Легкое получение и фотоактивация наносборок пролекарства и красителя

Резюме

В этом протоколе описывается изготовление и характеристика фоточувствительной наносборки пролекарство-краситель. В явной форме описана методология высвобождения лекарственного средства из наночастиц путем разборки, вызванной светом, включая установку светового облучения. Препараты, высвобождаемые из наночастиц после светового облучения, проявляли отличные эффекты против пролиферации колоректальных опухолевых клеток человека.

Аннотация

Самосборка — это простой, но надежный метод построения наноразмерных систем доставки лекарств. Фотоактивируемые пролекарства обеспечивают контролируемое высвобождение лекарств из наноносителей в целевых участках, модулированных световым облучением. В этом протоколе представлен простой метод получения фотоактивируемых наночастиц пролекарства и красителя путем молекулярной самосборки. Подробно описаны процедуры синтеза пролекарств, изготовления наночастиц, физической характеристики наносборки, демонстрации фоторасщепления и проверки цитотоксичности in vitro . Впервые был синтезирован фоторасщепляемый бор-дипиррометен-хлорамбуцил (BC) пролекарство. BC и краситель ближнего инфракрасного диапазона IR-783 в оптимизированном соотношении могут самособираться в наночастицы (IR783 / BC NP). Синтезированные наночастицы имели средний размер 87,22 нм и поверхностный заряд -29,8 мВ. Наночастицы разбирались при облучении светом, что можно было наблюдать с помощью просвечивающей электронной микроскопии. Фоторасщепление BC было завершено в течение 10 мин с эффективностью восстановления хлорамбуцила 22%. Наночастицы проявляли повышенную цитотоксичность при световом облучении на длине волны 530 нм по сравнению с необлученными наночастицами и облученным свободным пролекарством BC. Этот протокол является справочным материалом для создания и оценки фоточувствительных систем доставки лекарств.

Введение

Химиотерапия является распространенным методом лечения рака, в котором используются цитостатические агенты для уничтожения раковых клеток и, таким образом, ингибирование роста опухоли¹. Однако пациенты могут страдать от побочных эффектов, таких как кардиотоксичность и гепатотоксичность, из-за нецелевого всасывания химиотерапевтических препаратов ^2,3,4. Таким образом, локализованная доставка лекарственного средства посредством пространственно-временного контроля высвобождения/активации лекарственного средства в опухолях имеет важное значение для минимизации воздействия лекарственного средства на нормальные ткани.

Пролекарства представляют собой химически модифицированные препараты, которые проявляют пониженную токсичность в нормальных тканях, сохраняя при этом свое действие при пораженных поражениях при активации ^5,6. Пролекарства могут реагировать на различные раздражители, такие как рН^7,8, ферменты^9,10, ультразвук 11,12, тепло 13 и свет ^14,15,1 6^, и высвобождать свои исходные лекарства именно в поражениях. Тем не менее, многие пролекарства имеют присущие им недостатки, такие как плохая растворимость, неправильная скорость всасывания и раннее метаболическое разрушение, что может ограничить их развитие¹⁷. В этом контексте образование пролекарственных наносборок предлагает такие преимущества, как снижение побочных эффектов, высвобождение лекарств in situ, лучшее удержание и сочетание лечения и визуализации, что указывает на большой потенциал применения этих наносборок. Для лечения заболеваний было разработано множество промедикаментозных наносборок, в том числе наносферы пролекарства доксорубицина, мицеллы пролекарства куркумина и нановолокна пролекарства камптотецина¹⁸.

