불과 2 일 이내에 플라이 상피에서 폴리 플로이디를 유도할 수 있습니다.
상피 세포 크기, 계피 및 조직, 다음 쉽게 평가 될 수 있습니다. 관심의 긴장의 10 에서 15 새로 폐쇄 된 여성 과일 파리를 포함하는 두 개의 바이알을 수집하여 시작합니다. 그리고 신선한 음식 바이알에서 파리를 노화, 약 5 수컷은 섭씨 25도에서 유리병 당 파리, 3 ~ 5 일 까지.
복변 의 끝에 복부 상처의 경우, 하나의 0.1 밀리미터 스테인레스 스틸 핀을 사용하여 여러 핀 홀더를 조립하고 각 핀의 날카로운 끝이 밖으로 진행됩니다. 스테레오 현미경으로 이산화탄소 플라이 패드에서 숙성된 암컷 과일 파리를 마취시합니다. 그리고 페인트 브러시를 사용하여 파리를 행으로 정렬합니다.
한 손에는 핀 홀더가 있고 다른 한 손에는 집게가 있는 안전 안경을 착용하면 집게를 사용하여 복부를 향하고 있는 파리를 배치합니다. 그런 다음 성인 여성이 복부 중간선 교반 의 양쪽에 대상 A4의 상피 파란색 오른쪽 영역 내에서 비행하고 원하는 실험 시간 포인트 후 부상까지 음식 유리병에 상처 파리를 반환합니다. 실험적인 엔드포인트에서 스테레오 현미경으로 각 마취 된 비행에 상처와 흉터의 존재를 확인하고 그레이스의 용액으로 9 개의 잘 유리 해부 접시 중 하나를 채웁니다.
한 쌍의 집게를 사용하여 흉부의 등쪽옆에서 부상당한 암컷의 비행을 파악하고 용액의 우물에 날아다앉습니다. 다른 한편으로는, 두 번째 쌍의 집게를 사용하여 과일 플라이의 뒤쪽에서 대상 A6 아래의 등쪽 큐티클을 펑크하고 제거하십시오. 내부 장기가 추출되지 않으면 복부의 등쪽 쪽에 압력을 가하여 나머지 장기를 짜냅니다.
포셉을 사용하여 표적 A2 위의 흉부 접합부에서 전체 복부를 스냅하고 그레이스의 용액의 약 100 마이크로 리터를 포함하는 우물로 복부를 전송합니다. 모든 복부를 수집하면 컬렉션에서 Grace의 용액의 양을 30 마이크로 리터로 줄입니다. 한 손에 집게를 사용하여 복부의 등쪽 측면을 아래로 잡고 다른 손으로 베니스 스프링 가위의 하단 블레이드를 각 복부의 복강으로 삽입하고 복부가 완전히 열릴 때까지 등쪽 미드라인을 따라 자른다.
그레이스의 용액 30마이크로리터를 복부 장착 면적당 4.1mm 핀으로 건조 해부 판의 각 마운팅 영역에 추가하고 필렛 복부를 용액 의 물방울에 넣습니다. 모든 복부가 필레를 채우고 배치하면 복부를 4 개의 등대 모서리에 있는 접시에 고정하십시오. 조직이 복부 조직을 찢거나 과도하게 늘려지지 않고 평평하게 누워 있다는 것을 주의하십시오.
그런 다음 Grace의 솔루션을 장착 영역당 고정 솔루션인 30 마이크로리터로 대체합니다. 그리고 각 접시의 하단에 테이프 라벨을 놓아 각 제어 및 실험 그룹을 표시합니다. 플라이 티슈 샘플을 장착합니다.
염색 후, 스테레오 현미경의 밑에 해부 판에서 복부를 풀어 내는 포셉을 사용합니다. 또한 집게를 사용하여 각 샘플을 등쪽 측면으로 개별 유리 커버 슬립에 장착 매체의 약 30 마이크로리터로 전송합니다. 스테레오 현미경하에서 복부 조직을 방향을 조정하여 내부가 덮개 슬립쪽으로 아래로 향하고 있으며 집게를 사용하여 각 미디어 물방울의 가장자리로 지향되는 복부를 당깁니다.
장착된 각 커버 슬립을 표지유리 슬라이드에 놓습니다. 그리고 실험실 조직을 사용하여 과도한 장착 매체를 제거하십시오. 그런 다음 뚜껑 미끄러짐의 가장자리를 명확한 매니큐어로 밀봉하고 슬라이드 박스에 슬라이드를 4섭씨까지 보관합니다.
세포 세포 접합에 라벨을 붙이는 격막 접합 단백질 3회는, 제조 중에 어떤 처리 동요가 일어났는지 여부를 나타내는 지표를 제공한다. 상처 부위를 어기는 얼룩진 부위의 큰 상처를 가진 복부는 폐기되어야하며 분석에 포함되지 않아야합니다. 중앙 대형 다핵 세포가 상처 딱지를 덮을 때 상처 수리가 완료됩니다.
상피 시트에 10 마이크로미터 이상의 틈새는 상처 폐쇄 및 재상화의 결함으로 간주됩니다. 억제된 미토틱 세포 활성화를 가진 파리를 이용한 이 대표적인 분석에서는, 상처의 52%는 상처 딱지 위에 연속상피 시트를 형성할 수 없었다. 이 멤브레인 상처 치유 에세이는 상처 수리 결함의 정도에 대한 자세한 정보를 제공하여 상피 결함이 완전히 열리거나 부분적으로 닫히거나 완전히 닫히도록 그룹화할 수 있도록 합니다.
예를 들어, 본 실험에서 엔도 복제 및 세포 융합의 동시 차단에 의해 상처 유도 된 폴리플로이화의 억제, 상피 상처의 92 %에서 완전히 개방 된 상태로 발생. 미토세포 주기의 활성화는 상피 상처 폐쇄 결함을 초래했다. 또한, 세포 주기 활성은 티미딘 아날로그 EDU 및 상피 계략의 편입에 의해 검출되었고 핵 DNA 함량을 직접 측정하여 결정하였다.
복부 상피를 해부 할 때, 이 샘플을 긁을 것입니다으로 분부 도구중 하나로 조직을 만지지 않도록주의하십시오. 해부 후, 세포 증식, 세포 사멸, 세포 손실 절개 크기 또는 핵 DNA 함량 평가는 상처 유도 된 다중 계화를 더 잘 이해하기 위해 수행 될 수있다. 또는 상피 내의 다른 프로세스.
