I modelli annuali stanno emergendo come uno strumento importante per comprendere i meccanismi patologici alla base della stenosi della valvola aortica a causa della mancanza di accesso a fonti affidabili di valvole aortiche umane malate. I modelli tradizionali di coniglio con stenosi della valvola aortica richiedono un'integrazione alimentare a lungo termine e una manipolazione genetica per indurre una stenosi significativa nella valvola aortica, limitandone l'uso negli studi sperimentali. Questa tecnica descrive una nuova procedura per indurre la stenosi della valvola aortica nei conigli attraverso una lesione diretta della valvola aortica, che può imitare accuratamente la condizione di un essere umano con stenosi aortica.
A dimostrare la procedura saranno Eun-Hye Park, Jin-Moo Kim e Eunmi Lee, specialisti di ricerca del mio ente regolatore. Iniziare a preparare il set di cateteri a palloncino di dilatazione collegando il dispositivo di sgonfiaggio riempito con la miscela uno-a-uno di soluzione fisiologica e mezzo di contrasto disponibile in commercio alla parte Luer lock del catetere a palloncino. Dopo aver riempito il palloncino con una soluzione di gonfiaggio, rimuovere l'aria dal catetere a palloncino.
Iniziare la procedura chirurgica inserendo un catetere endovenoso o endovenoso calibro 24 nella vena auricolare marginale del coniglio anestetizzato. Collegare un set di infusione con 100 unità per chilogrammo di soluzione salina eparinizzata eparina. Successivamente, collega il coniglio a un monitor veterinario multiparametrico per monitorare continuamente i segni vitali come il segnale di saturazione dell'ossigeno o la temperatura SpO2 e la pressione sanguigna.
Dopo aver posizionato il coniglio in posizione supina su un tavolo operatorio dotato di fluoroscopia con arco a C, rimuovere il pelo dalla zona ventrale del collo utilizzando un tagliapeli per animali. Sterilizzare l'area dell'incisione con iodio e coprire il coniglio con asciugamani chirurgici. Per posizionare il cuore del coniglio, accendere l'arco a C e selezionare la modalità fluoroscopica per l'imaging cardiaco.
Regolare la posizione del coniglio per assicurarsi che il cuore sia al centro del campo di imaging. Una volta regolata la posizione, praticare un'incisione longitudinale di circa tre centimetri nella pelle del collo e utilizzare le forbici chirurgiche per tagliare la fascia e il tessuto adiposo. Quindi separare con cura i muscoli fino a quando circa 3-3,5 centimetri dell'arteria carotide comune sinistra, o LCCA, sono esposti.
Legare l'LCCA con una sutura di seta 3-0 nella parte superiore e all'estremità dell'LCCA esposto per interrompere il flusso sanguigno. Inserire un catetere endovenoso calibro 22 nell'LCCA. Quindi introdurre un filo guida da 0,016 pollici nel ventricolo sinistro attraverso il catetere endovenoso, assicurandosi che la punta del catetere sia posizionata correttamente nel campo di imaging dell'arco a C.
Quindi, estrarre il catetere endovenoso, lasciando il filo guida prima di posizionare una guaina francese 4 sul filo guida nell'LCCA per introdurre il catetere a palloncino. Inserire con cautela il catetere a palloncino da otto millimetri sopra il filo guida nella valvola aortica sotto guida fluoroscopica con arco a C. Posizionare la punta del catetere a palloncino a circa uno o due centimetri distale dalla valvola aortica e gonfiare il palloncino spurgando la soluzione di gonfiaggio con un gonfiatore a pressione a sei atmosfere.
Quindi, far avanzare il palloncino nel ventricolo sinistro o nell'apice del ventricolo sinistro e tirarlo indietro nell'uscita del ventricolo sinistro. Ripetere questa procedura cinque volte prima di sgonfiare il palloncino. Estrarre il catetere a palloncino e il filo guida, quindi rimuovere lentamente la guaina dall'LCCA e legare immediatamente l'LCCA con la sutura durante la discesa verso la valvola aortica.
Pulire l'area dell'incisione con soluzione fisiologica per rimuovere i coaguli di sangue. Ispezionare il sito perforato per il sanguinamento arterioso prima di chiudere il muscolo e la pelle con una sutura 3-0 non assorbibile. Una volta fatto, sterilizzare la ferita con lo iodio.
Dopo l'intervento, rimuovere i cerotti e le clip di monitoraggio e tenere il coniglio in un'incubatrice per terapia intensiva. Dopo otto settimane dalla lesione con palloncino, posizionare il coniglio anestetizzato su un tavolo ecografico in posizione supina. Applicare il gel del trasduttore ad ultrasuoni sul petto dopo aver rasato la zona del torace.
Regolare il trasduttore per ottenere la vista peristernale sull'asse lungo e la vista peristernale sull'asse corto della valvola aortica. Utilizzare la modalità di imaging per registrare le immagini della valvola aortica e salvarle per un'analisi successiva. La valutazione del cambiamento strutturale nella valvola aortica ha rivelato che otto settimane dopo la lesione della valvola aortica, le cuspidi erano ispessite e il movimento era limitato nei conigli feriti alimentati con la dieta ad alto contenuto di colesterolo e vitamina D2 rispetto ai conigli di controllo o di tipo selvatico, e i conigli alimentati con la dieta ad alto contenuto di colesterolo e vitamina D2 senza lesioni valvolari.
I conigli sono stati sacrificati e i cuori sono stati asportati otto settimane dopo la lesione per l'analisi istologica della valvola aortica. La valvola aortica colorata con la tricromica di Masson ha mostrato un aumento dello spessore delle cuspidi della valvola aortica nel gruppo danneggiato rispetto al controllo nei gruppi indotti dalla dieta con colesterolo alto e vitamina D2. La colorazione con Alizarin Red e la colorazione di Von Kossa sono state eseguite per confrontare il grado di depositi valvolari di calcio indicavano depositi di calcio trascurabili nei lembi valvolari nel gruppo indotto da colesterolo alto e vitamina D2.
Al contrario, sono stati osservati significativi depositi calcifici nel gruppo con palloncino ferito. La tecnica di successo per indurre la stenosi della valvola artica, nel modello di coniglio, è qui dimostrata con una spiegazione passo-passo di una lesione diretta della valvola aortica causata da palloncino. Questo modello semplice e riproducibile offre un approccio promettente per studiare l'inizio e la progressione della stenosi della valvola aortica e fornisce uno strumento prezioso per studiare i meccanismi patologici alla base della stenosi della valvola aortica.
