Моделирование рассеянного склероза у лиц обоих полов: экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит, индуцированный MOG35-55

Резюме

Экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит является одной из наиболее широко используемых мышиных моделей рассеянного склероза. В текущем протоколе мышей C57BL/6J обоих полов иммунизируют пептидом гликопротеина олигодендроцита миелина, что приводит в основном к восходящему парезу хвоста и конечностей. Здесь мы обсудим протокол индукции и оценки ЭАЭ.

Аннотация

Рассеянный склероз (РС) – это хроническое аутоиммунное воспалительное заболевание, поражающее центральную нервную систему (ЦНС). Он характеризуется разной распространенностью среди полов, поражая больше женщин, чем мужчин, и различными исходами, проявляя более агрессивные формы у мужчин, чем у женщин. Кроме того, рассеянный склероз весьма неоднороден по клиническим аспектам, рентгенологическим и патологическим признакам. Таким образом, необходимо воспользоваться экспериментальными животными моделями, позволяющими исследовать как можно больше аспектов патологии. Экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (ЭАЭ) представляет собой одну из наиболее часто используемых моделей рассеянного склероза у мышей, моделирующую различные особенности заболевания, от активации иммунной системы до повреждения ЦНС. В данной работе описан протокол индукции ЭАЭ как у самцов, так и у самок мышей линии C57BL/6J с использованием иммунизации гликопротеинового пептида 35-55 миелина олигодендроцитов (MOG_35-55), что приводит к развитию хронической формы заболевания. Мы также сообщаем об оценке ежедневной клинической оценки и двигательной активности этих мышей в течение 28 дней после иммунизации (28 точек на дюйм). Наконец, мы проиллюстрируем некоторые основные гистологические анализы на уровне ЦНС, уделяя особое внимание спинному мозгу как первичному месту повреждения, вызванного заболеванием.

Введение

Рассеянный склероз (РС) – это хроническое аутоиммунное воспалительное заболевание, поражающее центральную нервную систему (ЦНС). Он показывает наличие периваскулярной инфильтрации воспалительных клеток, демиелинизации, потери аксонов и глиоза¹. Его этиология остается неизвестной, а его клинические аспекты, рентгенологические и патологоанатомические особенности указывают на замечательную гетерогенность заболевания².

Из-за его неизвестной этиологии и сложности в настоящее время ни одна животная модель не повторяет все клинические и рентгенологические признаки, отображаемые в MS^....

протокол

Уход за животными и обращение с ними в данной работе осуществлялось в соответствии с Директивой Совета Европейского Союза от 22^{сентября} 2010 г. (2010/63/UE); все процедуры, о которых сообщалось в настоящем исследовании, были одобрены Министерством здравоохранения Италии (407/2018-PR) и Этическим комитетом Туринского университета (проект No 360384). Мы предлагаем привести план эксперимента в соответствие с руководящими принципами ARRIVE, первоначально опубликованными Kilkenny et al. в 2010 г.²⁰. Перед началом работы убедитесь в наличии необходимых материалов (см. Таблицу материалов). Стерилизовать всю стеклянную посуд....

Результаты

Наблюдение за ЭАЭ после иммунизации
Это было оценено так, как описано ниже.

Масса тела и потребление пищи
Двухфакторный дисперсионный анализ (ANOVA) (пол и время как независимые переменные) показывают снижение МТ ЭАЭ животных обоих полов, особенно в теч.......

Обсуждение

Описанный нами протокол ЭАЭ, индуцированный MOG_35-55, привел к развитию хронической формы рассеянного склероза у мышей C57BL/6J ^7,8,13. В этих репрезентативных результатах мы сообщили, что у животных обоего пола, прошедших процедуру иммуни.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
18 G x 1 ½“ 1.2 x 40 mm needle for the glass syringe	Terumo	TER-HYP-18G-112-PIN
Digital camera connected to the optical microscope	NIKON DS-U1 digital camera
Electronic precision balance	Merck	Mod. Kern-440-47N, resolution 0.1 g
Eosin Y	Sigma-Aldrich	HT110216
Glass syringe pipet “ultra asept” 10 ml	Sacco System	L003465
Glassware (i.e., becker to prepare the emulsion)	VWR	213-1170, 213-1172
Hematoxylin (Mayer’s)	Sigma-Aldrich	MHS32	Filter before using it.
Image analysis Software	Fiji
Incomplete Freund’s adjuvant (IFA)	Sigma-Aldrich	F5506	Store at +4 °C.
Isoflurane	Wellona Pharma		This drug is used as inhalational anaesthetic.
Male and female C57BL/6J mice	Jackson Laboratory, Envigo		Age 8-10 weeks, optimal body weight of ~20 g.
Microtome	Leica HistoCore BIOCUT R
Mounting Medium	Merck	107961
Mouse Rotarod	Ugo Basile	#47600
Mycobacterium tuberculosis (MT), strain H37Ra	Difco Laboratories Inc.	231141	Store at +4 °C.
Myelin oligodendrocyte glycoprotein peptide 35-55 (MOG35-55)	Espikem	EPK1	Store at -80 °C diluted (2 mg/mL) in physiological solution; prepare it on the day of the immunization to avoid, as much as possible, alterations or contaminations.
Optical microscope	NIKON eclipse 90i
Paraformaldehyde (PFA)	Sigma-Aldrich	158127	Store at +4 °C once diluted (4%) in phosphate buffer.
Pertussis toxin (PT)	Duotech	PT.181	Store at -80°C diluted (concentration 5 µg/mL) in physiological solution
Physiological solution (sodium chloride 0.9% solution)	B. Eurospital	A 032182038	Store at +4 °C once opened.
Saline phosphate buffer (PBS)	Thermo Scientific	J61196.AP
Software for image acquisition	NIS-Element AR 2.10
Syringes U-100 0.5 mL with 30 G x 5/16” (0.30 x 8 mm) in fixed needle	Nipro	SYMS-0.5U100-3008B-EC
Syringes U-100 1 mL with 26G x ½” (0.45 x 12.7 mm) in needle	PIC	20,71,26,03,00,354
Vet ointment for eyes	Lacrilube, Lacrigel Europhta
Xylazine	Rompun		This mixture of drug is used as injectable anaesthetic and sedative.
Zolazepam and Tiletamine	Zoletil  100		This drug is used as injectable anaesthetic, sedative, muscle relaxer, and analgesic