Ежегодные модели становятся важным инструментом для понимания патологических механизмов, лежащих в основе стеноза аортального клапана, из-за отсутствия доступа к надежным источникам пораженных аортальных клапанов человека. Традиционные модели стеноза аортального клапана у кроликов требуют длительного приема пищевых добавок и генетических манипуляций для индуцирования значительного стеноза аортального клапана, что ограничивает их использование в экспериментальных исследованиях. Эта методика описывает новую процедуру индуцирования стеноза аортального клапана у кроликов путем прямого баллонного повреждения аортального клапана, которая может точно имитировать состояние человека с аортальным стенозом.
Процедуру продемонстрируют Пак Ын Хе, Ким Джин-Му и Ынми Ли, специалисты по исследованиям из моего регулирующего органа. Начните подготовку дилатационного баллонного катетера, подключив устройство для сдувания, заполненное смесью физиологического раствора и коммерчески доступного контрастного вещества, к части баллонного катетера с замком Люэра. После наполнения баллона раствором для надувания удалите воздух из баллонного катетера.
Начните процедуру операции с введения внутривенного или внутривенного катетера 24 калибра в краевую ушную вену кролика, находящегося под наркозом. Соедините инфузионный набор со 100 единицами на килограмм гепарина гепаринизированным физиологическим раствором. Затем подключите кролика к многопараметрическому ветеринарному монитору, чтобы постоянно контролировать жизненно важные показатели, такие как сигнал насыщения кислородом или температура SpO2 и кровяное давление.
Поместив кролика в положение лежа на спине на операционном столе, оснащенном рентгеноскопией С-дуги, удалите волосы из области брюшной шеи с помощью машинок для стрижки шерсти животных. Простерилизуйте место разреза йодом и накройте кролика хирургическими полотенцами. Чтобы расположить сердце кролика, включите С-дугу и выберите режим рентгеноскопии для визуализации сердца.
Отрегулируйте положение кролика, чтобы убедиться, что сердце находится в центре поля визуализации. После того, как положение будет отрегулировано, сделайте продольный разрез примерно в три сантиметра на коже шеи и хирургическими ножницами разрежьте фасцию и жировую ткань. Затем осторожно разнимайте мышцы до тех пор, пока не обнажится примерно 3-3,5 сантиметра левой общей сонной артерии, или LCCA.
Наложите на LCCA шелковый шов 3-0 в верхней и нижней части открытого LCCA, чтобы остановить кровоток. Вставьте внутривенный катетер 22 калибра в LCCA. Затем введите направляющий провод диаметром 0,016 дюйма в левый желудочек через внутривенный катетер, убедившись, что кончик катетера правильно расположен в поле визуализации С-дуги.
Затем извлеките внутривенный катетер, оставив направляющий провод, прежде чем поместить оболочку 4 Франции поверх направляющего провода в LCCA для введения баллонного катетера. Осторожно введите восьмимиллиметровый баллонный катетер через направляющий провод в аортальный клапан под рентгеноскопическим контролем С-дуги. Поместите наконечник баллонного катетера примерно на один-два сантиметра дистальнее аортального клапана и надуйте баллон, продувая раствор для надувания с помощью надувного насоса под давлением в шесть атмосфер.
Затем продвигают баллон в левый желудочек или верхушку ЛЖ и втягивают его обратно в выходное отверстие ЛЖ. Повторите эту процедуру пять раз, прежде чем сдуть баллон. Извлеките баллонный катетер и направляющую проволоку, затем медленно извлеките оболочку из LCCA и сразу же завяжите LCCA швом на пути к аортальному клапану.
Промойте область разреза физиологическим раствором, чтобы удалить сгустки крови. Осмотрите место прокола на предмет артериального кровотечения, прежде чем закрыть мышцу и кожу нерассасывающимся швом 3-0. После этого простерилизуйте рану йодом.
После операции снимите контрольные пластыри и клипсы и держите кролика в инкубаторе интенсивной терапии. Через восемь недель после травмы баллоном поместите кролика под наркозом на эхо-стол в положении лежа на спине. Нанесите гель для ультразвукового датчика на грудную клетку после бритья области груди.
Отрегулируйте датчик так, чтобы получить перистернальный вид по длинной оси и перистернальный вид по короткой оси аортального клапана. Используйте режим визуализации для записи изображений аортального клапана и сохранения изображений для последующего анализа. Оценка структурных изменений в аортальном клапане показала, что через восемь недель после травмы аортального клапана бугорки были утолщены, а движения ограничены у травмированных кроликов, которых кормили диетой с высоким содержанием холестерина и витамина D2, по сравнению с кроликами контрольного или дикого типа, и кролики, получавшие диету с высоким содержанием холестерина и витамина D2 без повреждения клапана.
Кролики были принесены в жертву, а сердца были вырезаны через восемь недель после травмы для гистологического анализа аортального клапана. Аортальный клапан, окрашенный трихромом Массона, показал увеличенную толщину створок аортального клапана в поврежденной группе по сравнению с контролем в группах с высоким уровнем холестерина и диетой, индуцированной витамином D2. Для сравнения степени отложений кальция в клапанах указывалось на незначительные отложения кальция в створках клапанов в группе с высоким уровнем холестерина и витамином D2.
Напротив, значительные кальцифицирующие отложения наблюдались в группе, пострадавшей от воздушного шара. Здесь демонстрируется успешная методика индуцирования стеноза арктического клапана на кроличьей модели с пошаговым объяснением прямого повреждения аортального клапана баллоном. Эта простая и воспроизводимая модель предлагает многообещающий подход к изучению возникновения и прогрессирования стеноза аортального клапана, а также является ценным инструментом для изучения основных патологических механизмов стеноза аортального клапана.
