Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Этот протокол описывает процедуру выделения сетчатки мыши целиком и выполнения иммуноокрашивания для мечения всех ганглиозных клеток сетчатки (РГК). За этим процессом следует визуализация и автоматический подсчет RGC с помощью программного обеспечения на основе искусственного интеллекта, что обеспечивает простой, быстрый и точный метод количественного определения RGC во всей сетчатке мыши.

Аннотация

Глаукома является ведущей причиной слепоты во всем мире, характеризуясь сложным патогенным механизмом, который затрудняет восстановление зрения. Мыши служат ценными животными моделями для изучения патогенеза и лечения глаукомы благодаря их относительно однородному генетическому фону и ганглиозным клеткам сетчатки (РГК), которые структурно напоминают таковые у человека. Точная оценка повреждения РГК и результатов лечения в моделях глаукомы у мышей требует определения числа РГК по всей сетчатке. Этот протокол описывает комплексный метод, включающий изоляцию всей сетчатки, мечение РГК специфическими антителами и быстрый и точный автоматический подсчет РГК с помощью программы на основе искусственного интеллекта. Оптимизированный подход позволяет эффективно и точно количественно определять количество РГК в сетчатке мышей, облегчая оценку дегенерации РГК и потенциальных терапевтических вмешательств. Позволяя исследователям оценить степень повреждения РГК, этот протокол способствует более глубокому пониманию патогенеза глаукомы и помогает в разработке эффективных стратегий лечения для управления и предотвращения потери зрения.

Введение

Глаукома характеризуется прогрессирующей гибелью ганглиозных клеток, что представляет собой значительную проблему для восстановления зрения 1,2. Это заболевание находится в центре внимания офтальмологических исследований из-за его распространенности и влияния на зрение3. Модели мышей незаменимы при глаукоме
исследования в связи с их однородным генетическим фоном, высокой репродуктивной способностью и сходством свойств ганглиозных клеток с человеческими4. Основной целью этого метода является точное количественное определение га....

протокол

Процедура соответствовала рекомендациям Ассоциации исследований в области зрения и офтальмологии по использованию животных в исследованиях и была одобрена Комитетом по институциональному уходу за животными и их использованию (IACUC) Народной больницы провинции Сычуань. В данном исследовании использовались мыши-самцы C57Bl/6J (в возрасте 2 месяцев). На рисунке 1 показана общая процедура, описанная здесь. Подробная информация об используемых реагентах и оборудовании приведена в Таблице материалов.

1. Изоляция сетчатки целиком

  1. Жертвоприн....

Результаты

В этом протоколе подробно описана методология полного иммуноокрашивания сетчатки мышей, обеспечивающая тщательную подготовку тканей, точную инкубацию антител и надежный автоматический подсчет клеток. Эта процедура способствует надежной маркировке и количественн?.......

Обсуждение

Этот протокол обеспечивает метод определения всех ганглиозных клеток сетчатки (РГК) в сетчатке мыши, который может быть использован для мониторинга прогрессирования дегенерации РГК на мышиных моделях для изучения глаукомы. Сетчатка мыши является нежнойне?.......

Раскрытие информации

У авторов нет никаких противоречий для раскрытия.

Благодарности

Этот исследовательский проект был поддержан Национальным фондом естественных наук Китая (82371059 (H.Z.)), Департаментом науки и технологий провинции Сычуань, Китай (2023JDZH0002 (H.Z.)), Научно-техническим бюро Чэнду (2022-YF05-01984-SN (H.Z.)) и Народной больницей провинции Сычуань (30320230095 (J.Y.), 30420220062 (J.Y.)).

....

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
1× PBSServicebioG4202
Alexa594-conjugated Goat Anti-Rabbit IgG  (H+L)ThermoFisherA-11012
Anti-BRN3A antibody [EPR23257-285]Abcamab245230
AutoCount softwarehttps://github.com/MOEMIL/Intelligent-quantifying-RGCs
Cloud diskGoogle drive linkhttps://drive.google.com/file/d/1yOEsBvil6KEdZFa5ENQxB6 
Cloud diskBaidu linkExtraction code: g44khttps://pan.baidu.com/s/1lccg1OVbeudsp2VtnqxWZg 
MarkerSharpie
Normal Donkey SerumBiosharp, Labgic25030081
ParaformaldehydeMacklinP804536
ProClean 300BeyotimeST853
SucroseBBI, SangonA610498
Triton X-100BioFroxx, neoFroxx1139ML100

Ссылки

  1. Quigley, H. A., Broman, A. T. The number of people with glaucoma worldwide in 2010 and 2020. Br J Ophthalmol. 90 (3), 262-267 (2006).
  2. Gallo Afflitto, G., Swaminathan, S. S.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Исследования

Образование

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены