Para começar, pegue o sapo que foi imerso na solução de eutanásia por uma hora e aperte seu pé para verificar a ausência de resposta à dor. Pese o Xenopus e faça medições adicionais, como o comprimento do focinho à abertura. Coloque o sapo de costas e prenda seus membros perto do corpo.
Usando uma tesoura de dissecção, faça uma incisão na pele ao longo da linha média e, em seguida, estenda-a lateralmente para criar dois retalhos de pele. Em seguida, localize a linha alba e segure-a com uma pinça. Puxe-o suavemente da cavidade celômica e, usando uma tesoura, corte a musculatura subjacente.
Crie duas abas a partir da parede da cavidade. Identifique o coração ainda batendo e use uma tesoura de dissecação para aparar os ossos coracoides para melhor acesso. Agora empregue uma pinça de tecido para identificar o pericárdio fino e esticá-lo.
Usando a ponta da tesoura de iridectomia, perfure cuidadosamente o pericárdio. Em seguida, remova o pericárdio das três câmaras do coração. Neste protocolo, são mostradas as amostras do ventrículo cardíaco, lobo esquerdo do fígado, pâncreas, corpo adiposo, rins pareados.
Para amostrar o ventrículo cardíaco, segure o ventrículo no ápice com uma pinça, localize sua conexão com as aurículas e o tronco arterial e corte-o abaixo desses pontos. Em seguida, observe os três lobos do fígado. Levante o lobo esquerdo suavemente para expor os ductos hepáticos e císticos e faça uma amostra de um terço desse lobo abaixo dos ductos.
Se o sapo for fêmea, localize o ovário coberto pelo epitélio germinativo. Reposicione suavemente os lóbulos de cada lado para revelar a área de fixação. Use uma tesoura para extirpar os ovários o mais próximo possível dos rins sem danificá-los.
Em seguida, examine o lobo medial do fígado e suas conexões com o estômago e o duodeno através do mesentério e do ducto hepatopancreático. Usando uma tesoura de iridectomia, corte o mesentério, o ligamento hepatoduodenal e o ducto hepatopancreático próximo ao duodeno. Separe o pâncreas e o ducto do lobo medial do fígado sem deixar tecido hepático escuro aderido.
Em seguida, segure o estômago com a ajuda de uma pinça dentada e, em seguida, use uma pinça de tecido para segurar a extremidade superior do pâncreas. Sob ampliação de 5X, separe cuidadosamente o pâncreas do estômago. Agora localize e excise a bexiga urinária, cortando o mais próximo possível da cloaca e, em seguida, descarte o tecido.
Em seguida, identifique o intestino grosso e estique-o, cortando-o próximo à cloaca. Em seguida, separe os corpos gordurosos de cada lado, segure a base do corpo gorduroso esquerdo e corte-o do peritônio. Nos casos de rãs fêmeas ou machos com ovidutos vestigiais visíveis, segure um oviduto e separe-o do rim e da cloaca.
Corte a junção da cloaca e continue a separá-la do rim, removendo quaisquer anexos peritoneais claros. Agora use uma pinça para segurar os rins e corte o peritônio na extremidade inferior. Levante os rins da cavidade celômica usando uma tesoura.
Separe o peritônio o mais próximo possível dos rins sem causar danos. Sob ampliação de 5X, remova qualquer excesso de peritônio e tecidos residuais, como testículos, corpos gordurosos ou baço. Depois de soltar o animal, coloque-o de bruços e prenda seus membros.
Escolha um membro posterior para amostragem e prenda seu pé. Extirpar um retalho de pele em forma de amêndoa sobre a área do gastrocnêmio ou tibiofíbula. Depois, enxágue todas as amostras em PBS, verifique se há excesso de tecido e apare antes de usar, se necessário.
O ventrículo cardíaco, o lobo esquerdo do fígado, o pâncreas, os corpos gordurosos esquerdos, rins pareados e um retalho de pele foram excisados de forma limpa dentro de uma hora após a eutanásia.
