Modelo de balão de venoplastia de veia cava inferior de roedores

Resumo

O protocolo apresenta um modelo de roedor de sobrevivência para testar intervenções com balão de venoplastia (VB) em veias profundas não trombóticas, trombóticas e pós-trombóticas.

Resumo

A venoplastia por balão é uma técnica clínica comumente usada para tratar estenose e oclusão venosa profunda como consequência de trauma, anormalidades anatômicas congênitas, trombose venosa profunda aguda (TVP) ou implante de stent. A obstrução venosa profunda crônica é caracterizada histopatologicamente por trombose, fibrose ou ambas. Atualmente, nenhum tratamento direto está disponível para atingir esses processos patológicos. Portanto, é necessário um modelo animal in vivo confiável para testar novas intervenções. O modelo de balão de venoplastia de venoplastia de veia cava inferior (VCI) de sobrevivência de roedores (VBM) permite o estudo da venoplastia por balão em condições não trombóticas e pós-trombóticas em vários pontos de tempo. O efeito local e sistêmico dos balões de venoplastia revestidos e não revestidos pode ser quantificado por meio de ensaios de tecido, trombo e sangue, como reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-PCR), western blot, ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA), zimografia, análise celular da parede venosa e do trombo, ensaios de sangue total e plasma e análise histológica. O VBM é reprodutível, replica intervenções cirúrgicas humanas, pode identificar alterações proteicas locais na parede venosa e permite múltiplas análises da mesma amostra, diminuindo o número de animais necessários por grupo.

Introdução

As obstruções venosas profundas causadas por trombos não resolvidos são uma consequência comum da trombose venosa profunda (TVP) e são uma das causas da síndrome pós-trombótica (PTS), custando bilhões de dólares em saúde e impactando significativamente a qualidade de vida ^1,2,3. A SPT é uma patologia inflamatória única com consequente^{fibrose da} parede venosa4 não totalmente capturada em modelos de TVP de pequenos animais ^5,6,7 e, mais importante, modelos anter....

Protocolo

O protocolo a seguir segue as políticas e diretrizes do Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais (IACUC) da Universidade de Michigan (UMICH), os Princípios do Governo dos EUA para a Utilização e Cuidado de Animais Vertebrados Usados em Testes, Pesquisa e Treinamento e as diretrizes ARRIVE 2.0. O contrato de Garantia de Bem-Estar Animal da UMICH está em conformidade com OLAW e USDA e é totalmente credenciado pela AAALAC International. Este protocolo foi aprovado com o número de identificação PRO00010841. Foram utilizados ratos Sprague Dawley machos da raça externa do Charles River Laboratories, pesando 450 g e 15 semanas de idade.

Resultados

O VBM é um modelo que avalia o efeito dos balões de venoplastia no controle completo da hemostasia. Primeiramente, quantificamos o diâmetro da VCI (seção infrarrenal média), conforme mostrado na Figura 1, para o correto dimensionamento do balão. Em segundo lugar, a técnica microcirúrgica passo a passo desenvolvida é ilustrada na Figura 2, e também mostramos exemplos das etapas críticas na Figura 3. Observe a abordagem re.......

Discussão

O VBM pode ser realizado em ratos ≥ 250 g usando balões na faixa de 2,5-3,5 mm. Para ratos com mais de 750 g, a técnica é limitada por uma maior quantidade de tecido adiposo na cavidade abdominal e no tamanho do órgão, em vez de alterações no diâmetro da VCI. A partir de nossa experiência, descobrimos que 10 ou mais animais por grupo são necessários para obter significância estatística entre os grupos para análise de proteínas da parede venosa ou ensaios de atividade e histologia. O controle periódico d.......

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
3-0 DemeCRYL	DemeTech	G183019F4P	12 per box
5-0 DemeCRYL	DemeTech	G285017B0P	12 per box
7-0 DemeLENE	DemeTech	PM197011F13M	12 per box
8-0 DemeLON	DemeTech	NL868007C7P	12 per box
Angled Clip Applier	SCANLAN	3795-01A	7-1/4″ (18.5 cm)
Baxter 0.9% Sodium Chloride Irrigation Bottle	Baxter	SKU: 195-7124	1000mL Bottle
Bovie Cautery Low Temperature Fine Tip	Symmetry Surgical Inc	AA00	10/bx
Buprenorphine	Fidelis Animal Health	SKU- 099114	1.3mg/mL, 3mL
CD (Sprague Dawley) Rats	Charles River	Strain Code 001	Male, 400 gm
Clip-It Traceable Timer	TRACEABLE PRODUCTS	Cat. No. 5046
Cotton-Tip Applicator 3"	Dukal Corporation	922-00037BX100	1000/BOX
Enzymatic Surgical Instrument Detergent and Presoak	Medline	MDS88000B9	1 Gal
Eye Lube	Optixcare	SKU-065441	20gm
Gaymar T/Pump Stryker Localized Warming/Cooling Therapy System	Stryker	TP700
Heifetz Microclips 12mmx2.25mm	SCANLAN	3795-20	Straight
Heifetz Microclips 12mmx2.25mm	SCANLAN	3795-28	Curved
Heifetz Microclips 8mmx1.75mm	SCANLAN	3795-14	Straight
Heifetz Microclips 8mmx1.75mm	SCANLAN	3795-18	Curved
Inflation device	Merit Medical	IN4130	BasixCOMPAK with Analog Display
Isoflurane	MFR VETONE	SKU-501017	100mL, Liquid for Inhalation
Microsurgery kit containing tweezers and forceps	Customized
Oxygen, E-tank	Medline	MDM1630
Sharpened Guidewire	Customized
Sterile Glad Press-n-Seal	Glad	SKU # PSS-140	ETO Exposed
Sterile Nonwoven Gauze Sponges 2s 4ply 4x4	Medline	SKU PRM21444H	100Ct
Surgical microscope	Zeiss	S100 / OPMI pico
Surgical Scrub & Handwash	Vetoquinol	NDC: 17030-003-16	16 oz
Ultrasound Gel	Medline	CTR001305	8.5 oz, 12/CS
Ultrasound system	Siemens	ACUSON Antares	3-D, Color, Continuous wave (CW), Pulsed wave (PW), Power CW/CW Spectral
Venoplasty Balloon	Customized