Мы благодарим Дэвида Theilmann (Тихий Agri-Food Research Centre, Summerland, Британская Колумбия) за предоставление бакуловирус AcMNPV и полезные обсуждения. Эта работа была поддержана грантами от Канады Фонд инноваций (CFI), канадского института исследований в области здравоохранения (CIHR), Майкл Смит фонда исследований в области здравоохранения (MSFHR), и естественным наукам и инженерным исследованиям Совета Канады (NSERC) .

Часть 1: Подготовка ооцитов Xenopus для микроинъекции <ol><li> Место небольшой кусочек (около 2 см) яичников Xenopus laevis в 50-мл коническую трубку, содержащую 20 мл коллагеназы решения (5 мг / мл коллагеназы в кальции без солевых изменение Барта: 88 мМ NaCl, 1 мМ KCl, 0,82 мМ MgSO 4, 10 мМ HEPES, рН 7,5). Коллагеназа используется для удаления фолликула клетками, которые окружают ооцитов. </li><li> Поместите пробирку на платформе шейкера и рок-это мягко (при 100 оборотов в минуту) в течение одного часа. На этот раз меняется в зависимости от разных партий коллагеназы. Таким образом, после одного часа, взять небольшой образец ооцитов и рассмотреть их под микроскопом вскрытии. Правильно де-folliculated ооцитов должна быть хорошо отделены друг от друга, и она должна быть легкой, чтобы вставить стекло иглы в ооцит. Если ооцитов не являются достаточно де-folliculated, они остаются в коллагеназы решение и вновь проверяется каждые пять минут. </li><li> Вымойте ооцитов три раза физиологическим раствором изменение Барта (MBS: 88 мМ NaCl, 1 мМ KCl, 0,82 мМ MgSO 4, 0,33 мМ Ca (NO 3) 2, 0,41 мМ CaCl 2, 10 мМ HEPES, рН 7,5), и передавать их к 100-мм диаметра чашки Петри содержащие MBS плюс 1% пенициллина / стрептомицина. Ооциты готов к microinjected. Если микроинъекции будут выполняться на другой день, хранить ооцитов при 4 ° С не более одной недели. </li><li> Использование рассекает микроскоп, выберите зрелой стадии VI ооцитов для микроинъекции. Эти ооциты большие, с хорошим контрастом между черным полушарии животного и сливочного цвета растительного полушарии. </li><li> Передача зрелых ооцитов VI этап в тарелку микролуночные (Nunc, 10 мкл и объема). Это должно быть сделано тщательно, используя 200-мкл пипетки с пипетки, разрезанные на конце, чтобы бесперебойное всасывания ооцитов. </li></ol> Часть 2: Микроинъекция ооцитов Xenopus <ol><li> Подготовка импорт субстрат microinjected путем добавления небольшого количества 1% бромфенол синий, для оказания помощи в визуализации микроинъекции. Например, мы добавляем 1 мкл бромфенол синего до 10 мкл субстрата. </li><li> Место небольшую полоску парафильмом на 100-мм блюдо диаметром Петри, и обойтись без 5-мкл каплю раствора для инъекций по парафильмом полосы. </li><li> Заполнить ранее калиброванный инъекционной иглой (полученные путем вытягивания 6,6 мкл микропипетки Драммонд с Inject + Matic Puller) с решением для инъекций. Для этого microinjector установлен на стремлении режима. Для калибровки инъекционной иглой делают точка знаки на иглу каждые 0,5 мм, что соответствует объемом 50 NL. </li><li> Для цитоплазматической инъекции, вставить кончик иглы в ооцит в вегетативного полушария, очень близко к животным полушарии, на примерно 45-градусный угол. Включите настройку microinjector к microinject и microinject каждого ооцита с 50 п импорта подложки. Точка знаки на иглы используются для мониторинга количества субстрата, который был вводили. </li><li> Передача вводят ооцитов в небольшой (35-мм в диаметре) чашки Петри заполнены MBS, и инкубируют при комнатной температуре в течение необходимого количества времени (временные точки выбираются так, чтобы наблюдение импорта подложки связанные с НПС; это происходит от 10 до 30 минут для белков и вирусов, которые активно транспортируются к NPC, на этот раз также зависит от места инъекции и размер белка / вируса). </li><li> При инкубации завершения передачи ооцитов в 4-мл стеклянный флакон, содержащий 2% глутаральдегида в MBS, и исправить течение ночи при 4 ° C. </li></ol> Часть 3: Препарирование ооцитов Xenopus <ol><li> На следующий день, мыть ооциты 3 раза с MBS. </li><li> Передача ооцитов в небольшой чашке Петри заполнены с низким буфера соли (LSB: 1 мМ KCl, 0,5 мМ MgCl 2, 10 мМ HEPES, рН 7,5). Использование рассекает микроскопа и рассекает пинцет, удалите вегетативного полюса друг от яйцеклетки. Это полезно для стабилизации ооцитов будучи расчлененным с одним пинцетом, а другая пара используется как ножницы для удаления растительного полюса. На этом этапе можно оценить успех микроинъекции наличием синий оттенок в цитозоле. Протокол продолжаться только в течение ооцитов, которые были microinjected успешно. Кроме того, если образцы должны быть готовы к Е. М., это