В этом протоколе мы представляем простой метод получения наносборок пролекарства и красителя, которые демонстрируют высокое содержание пролекарства, хорошую диспергируемость в воде, долговременную стабильность и чувствительную способность реагировать. IR783 представляет собой водорастворимый краситель ближнего инфракрасного диапазона, который может служить стабилизатором наносборок¹⁹. Другим компонентом наносборки является бор-дипиррометен-хлорамбуцил (BODIPY-Cb, BC), пролекарство, которое было разработано по двум основным причинам. Поскольку хлорамбуцил (Cb) проявляет системную токсичность in vivo, пролекарственная форма может снижать его токсичность²⁰. Пролекарство BC может быть фоторасщеплено с использованием светового излучения 530 нм, направленного на поражения заболевания, что обеспечивает локальное высвобождение Cb. С другой стороны, Cb склонен к гидролизу в водных средах и может быть защищен путем преобразования его в пролекарственную форму²¹. Таким образом, ожидалось, что совместная сборка пролекарства BC и красителя IR-783 образует стабильную и эффективную наносистему доставки лекарств (рис. 1A). Эта наносборка пролекарства-красителя улучшает диспергируемость и стабильность молекул пролекарства, что указывает на ее потенциал для применения в светоконтролируемой доставке лекарств. Фоторасщепление пролекарства BC обеспечивает разборку наночастиц и контролируемое светом высвобождение Cb в поражениях (дополнительный рисунок 1).

