Modelos anuais estão emergindo como uma ferramenta importante para entender os mecanismos patológicos subjacentes à estenose valvar aórtica devido à falta de acesso a fontes confiáveis de valvas aórticas humanas doentes. Os modelos tradicionais de estenose valvar aórtica em coelhos requerem suplementação dietética em longo prazo e manipulação genética para induzir estenose significativa na valva aórtica, limitando seu uso em estudos experimentais. Esta técnica descreve um novo procedimento para indução de estenose valvar aórtica em coelhos através de uma lesão direta por balão na valva aórtica, que pode mimetizar com precisão a condição de um ser humano com estenose aórtica.
Demonstrando o procedimento estarão Eun-Hye Park, Jin-Moo Kim e Eunmi Lee, especialistas em pesquisa do meu regulador. Comece a preparar o conjunto de cateteres balão de dilatação conectando o dispositivo de desinsuflação preenchido com a mistura um-para-um de soro fisiológico e meio de contraste comercialmente disponível à parte Luer lock do cateter-balão. Depois de encher o balão com uma solução de insuflação, remova o ar do cateter do balão.
Iniciar o procedimento cirúrgico inserindo um cateter intravenoso ou IV de calibre 24 na veia auricular marginal do coelho anestesiado. Conecte um conjunto de infusão com 100 unidades por quilograma de solução salina heparinizada de heparina. Em seguida, conecte o coelho com um monitor veterinário multiparamétrico para monitorar continuamente os sinais vitais, como o sinal de saturação de oxigênio ou a temperatura e pressão arterial da SpO2.
Depois de colocar o coelho em decúbito dorsal em uma mesa cirúrgica equipada com fluoroscopia em C, remova os pelos da área ventral do pescoço usando cortadores de pelos de animais. Esterilizar a área da incisão com iodo e cobrir o coelho com toalhas cirúrgicas. Para posicionar o coração do coelho, ligue o arco em C e selecione o modo fluoroscópico para imagens cardíacas.
Ajuste a posição do coelho para garantir que o coração esteja no centro do campo de imagem. Uma vez ajustada a posição, faça uma incisão longitudinal de aproximadamente três centímetros na pele do pescoço e use uma tesoura cirúrgica para cortar a fáscia e o tecido adiposo. Em seguida, separe cuidadosamente os músculos até que aproximadamente 3 a 3,5 centímetros da artéria carótida comum esquerda, ou ACCE, sejam expostos.
Ligate a ACCE com uma sutura de seda 3-0 na parte superior e final da ACEC exposta para interromper o fluxo sanguíneo. Insira um cateter IV de calibre 22 na ACCE. Em seguida, introduza um fio-guia de 0,016 polegada no ventrículo esquerdo através do cateter IV, garantindo que a ponta do cateter esteja adequadamente posicionada no campo de imagem do arco em C.
Em seguida, retirar o cateter endovenoso, deixando o fio-guia antes de colocar uma bainha 4 French sobre o fio-guia na ACCE para introduzir o cateter-balão. Insira cuidadosamente o cateter-balão de oito milímetros sobre o fio-guia na válvula aórtica sob orientação fluoroscópica do arco em C. Colocar a ponta do cateter-balão aproximadamente um a dois centímetros distal à valva aórtica e inflar o balão purgando a solução de insuflação com um inflador de pressão em seis atmosferas.
Em seguida, avance o balão para o ventrículo esquerdo ou ápice do VE e puxe-o de volta para a saída do VE. Repita este procedimento cinco vezes antes de desinsuflar o balão. Retirar o cateter-balão e o fio-guia, retirar lentamente a bainha da ACCE e amarrar imediatamente a ACCE com a sutura até a valva aórtica.
Limpe a área da incisão com soro fisiológico para remover os coágulos sanguíneos. Inspecionar o local puncionado em busca de sangramento arterial antes de fechar o músculo e a pele com uma sutura inabsorvível 3-0. Uma vez feito, esterilizar a ferida usando iodo.
Após a cirurgia, remova os adesivos e clipes de monitoramento e mantenha o coelho em uma incubadora de terapia intensiva. Após oito semanas da lesão com balão, colocar o coelho anestesiado em uma mesa de eco em decúbito dorsal. Aplique o gel do transdutor de ultrassom no tórax depois de raspar a área do tórax.
Ajustar o transdutor para obter a visão periesternal eixo longo e periesternal eixo curto da valva aórtica. Use o modo de imagem para gravar imagens da valva aórtica e salve as imagens para análise posterior. A avaliação da alteração estrutural na valva aórtica revelou que oito semanas após a lesão valvar aórtica, as cúspides estavam espessadas e a movimentação restrita nos coelhos lesionados alimentados com dieta rica em colesterol e vitamina D2 em comparação com coelhos controle ou selvagem, e os coelhos alimentados com dieta rica em colesterol e vitamina D2 sem lesão valvar.
Os coelhos foram sacrificados e os corações foram excisados oito semanas após a lesão para análise histológica da valva aórtica. A valva aórtica corada com tricrômico de Masson mostrou espessura aumentada das cúspides valvares aórticas no grupo lesado em relação ao controle nos grupos colesterol elevado e dieta induzida por vitamina D2. As colorações com vermelho de alizarina e de Von Kossa foram realizadas para comparar o grau de depósito de cálcio valvar que indicou depósitos de cálcio desprezíveis nos folhetos valvares no grupo com dieta rica em colesterol e vitamina D2.
Em contraste, depósitos calcificados significativos foram observados no grupo lesionado por balão. A técnica bem sucedida de indução de estenose valvar ártica, no modelo coelho, é demonstrada aqui com uma explicação passo a passo de uma lesão direta por balão na valva aórtica. Este modelo simples e reprodutível oferece uma abordagem promissora para o estudo do início e progressão da estenose da valva aórtica, e fornece uma ferramenta valiosa para investigar os mecanismos patológicos subjacentes da estenose da valva aórtica.