рассечение шаг делает его гораздо проще найти ядра при обрезке и срезов образцов. </li><li> Fix расчлененный ооцитов снова с 2% глутаральдегида в LSB в течение одного часа при комнатной температуре. </li><li> После фиксации, мыть расчлененный ооцитов три раза с LSB. </li></ol> Часть 4: Подготовка Injected ооцитов для вложения и тонких Секционирование EM <ol><li> Передача расчлененный ооцитов к депрессии слайда. Аспирируйте столько жидкости, как позваны, а затем быстро (чтобы они не высыхают) охватывают расчлененный ооциты с 2% легкоплавких агарозы. Хотя агарозном еще мягкие, используйте пипетки на отдельные ооциты друг от друга, и обеспечить, чтобы каждый ооцит лицевой стороной вверх или вниз (а не вбок). </li><li> Разрешить агарозном закрепить в течение приблизительно 10 минут. После агарозном затвердевает, используйте лезвие, чтобы разрезать агарозы на мелкие кусочки, каждый из которых содержит один расчлененный яйцеклетки. </li><li> Место агарозном встраиваемый ооцитов в 4-мл стеклянный флакон, и после их исправить с 1% OsO 4 в LSB в течение одного часа при комнатной температуре. </li><li> Промыть образец три раза в LSB. При необходимости, хранить образцы при температуре 4 ° С в течение ночи и продолжают протокола на следующий день. </li><li> Последовательно обезвоживают образцов в восходящей серии алкоголя (50, 70 и 90% этанола в течение 20 минут каждый). Далее следуют два изменения в 100%-ным этанолом в течение 15 минут каждый. Наконец обезвоживают образцы со 100%-ным ацетоном в течение 15 мин. </li><li> Проникнуть образцов смеси 1:1 Epon (Fluka) и ацетона в течение одного часа, после чего инфильтрат с 2:01 смесь Epon и ацетона в течение двух часов, и, наконец, в чистом Epon в течение не менее шести часов. </li><li> Место образцы в плоских форм вложения заполнены свежей чистой Epon. Ооцитов ориентированы таким образом, что стороны ядра ближе к инъекции - в этом случае стороны ооцитов, которые были расчлененные - будет секционного в первую очередь. Этот шаг оптимизирует возможность визуализации импорта выбраны подложки. </li><li> Наконец, полимеризуются Epon в течение двух дней при 60 ° C. </li><li> Для того чтобы представить образцы, блоки отделаны, а затем секционного использованием ультрамикротоме. Разделы переносятся на сетках Е.М., окрашенных с использованием стандартных процедур и визуализированы с просвечивающего электронного микроскопа. Мы не будем показывать это часть протокола, как это стандартная процедура EM. </li></ol> Часть 5: Представитель Результаты: Если протокол был успешным, то ядерная оболочка (NE) и НПС должны быть четко видны в ЭМ микрофотографии. В зависимости от введенного субстрата и количества времени между введением и фиксации, субстрат должен быть виден во цитоплазматических лицо NPC, в NPC, или, по крайней ядерной лица NPC. На рисунке 1 показано Н. Е. сечения с прилегающей цитоплазмой (с) и ядра (п) из ооцитов Xenopus, которая была введена с капсиды из бакуловирус AcMNPV, инкубировали при 4 ° С в течение четырех часов, и обработанные для вложения и шлифе EM, как описано. Стрелки указывают на NPC. Капсида док на цитоплазматических лицо NPC указывает белая стрелка. В отличие от этого, на рисунке 2 показано Н. Е. сечения с прилегающей цитоплазмой (с) и ядра (п) из ооцитов Xenopus, которые были введены с Вирус парвовирус Минута Мыши (MVM), выдерживают при комнатной температуре в течение четырех часов, и обработаны для вложения и тонкий срез EM, как описано. Используя эту технику, мы обнаружили, что MVM вызывает нарушения NE (Коэн и Panté, 2005). Скобки указывают на перерывы в NE. Стрелки указывают на NPC. Предполагаемые капсиды MVM связанные с Н. Е. обозначены белыми стрелками. <img src="/files/ftp_upload/1106/1106_fig1.png" alt="Рисунок 1" width="600" height="459" /> Рисунок 1: Электронная микрофотография NE сечения с прилегающей цитоплазмой (с) и ядра (п) из ооцитов Xenopus, которая была введена с капсиды из бакуловирус Ас MNPV, инкубировали при 4 ° С в течение четырех часов, и обрабатываемых в вложения и тонкий срез EM, как описано. Стрелки указывают на NPC. Капсиды обозначены белыми стрелками. Шкала бар: 100 нм. <img src="/files/ftp_upload/1106/figure2.png" alt="Рисунок 2" width="600" height="264" /> Рисунок 2: Электронная микрофотография NE сечения с прилегающей цитоплазмой (с) и ядра (п) из ооцитов Xenopus, которые были введены с Вирус парвовирус Минута Мыши (MVM), выдерживают при комнатной температуре в течение четырех часов, и обработаны для вложения и тонкий срез EM, как описано. Стрелки указывают на NPC. Скобки указывают на перерывы в NE. Предполагаемые капсиды MVM связанные с Н. Е. обозначены белыми стрелками. Шкала бар: 100 нм.