протокол

1. Синтез бор-дипиррометена-хлорамбуцила (БК) пролекарства (рис. 2)²²

1. Синтез BODIPY-OAc
   1. Взвесьте 1,903 г 2,4-диметилпиррола и растворите его в 20 мл безводного дихлорметана (DCM) в колбе с круглым дном в атмосфере азота. Взвесьте 1,638 г ацетоксиацетилхлорида и добавьте его по каплям в раствор. Продолжайте помешивать в течение 10 минут при комнатной температуре, а затем кипите раствор с обратным холодильником в течение 1 ч при 40 °C.
   2. Остудите смесь до комнатной температуры. Взвесьте 5,170 г N,N-диизопропилэтиламина (DIPEA) и добавьте его по каплям в смесь при перемешивании. Через 30 мин взвесьте 5,677 г диэтилэфирата трифторида бора (BF₃· 2_{), добавьте} его по каплям в раствор и продолжайте помешивать еще 30 минут.
   3. Добавьте в смесь 10 г силикагеля (200-400 меш) и удалите растворитель вращательным выпариванием при 45 °C. Остановите испарение, когда силикагель вернется в сухой порошок.
   4. Добавьте фритту в нижнюю часть картриджа (см. Таблицу материалов). Залейте силикагель (из шага 1.1.3) в картридж, а затем добавьте еще одну фритту в картридж в верхней части заполненного геля.
   5. Закрепите картридж в воротнике, соединенном с системой флэш-хроматографии (см. Таблицу материалов) и поверните его, чтобы зафиксировать. Установите картридж поверх шестиходового клапана в системе флэш-хроматографии и установите колонку вспышки (см. Таблицу материалов) под клапаном.
   6. Запустите хроматографический прибор и установите 515 нм и 365 нм в качестве длин волн детектирования. Выполните элюирование 4/3 (об./об.) гексана/ДКМП. Соберите фракции элюента при появлении сигнала 515 нм.
   7. Растворитель удаляется из собранных фракций вращательным выпариванием при 40°С до тех пор, пока растворитель не перестанет собираться в колбе для сбора растворителя. Поместите твердый продукт в вакуумную сушильную камеру на ночь, чтобы удалить остатки растворителя.
2. Синтез БОДИПИ-ОН
   1. Взвесьте 1,120 г BODIPY-OAc (синтезированного на стадии 1.1) и растворите его в 70 мл тетрагидрофурана (ТГФ) при комнатной температуре, полностью накрыв фольгой. Добавьте 70 мл 0,1 М водного раствора LiOH по каплям в раствор BODIPY-OAc.
   2. Перемешивайте смесь в течение 30 мин и удаляйте растворитель при 40 °C вращательным испарением до тех пор, пока растворитель не перестанет собираться в колбе для сбора растворителя. Поместите остатки в вакуумную сушильную камеру на ночь, чтобы удалить воду.
   3. Сухой остаток растворить в 30 мл DCM и добавить в раствор 10 г силикагеля. Удалите растворитель вращательным выпариванием при 40 °C. Остановите испарение, когда силикагель вернется в сухой порошок.
   4. Очистите продукт BODIPY-OH с помощью колоночной хроматографии, следуя шагам с 1.1.4 по 1.1.6, используя только DCM в качестве элюента.
   5. Сравните фракции, собранные в разные моменты времени элюирования, с раствором ТГФ BODIPY-OAc на тонкослойной хроматографии (ТСХ) и идентифицируют продукт²³.
      1. Нанесите 3-4 мкл элюированной фракции и раствора BODIPY-OAc отдельно на один край пластины TLC на той же высоте. Поместите пластину TLC в стеклянную камеру, содержащую 1 мл DCM, погрузив пятнистый край в растворитель DCM, но с двумя пятнами из растворителя.
      2. Выньте пластину TLC, когда растворитель DCM достигнет более половины высоты пластины. Выберите элюированную фракцию с пятном TLC на высоте, отличной от пятна BODIPY-OAc.
   6. Растворитель удаляют вращательным выпариванием при 40 °C (этап 1.1.7) для получения продукта BODIPY-OH.
3. Синтез BODIPY-(Me)_2-OH
   1. Взвесьте 313 мг BODIPY-OH и растворите его в 35 мл безводного диэтилового эфира в темноте в атмосфере азота. Добавьте 3,75 мл йодида метилмагния (3 М в диэтиловом эфире) по каплям в раствор и продолжайте помешивать в течение 3 ч при комнатной температуре.
   2. Погасите реакцию, добавив 3,5 мл воды по каплям.
   3. Извлеките смесь с помощью DCM и воды.
      1. Перелейте смесь в разделительную воронку объемом 125 мл. Добавьте в смесь 20 мл DCM.
      2. Закройте крышку разделительной воронки. Наклоните воронку примерно на 45° и слегка встряхните воронку. Откройте крышку, чтобы сдуться. Повторите этот шаг 3 раза и дайте постоять 3 минуты.
      3. Откройте нижний клапан и соберите нижнюю органическую фазу в стакан.
      4. Добавьте 30 мл DCM в водную фазу. Повторите экстракцию (этапы 1.3.3.2 и 1.3.3.3) 3 раза с 30 мл DCM каждый раз.
   4. Добавьте 10 г твердого Na₂SO₄ в собранную органическую фазу, чтобы высушить органическую фазу в течение ночи.
   5. Подсоедините фильтрующую колбу к вакуумному насосу с помощью резиновой трубки. Положите лист фильтровальной бумаги на воронку Бюхнера и вставьте воронку в верхнюю часть колбы. Смочите фильтровальную бумагу 1 мл DCM, перелейте смесь в воронку и включите вакуумный насос. Соберите органический раствор в колбу.
   6. Добавьте в органический раствор 10 г силикагеля. Удалите органический растворитель вращательным испарением при 40 ° C до тех пор, пока силикагель не превратится в сухой порошок. Очистите продукт BODIPY-(Me)_2-OH с помощью колоночной хроматографии (этапы с 1.1.4 по 1.1.6) с гексаном/DCM = 1/1 (об./об.) в качестве элюента.
   7. Выберите элюированные фракции, содержащие продукт, с помощью TLC-анализа, как описано на шаге 1.2.5 (точка TLC на высоте, отличной от BODIPY-OH). Растворитель удаляют вращательным выпариванием при 40 °C для получения продукта, как описано на этапе 1.1.7.
4. Синтез БОДИПИ-₍Me)2-I2-OH
   1. Взвесьте 41 мг BODIPY-(Me)2-OH и растворите его в _2,5 мл безводного ТГФ в темноте в атмосфере азота. Взвесьте 74 мг N-йодсукцинимида и растворите его в 1 мл безводного ТГФ.
   2. Добавьте раствор N-йодсукцинимида по каплям в раствор BODIPY-(Me)_2-OH. После перемешивания в течение 3,5 ч при комнатной температуре удаляют растворитель вращательным выпариванием при 40 °C до тех пор, пока растворитель не перестанет собираться в колбе для сбора растворителя на ротационном испарителе.
   3. Растворите остаток в 10 мл DCM и промойте его 3 раза 3 мл воды каждый раз, как описано в шаге 1.3.3. Высушите органическую фазу с помощью Na₂SO 4 (этапы 1.3.4 и 1.3.5). Удаляют растворитель вращательным выпариванием при 40 °C (этап 1.1.7) для получения продукта BODIPY-(Me)2-I _2-OH.
5. Синтез BODIPY-Cb
   1. Взвесьте 85 мг хлорамбуцила и растворите его в 2 мл безводного DCM в темноте в атмосфере азота. Взвесьте 69 мг N,N'-дициклогексилкарбодиимида и растворите его в 1 мл безводного ДКМП. Добавьте его по каплям в раствор хлорамбуцила при помешивании в течение 10 мин.
   2. Растворите 1,7 мг 4-диметиламинопиридина в 0,5 мл безводного DCM. Добавьте этот раствор в смесь и продолжайте помешивать в течение 10 минут при комнатной температуре. Затем добавьте 73 мг BODIPY-₍Me)2-I 2-OH, растворенного в 2 мл безводного DCM, и продолжайте помешивать в течение₂ часов.
   3. Добавьте в смесь 10 г силикагеля и удалите растворитель вращательным выпариванием при 40 °C. Остановите испарение, когда силикагель вернется в сухой порошок. Очистите продукт BODIPY-Cb с помощью колоночной хроматографии (этапы с 1.1.4 по 1.1.6, длина волны сигнала 540 нм и 365 нм) с гексаном/DCM = 7/3 (об./об.) в качестве элюента.
   4. Выберите элюированные фракции, содержащие продукт, отличный от BODIPY-(Me)2-I 2-OH, с помощью TLC-анализа (этап _1.2.5). Растворитель удаляют вращательным выпариванием при 40 °C (этап 1.1.7) для получения продукта BODIPY-Cb.

