Coloque as placas de assentamento TSA e SAB rotuladas perto da área de trabalho, mas em uma área que não interfira nos testes. Documente a hora de início da amostragem. De forma asséptica, abra ambas as placas, colocando as tampas em uma superfície limpa no armário de segurança biológica longe da área de trabalho por até quatro horas para evitar que o ágar seque.
Ao final do processamento, feche as tampas das placas e documente o tempo de parada da amostragem. Soltamente, ensaque os pratos e incube as culturas. Para amostragem da ponta do dedo enluvado, obtenha duas placas TSALT marcadas.
Retire assepticamente a tampa das placas e coloque-a numa superfície de trabalho limpa, longe da área de amostragem. Enrole suavemente a almofada de cada dedo e polegar na superfície da placa. Use força suficiente para fazer ligeiras depressões no ágar sem rachar a superfície do ágar.
Coloque a tampa de volta na placa assepticamente. Depois de higienizar as mãos no final da amostragem, ensaque os pratos e incube as culturas. Para a inoculação direta, seguindo o método da Farmacopeia dos Estados Unidos, coloque as placas de decantação TSA e SAB no gabinete de biossegurança.
Depois de preparar o gabinete e preparar os materiais, documente a hora de início da amostragem. Obter o artigo de teste e os frascos de meio de caldo de soja tríptico e tioglicolato fluido associados. Se os frascos tiverem um septo, remova as tampas protetoras de cada frasco e limpe o septo com um lenço de álcool estéril.
Vórtice o artigo de teste para garantir uma suspensão homogênea e inocular os frascos com um volume validado do artigo de teste usando uma seringa estéril e uma agulha hipodérmica. Limpe o septo com um lenço de álcool estéril e insira uma unidade de ventilação estéril para permitir a troca de ar durante a incubação. Repita as etapas para cada artigo de teste dessa sessão.
Feche assepticamente as placas de decantação TSA e SAB e documente o tempo final da amostragem antes de realizar a amostragem da ponta do dedo enluvado. Limpe as luvas com álcool isopropílico 70% estéril, ensaboe os pratos e incube as culturas. Transfira todos os materiais de teste para fora do gabinete de segurança biológica.
Da mesma forma, para inoculação direta, seguindo o método alternativo de teste de esterilidade do NIH, coloque as placas de assentamento TSA e SAB no gabinete de biossegurança e documente a hora de início da amostragem. Obtenha o artigo de teste e o IFA Plus associado rotulado, IFN Plus rotulado e placa SAB. Retire as tampas protetoras dos frascos IFA Plus e IFN Plus e limpe o septo com um lenço de álcool estéril.
Depois de agitar o artigo teste, inocular os frascos com volume validado do artigo teste usando uma seringa estéril e uma agulha hipodérmica e limpe o septo novamente. Incubar os frascos no instrumento BACT/ALERT Dual T. Usando um pipetter, inocular a placa SAB com uma quantidade validada do artigo de teste e estria para isolamento usando uma alça estéril.
Deixe descansar por 10 minutos para garantir que a amostra não escorra para a tampa da placa quando invertida para incubação Coloque cada placa SAB inoculada com um artigo de teste em um saco plástico. Amarre-os frouxamente. Fechar assepticamente as placas de decantação TSA e SAB.
Documente a hora de término da amostragem nas placas e realize a amostragem da ponta do dedo enluvado. Após a amostragem, limpe as luvas com álcool a 70%. Ensace os pratos depois de limpar as luvas com álcool e incube as culturas.
Uma placa de decantação de ar TSA ilustrando uma única colônia de um contaminante cultivado durante o monitoramento passivo do processo de ar no gabinete de segurança biológica é mostrada aqui. A placa de amostragem da superfície TSALT com três unidades formadoras de colônias de duas morfologias de colônias distintas é mostrada nesta figura. A cultura de superfície TSALT com uma única colônia na borda da placa indica mau manuseio asséptico durante o processo de amostragem.
O método correto para obter amostras enluvadas da ponta do dedo usando a maior área de superfície de cada dedo ou polegar é mostrado nesta imagem. O processo incorreto em que apenas a ponta do dedo é amostrada é mostrado aqui. Um exemplo de bolas de mofo visíveis a olho nu que não foram detectadas automaticamente pelo sistema BACT/ALERT é mostrado aqui.
Com base nesses achados, recomenda-se a inspeção visual terminal de todos os frascos BACT/ALERT e a adição da placa SAB para cultura fúngica usando o método alternativo de teste de esterilidade do NIH.