<ol>
	<li>Pant&#233;, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+intact+Xenopus+oocytes+in+nucleocytoplasmic+transport+studies.">Use of intact Xenopus oocytes in nucleocytoplasmic transport studies.</a> Methods Mol. Biol. 322, 301-314 (2006).</li><li>Pant&#233;, N., Kann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+pore+complex+is+able+to+transport+macromolecules+with+diameters+of+about+39+nm.">Nuclear pore complex is able to transport macromolecules with diameters of about 39 nm.</a> Mol. Biol. Cell. 13 (2), 425-434 (2002).</li><li>Rabe, B., Vlachou, A., Pant&#233;, N., Helenius, N., Kann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+import+of+hepatitis+B+virus+capsids+and+release+of+the+viral+genome.">Nuclear import of hepatitis B virus capsids and release of the viral genome.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100 (17), 9849-9854 (2003).</li><li>Cohen, S., Pant&#233;, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pushing+the+Envelope:+Microinjection+of+MVM+into+Xenopus+oocytes+causes+damage+to+the+nuclear+envelope.">Pushing the Envelope: Microinjection of MVM into Xenopus oocytes causes damage to the nuclear envelope.</a> J. Gen. Virol. 86 (12), 3243-3252 (2005).</li><li>Pant&#233;, N., Jarmolowski, A., Izaurralde, E., Sauder, U., Baschong, W., Mattaj, I. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+nuclear+export+of+different+classes+of+RNA+by+electron+microscopy.">Visualizing nuclear export of different classes of RNA by electron microscopy.</a> RNA. 3, 498-513 (1997).</li></ol>

Микроинъекция ооцитов Xenopus в сочетании с тонкими секционирования EM является весьма эффективным инструментом для изучения nucleocytoplasmic транспорта. Эта система была использована для перевода различных шагов импорта через NPC, например, взаимодействие ядерных подложки импорта со струк...

microinjection of xenopus laevis oocytes

Микроинъекции Xenopus laevis ооциты затем тонких срезов электронной микроскопии (ЭМ) является отличной системой для изучения nucleocytoplasmic транспорта. Из-за своего большого ядра и высокой плотности ядерного комплексов пор (НПС), перевозка ядерного материала может быть легко визуализированы в ооцитов Xenopus. Многое понимание механизмов ядерного импорта и экспорта был накоплен за счет использования этой системы (см. обзор Panté, 2006). Кроме того, мы использовали микроинъекции ооцитов Xenopus препарировать ядерной пути импорта из нескольких вирусов, которые воспроизводят в принимающей ядра. Здесь мы показываем, микроинъекции цитоплазмы ооцитов Xenopus с ядерным субстратом импорта. Мы также показываем, подготовка ооцитов вводили для визуализации на тонких срезов EM, в том числе рассечение, обезвоживание, и вложение ооцитов в смоле вложение эпоксидной смолы. Наконец, мы предоставляем представителя результаты для ооцитов, которые были microinjected с капсида из бакуловирус Autographa californica nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) или вирусов парвовирус Минута Мыши (MVM), а также обсудить возможности применения техники.