2. Получение НП IR783/BC методом мгновенного осаждения

1. Взвесьте 10 мг пролекарства BC (BODIPY-Cb) и растворите его в 1 мл ДМСО в микропробирке объемом 1,5 мл, чтобы получить исходный раствор 10 мг / мл. Накройте раствор БК фольгой.
2. Приготовьте 300 мкл 0,4 мг/мл IR-783 в отфильтрованной деионизированной воде в микропробирке объемом 1,5 мл. Поместите эту микротрубку на вихревой смеситель со скоростью 1,500 об/мин.
3. Добавьте 20 мкл раствора БК в ДМСО в раствор IR-783 в течение 10 с с постоянной скоростью с помощью пипетки 20 мкл. Конец наконечника пипетки должен касаться внутренней стенки микротрубки (рис. 1Б).
4. Держите микротрубку на вихревом смесителе еще 30 с, чтобы получить раствор IR783/BC NP. Затем поместите раствор наночастиц на решетку, полностью покрытую фольгой.
5. Центрифугируйте полученный раствор IR783/BC NP в течение 10 мин при 2 000 x g и 4 °C для удаления агрегатов. Соберите надосадочную жидкость, оставив ~ 20 мкл в пробирке, чтобы не нарушить гранулу. Выбросьте гранулы.
6. Дважды центрифугируют надосадочную жидкость в течение 30 мин при 30 000 x g и 4 °C и собирают наночастицы в осадок из обоих центрифугирований. Ресуспендировать наночастицы в 300 мкл 1x PBS.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Когда гидрофобное пролекарство BC в ДМСО диспергируется в воде с помощью вихря, ДМСО растворяется водой, и молекулы пролекарства имеют тенденцию образовывать наноразмерные сборки, чтобы оставаться стабильными в ситуации локального пересыщения²⁴.
7. Количественно определите содержание IR-783 и BC с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием метода элюирования, показанного в таблице 1.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Образец ВЭЖХ готовят путем смешивания равных объемов раствора наночастиц и ацетонитрила. Объем впрыска составляет 20 мкл. Длина волны обнаружения для хлорамбуцила и пролекарства BC составляет 260 нм, а длина волны обнаружения для IR783 составляет 783 нм. Колонка для ВЭЖХ представляет собой аналитическую колонку C18 размером 4,6 мм (внутренний диаметр) x 100 мм (длина) с размером частиц 2,7 мкм и размером пор 120 Å.
8. Рассчитайте эффективность инкапсуляции пролекарства (EE%) и грузоподъемность (LC%) в соответствии со следующими уравнениями:
   

Время (мин)	Ацетонитрил (%)	Вода (%)
0	20	80
5	20	80
30	95	5
35	95	5

Таблица 1: Метод ВЭЖХ для качественного и количественного анализа пролекарства БК и его фоторасщепления. Воспроизведено с разрешения²⁵. Авторское право 2022, Wiley.

3. Характеристика НП IR783/BC

1. Измерьте средний размер NP IR783/BC с помощью прибора динамического рассеяния света (DLS) (см. Таблицу материалов). Добавьте 200 мкл раствора IR783/BC NP в кювету и вставьте кювету в держатель для измерения. Установите тип измерения как «размер» и температуру измерения как 25 °C. Выполните три измерения продолжительностью 20 с для каждого измерения.
2. Измерьте поверхностный заряд NP IR783/BC с помощью прибора DLS с помощью кюветы для тестирования дзета-потенциала.
   1. Разбавьте 25 мкл раствора IR783/BC NP 725 мкл деионизированной воды в микропробирке объемом 1,5 мл и добавьте раствор в кювету для дзета-потенциала. Поместите кювету в канавку для образца. Закройте канавку для образца.
   2. Установите тип измерения как «дзета-потенциал» и температуру измерения как 25 °C. Выполните 10 измерений.
3. Подготовьте образцы для визуализации с помощью просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ). Добавьте 10 мкл раствора IR783/BC NP на кусок дырявой углеродной пленки на медной сетке (300 меш) и удалите 7 мкл. Оставьте 3 мкл раствора на пленке на ночь для самоиспарения.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Добавление 10 мкл раствора NP с последующим удалением 7 мкл позволяет капле покрыть более широкую область пленки.

4. Фотоактивация НП IR783/BC

1. Установите светодиодную лампу (530 нм; см. Таблицу материалов) с железной подставкой так, чтобы светильник был направлен прямо на операционный пол. Поместите фотодиодный фотодиод интегрирующей сферы (см. Таблицу материалов) непосредственно под светодиодной лампой.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы предотвратить влияние света окружающей среды, все эксперименты по световому облучению проводятся в темной комнате.
2. Включите светодиодную лампу и откройте крышку фотометра. Запишите освещенность и установите параметры лампы с помощью соответствующего программного обеспечения (см. Таблицу материалов). Отрегулируйте входной ток (мА), чтобы установить освещенность как 50 мВт/^см2.
   ПРИМЕЧАНИЕ: На освещенность также влияет расстояние между светодиодной лампой и фотометром. В используемой здесь установке (рис. 3A, B) расстояние зафиксировано на уровне 5 см.
3. Разбавьте раствор IR783/BC NP деионизированной водой до 50 мкМ в зависимости от концентрации BC. Добавьте 200 мкл раствора IR783/BC NP в микропробирку объемом 1,5 мл. Поместите трубку на пеноблок с пазом, соответствующим размеру микротрубки и той же высоте, что и фотометр на шаге 4.1 (рис. 3C, D).
4. Откройте крышку тюбика. Включите светодиодную лампу и облучайте раствор наночастиц в течение 1, 2, 3, 5, 7 и 10 минут.
5. Количественно определите потребление БК и высвобождение ХБ ВЭЖХ после облучения светом. Рассчитайте процент оставшегося выброса BC и Cb, используя следующие уравнения:
   