Watch this Scientific Journal Video about Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes at JoVE.com

Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes

Здесь мы показываем, цитоплазматические микроинъекции<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Ооцитов с ядерным субстратом импорта, а также подготовка ооцитов вводили для визуализации на тонких срезов электронной микроскопии.

Микроинъекции Xenopus ооцитов Laevis

Microinjection of Xenopus laevis oocytes followed by thin-sectioning electron microscopy (EM) is an excellent system for studying nucleocytoplasmic ...

Research

JoVE Journal

Biology

22.8K Views.  University of British Columbia - UBC. Здесь мы показываем, цитоплазматические микроинъекции Xenopus laevis Ооцитов с ядерным субстратом импорта, а также подготовка ооцитов вводили для визуализации на тонких срезов электронной микроскопии.

Video: Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes

Plastic Embedding and Sectioning of Xenopus laevis Embryos

Plastic sections maintain true tissue morphology in thin sections of tissue that can be immunostained with fluorescent secondary antibodies, making this method more useful than paraffin-embedded or frozen sections for many types of tissue. The method for staining, plastic embedding, and sectioning is demonstrated in this video.

Пластиковые вложения и секционирования Xenopus laevis Эмбрионы

Obtaining Eggs from Xenopus laevis Females

The eggs of Xenopus laevis intact, lysed, and/or fractionated are useful for a wide variety of experiments. This protocol shows how to induce egg laying, collect and dejelly the eggs, and sort the eggs to remove any damaged eggs.

The eggs of Xenopus laevis intact, lysed, and/or fractionated are useful for a wide variety of experiments. This protocol shows how to induce egg laying, collect and dejelly the eggs, and sort the eggs to remove any damaged eggs.

Получение Яйца Xenopus laevis Женщины

The eggs of Xenopus laevis intact, lysed, and/or fractionated are useful for a wide variety of experiments. This protocol shows how to induce egg laying, ...

Preparation and Fractionation of Xenopus laevis Egg Extracts

Crude and fractionated Xenopus egg extracts can be used to provide ingredients for reconstituting cellular processes for morphological and biochemical analysis. Egg lysis and differential centrifugation are used to prepare the crude extract which in turn in used to prepare fractionated extracts and light membrane preparations.

Crude and fractionated Xenopus egg extracts can be used to provide ingredients for reconstituting cellular processes for morphological and biochemical analysis. Egg lysis and differential centrifugation are used to prepare the crude extract which in turn in used to prepare fractionated extracts and light membrane preparations.

Подготовка и Фракционирование Xenopus laevis Яйцо Экстракты

Crude and fractionated Xenopus egg extracts can be used to provide ingredients for reconstituting cellular processes for morphological and biochemical ...

Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in  Xenopus Oocytes

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological measurement of single or multiple ion channels in cells. This technique can be applied to ion channels in both their native environment and expressed in heterologous cells, such as oocytes harvested from the African clawed frog, Xenopus laevis. Here, we describe the well-established technique of patch clamp recording from Xenopus oocytes. This technique is used to measure the properties of expressed ion channels either in populations (macropatch) or individually (single-channel recording). We focus on techniques to maximize the quality of oocyte preparation and seal generation. With all factors optimized, this technique gives a probability of successful seal generation over 90 percent. The process may be optimized differently by every researcher based on the factors he or she finds most important, and we present the approach that have lead to the greatest success in our hands.

This is intended as an introduction to patch clamp recording from Xenopus laevis oocytes. It covers vitelline membrane removal, formation of a gigaohm seal (gigaseal), and the optional conversion of the patch to the outside-out topology.

Патч зажим Запись ионных каналов, выраженные в ооцитов Xenopus

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological ...

Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

RNA localization is a conserved mechanism of establishing cell polarity. Vg1 mRNA localizes to the vegetal pole of Xenopus laevis oocytes and acts to spatially restrict gene expression of Vg1 protein. Tight control of Vg1 distribution in this manner is required for proper germ layer specification in the developing embryo. RNA sequence elements in the 3' UTR of the mRNA, the Vg1 localization element (VLE) are required and sufficient to direct transport. To study the recognition and transport of Vg1 mRNA in vivo, we have developed an imaging technique that allows extensive analysis of trans-factor directed transport mechanisms via a simple visual readout. 
To visualize RNA localization, we synthesize fluorescently labeled VLE RNA and microinject this transcript into individual oocytes. After oocyte culture to allow transport of the injected RNA, oocytes are fixed and dehydrated prior to imaging by confocal microscopy. Visualization of mRNA localization patterns provides a readout for monitoring the complete pathway of RNA transport and for identifying roles in directing RNA transport for cis-acting elements within the transcript and trans-acting factors that bind to the VLE (Lewis et al., 2008, Messitt et al., 2008). We have extended this technique through co-localization with additional RNAs and proteins (Gagnon and Mowry, 2009, Messitt et al., 2008), and in combination with disruption of motor proteins and the cytoskeleton (Messitt et al., 2008) to probe mechanisms underlying mRNA localization.

Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

Visualization of in vivo RNA transport is accomplished by microinjection of fluorescently labeled RNA transcripts into Xenopus oocytes, followed by confocal microscopy.

Визуализация РНК Локализация в Xenopus Ооцитов

RNA localization is a conserved mechanism of establishing cell polarity.  Vg1 mRNA localizes to the vegetal pole of Xenopus laevis oocytes and acts to ...

Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method

Studying the contribution of maternally inherited molecules to vertebrate early development is often hampered by the time and expense necessary to generate maternal-effect mutant animals. Additionally, many of the techniques to overexpress or inhibit gene function in organisms such as Xenopus and zebrafish fail to sufficiently target critical maternal signaling pathways, such as Wnt signaling. In Xenopus, manipulating gene function in cultured oocytes and subsequently fertilizing them can ameliorate these problems to some extent. Oocytes are manually defolliculated from donor ovary tissue, injected or treated in culture as desired, and then stimulated with progesterone to induce maturation. Next, the oocytes are introduced into the body cavity of an ovulating host female frog, whereupon they will be translocated through the host's oviduct and acquire modifications and jelly coats necessary for fertilization. The resulting embryos can then be raised to the desired stage and analyzed for the effects of any experimental perturbations. This host-transfer method has been highly effective in uncovering basic mechanisms of early development and allows a wide range of experimental possibilities not available in any other vertebrate model organism.

Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method

Procedure for fertilizing Xenopus oocytes by the host transfer method.

Оплодотворение Xenopus ооцитов Использованием метода передачи хост

Studying the contribution of maternally inherited molecules to vertebrate early development is often hampered by the time and expense necessary to ...

Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant (ACT) Assay in Xenopus laevis

Many proteins play a dual role in embryonic development. Those that regulate cell fate determination in a specific tissue can also affect the development of a larger region of the embryo. This makes defining its role in a particular tissue difficult to analyze. For example, noggin overexpression in Xenopus laevis embryos causes the expansion of the entire anterior region, including the eye1,2. From this result, it is not known if Noggin plays a direct role in eye determination or that by causing an expansion of neural tissue, Noggin indirectly affects eye formation. Having this complex phenotype makes studying its eye-specific role in cell fate determination difficult to analyze. We have developed an assay that overcomes this problem. Taking advantage of the pluripotent nature of the Xenopus laevis animal cap 3, we have developed an assay to test the ability of gene product(s), like noggin or the eye field transcription factors (EFTFs), to transform caps into particular tissue or cell types by transplanting this tissue onto the side of the embryo 4. While we have found either Noggin protein treatment or a collection of transcription factors can determine retinal cell fate in animal caps, this procedure could be used to identify gene product(s) involved in specifying other tissues as well.

Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant ACT Assay in Xenopus laevis

Animal caps overexpressing gene product(s) are transplanted to the flank of developing Xenopus laevis embryos in order to establish whether tissue is determined.

Ткань Определение Использование трансплантации животных Cap (ACT) в Пробирной Xenopus laevis</em

Many proteins play a dual role in embryonic development. Those that regulate cell fate determination in a specific tissue can also affect the development ...

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Embryonic epithelial cells serve as an ideal model to study morphogenesis where multi-cellular tissues undergo changes in their geometry, such as changes in cell surface area and cell height, and where cells undergo mitosis and migrate. Furthermore, epithelial cells can also regulate morphogenetic movements in adjacent tissues1. A traditional method to study epithelial cells and tissues involve chemical fixation and histological methods to determine cell morphology or localization of particular proteins of interest. These approaches continue to be useful and provide "snapshots" of cell shapes and tissue architecture, however, much remains to be understood about how cells acquire specific shapes, how various proteins move or localize to specific positions, and what paths cells follow toward their final differentiated fate. High resolution live imaging complements traditional methods and also allows more direct investigation into the dynamic cellular processes involved in the formation, maintenance, and morphogenesis of multicellular epithelial sheets. Here we demonstrate experimental methods from the isolation of animal cap tissues from Xenopus laevis embryos to confocal imaging of epithelial cells and simple measurement approaches that together can augment molecular and cellular studies of epithelial morphogenesis.

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Xenopus embryonic epithelia are an ideal model system to study cell behaviors such as polarity development and shape change during epithelial morphogenesis. Traditional histology of fixed samples is increasingly being complemented by live-cell confocal imaging. Here we demonstrate methods to isolate frog tissues and visualize live epithelial cells and their cytoskeleton using live-cell confocal microscopy.

Live-камера и цифровой обработки изображений Количественный анализ эмбриональных эпителиальных клеток в Xenopus laevis</em

Embryonic epithelial cells serve as an ideal model to study morphogenesis where multi-cellular tissues undergo changes in their geometry, such as changes ...

Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

Craniofacial birth defects occur in 1 out of every 700 live births, but etiology is rarely known due to limited understanding of craniofacial development. To identify where signaling pathways and tissues act during patterning of the developing face, a 'face transplant' technique has been developed in embryos of the frog Xenopus laevis. A region of presumptive facial tissue (the "Extreme Anterior Domain" (EAD)) is removed from a donor embryo at tailbud stage, and transplanted to a host embryo of the same stage, from which the equivalent region has been removed. This can be used to generate a chimeric face where the host or donor tissue has a loss or gain of function in a gene, and/or includes a lineage label. After healing, the outcome of development is monitored, and indicates roles of the signaling pathway within the donor or surrounding host tissues. Xenopus is a valuable model for face development, as the facial region is large and readily accessible for micromanipulation. Many embryos can be assayed, over a short time period since development occurs rapidly. Findings in the frog are relevant to human development, since craniofacial processes appear conserved between Xenopus and mammals.

Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

A technique for transplanting "Extreme Anterior Domain" facial tissue between Xenopus laevis embryos has been developed. Tissue can be moved from one gene expression background into another, allowing the study of local requirements for craniofacial development and for signaling interactions between facial regions.

Трансплантация лица в<em&gt; Xenopus Laevis</em&gt; Эмбрионы

Craniofacial birth defects occur in 1 out of every 700 live births, but etiology is rarely known due to limited understanding of craniofacial development. ...

Using plusTipTracker Software to Measure Microtubule Dynamics in Xenopus laevis Growth Cones

Microtubule (MT) plus-end-tracking proteins (+TIPs) localize to the growing plus-ends of MTs and regulate MT dynamics1,2. One of the most well-known and widely-utilized +TIPs for analyzing MT dynamics is the End-Binding protein, EB1, which binds all growing MT plus-ends, and thus, is a marker for MT polymerization1. Many studies of EB1 behavior within growth cones have used time-consuming and biased computer-assisted, hand-tracking methods to analyze individual MTs1-3. Our approach is to quantify global parameters of MT dynamics using the software package, plusTipTracker4, following the acquisition of high-resolution, live images of tagged EB1 in cultured embryonic growth cones5. This software is a MATLAB-based, open-source, user-friendly package that combines automated detection, tracking, visualization, and analysis for movies of fluorescently-labeled +TIPs. Here, we present the protocol for using plusTipTracker for the analysis of fluorescently-labeled +TIP comets in cultured Xenopus laevis growth cones. However, this software can also be used to characterize MT dynamics in various cell types6-8.

Using plusTipTracker Software to Measure Microtubule Dynamics in Xenopus laevis Growth Cones

The MATLAB-based, open source software package, plusTipTracker, can be used to analyze image series of fluorescently-labeled +TIPs to quantify microtubule dynamics.

Использование plusTipTracker Программное обеспечение для измерения микротрубочек Динамика в<em&gt; Xenopus Хепориз</em&gt; Шишки роста

Microtubule (MT) plus-end-tracking proteins (+TIPs) localize to the growing plus-ends of MTs and regulate MT dynamics1,2. One of the most well-known and ...