5. Тестирование цитотоксичности НП IR783/BC со световым облучением и без него

1. Культивирование клеток HCT116 (клеточная линия колоректальной опухоли человека) в среде RPMI 1640, содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки и 1% пенициллина-стрептомицина (полная среда) в атмосфере 5% CO 2 при 37 ° C (~₂ x 10⁶ клеток на чашку в чашке для культивирования клеток 90 мм). Регулярно субкультивируйте клетки каждые 2-3 дня.
   ПРИМЕЧАНИЕ: HCT116 представляет собой клеточную линию толстой кишки человека. По сравнению с другими раковыми клетками, такими как клетки HeLa, MCF7 и A549, клетки HCT-116 экспрессируют более высокий уровень кавеолина-1²⁵, который может быть нацелен на IR783 и усиливает клеточное поглощение IR783 / BC NP.
2. Поместите ячейки HCT116 в 96-луночные планшеты с полной средой RPMI 1640 с плотностью 10,4 ячейки на лунку.
   1. Аспирируйте среду из чашки для культивирования, когда слияние клеток превышает 50%. Промойте ячейки 1x PBS и удалите PBS. Добавьте 1 мл 0,25% раствора трипсина и инкубируйте при 37 ° C в 5% инкубаторе CO₂ .
   2. Через 3 минуты добавьте 2 мл полной среды, чтобы утолить переваривание трипсина. Ресуспендируют клетки, переносят клеточную суспензию в центрифугирующую пробирку объемом 15 мл и центрифугируют при 300 x g в течение 3 мин. Выбросьте надосадочную жидкость и ресуспендируйте клеточную гранулу в 1 мл полной среды.
   3. Разбавьте 10 мкл клеточной суспензии до 200 мкл с полной средой. Поместите 10 мкл на гемоцитометр и закройте его покровным стеклом.
   4. Наблюдайте за гемоцитометром под микроскопом (окуляр: 10x; объектив: 4x). Подсчитайте и запишите номера ячеек в четырех угловых квадратах и в центре. Рассчитайте концентрацию клеток по формуле:
      
      Где n = среднее значение чисел ячеек пяти квадратов.
   5. Разбавьте клеточную суспензию до 1 х^{10 5 клеток} /мл. Добавьте 100 мкл клеточной суспензии на лунку в 96-луночную пластину, чтобы засеять клетки. Добавьте 100 мкл PBS на лунку в незасеянные лунки.
3. Обработайте клетки (1) 0,1-150 мкМ свободной БК, (2) 0,1-150 мкМ IR783/BC NP (в зависимости от концентрации BC), (3) 0,1-150 мкМ свободной BC световым облучением или (4) 0,1-150 мкМ IR783/BC NP (в зависимости от концентрации BC) световым облучением. Инкубируют клетки при 37 °C в инкубаторе 5% CO₂ в течение 6 часов.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Свободные растворы BC и IR783 / BC NP разбавляются из соответствующих исходных растворов с помощью полной среды.
4. После 6 ч инкубации замените среду, содержащую пролекарство/наночастицы, свежей полной средой. Инкубируют группы необлучения 1 и 2 в темноте в течение 24 ч. Для групп 3 и 4 облучают клетки светодиодной лампой с длиной волны 530 нм (50 мВт/^см2) в течение 5 мин и инкубируют в течение 24 ч.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Пластины ячеек помещают на пенопластовый блок, чтобы обеспечить ту же высоту, что и фотометр на шаге 4.1.
5. Определите жизнеспособность клеток с помощью анализа 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия бромида (МТТ).
   1. После обработки BC или наночастицами добавьте 10 мкл МТТ (10 мг/мл в PBS) в каждую лунку и инкубируйте планшеты при 37 ° C в течение 3 часов. Затем удалите среду и добавьте по 100 мкл ДМСО в каждую лунку. Считывание поглощения с помощью считывателя микропланшетов на длителе 490 нм, 570 нм и 630 нм.
   2. Рассчитайте жизнеспособность клетки, используя следующее уравнение:
      
      ПРИМЕЧАНИЕ: Для анализа проводятся четыре независимых эксперимента (n = 4) каждой группы. OD₄₉₀ может быть заменен на OD_{570-OD 630} при расчете жизнеспособности клеток.

Результаты

IR783 / BC NP были успешно изготовлены в этом исследовании с использованием метода мгновенного осаждения. Синтезированные NP IR783 / BC были представлены в виде фиолетового раствора, в то время как водный раствор IR783 был синим (рис. 4A). Как показано на рисунке 4B, NP IR783...

Обсуждение

В этом протоколе описывается метод легкого мгновенного осаждения для изготовления наночастиц пролекарства и красителя, который предлагает простой и удобный подход к образованию наночастиц. В этом методе есть несколько важных шагов. Во-первых, для всех этапов синтеза, изготовления и о?...

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
1260 Infinity II HPLC	Agilent Technologies
2,4-Dimethyl pyrrole	J&K Scientific	315305
3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide(MTT)	Gibco	M6494
4-Dimethylaminopyridine (4-DMAP)	J&K Scientific	212279
90 mm Petri Dish Clear Treated Sterile	SPL	11090
96-well Tissue Culture Plate Clear Treated Sterile	SPL	30096
Acetoxyacetyl chloride	J&K Scientific	192001
Boron trifluoride diethyl etherate	J&K Scientific	921076
Büchner funnel	AS ONE	3-6466-01
Chlorambucil	J&K Scientific	321407-1G
CM100 Transmission Electron Microscope	Philips
CombiFlash RF chromatography system	Teledyne ISCO
Dichloromethane	DUKSAN Pure Chemicals	JT9315-88
Dimethyl sulfoxide	DUKSAN Pure Chemicals	2762
Disposable cuvette	Malvern Panalytical	DTS1070	Zeta potential measurement
Disposable cuvette	Malvern Panalytical	ZEN0040
Empty Disposable Sample Load Cartridges	Teledyne ISCO	693873225	can hold up to 65 g
Fetal bovine serum	Gibco	10270106
Filtering flask	AS ONE	3-7089-03
Hexane	DUKSAN Pure Chemicals	4198
Holey carbon film on copper grid	Beijing Zhongjingkeyi Technology Co.,Ltd	BZ10023a
HPLC column (InfinityLab Poroshell 120)	Agilent Technologies	695975-902T
Integrating sphere photodiode power sensor	Thorlabs	S142C
IR783	Tokyo Chemical Industry (TCI) Co., Ltd	I1031
LED	Mightex	LCS-0530-15-11
LED Driver Control Panel V3.2.0 (Software)	Mightex
Lithium Hydroxide Anhydrous	TCI	L0225
Methylmagnesium iodide, 3M solution in diethyl ether	Aladdin	M140783
N,N-Diisopropyl ethyl amine (DIPEA)	J&K Scientific	203402
N,N'-Dicyclohexylcarbodiimide (DCC)	J&K Scientific	275928
penicillin–streptomycin	Gibco	15140122
Phosphate-buffered saline (10×)	Sigma-Aldrich	P5493
Power and energy meter	Thorlabs	PM100 USB
Rotavapor	BUCHI Rotavapor R300
RMPI 1640	Gibco	21870076
Separatory funnel (125 mL)	Synthware	F474125L
Silver Silica Gel Disposable Flash Columns, 40 g	Teledyne ISCO	692203340
Sodium sulfate, anhydrous	Alfa Aesar	A19890
SpectraMax M4	Molecular Devices LLC
Tetrahydrofuran (THF), anhydrous	J&K Scientific	943616
Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red	Gibco	25200056
Vortex	DLAB Scientific Co., Ltd	MX-S
Zetasizer Nano ZS90	Malvern Instrument