Artemia salina L. Kullanarak Öldürücülük Biyotahlili

Özet

Bu çalışma, tuzlu su karides öldürücülük testi olarak da tanımlanan Artemia salina öldürücülük biyotahlil prosedürünü değerlendirmeyi ve gözden geçirmeyi amaçlamaktadır. Bu basit ve ucuz yöntem, numunelerin, yani doğal ürünlerin genel toksisitesi (ön toksisite değerlendirmesi olarak kabul edilir) hakkında bilgi verir.

Özet

Doğal ürünler antik çağlardan beri ilaç üretmek için kullanılmıştır. Günümüzde, doğal kaynaklardan elde edilen ve çok sayıda hastalığa karşı kullanılan birçok kemoterapötik ilaç bulunmaktadır. Ne yazık ki, bu bileşiklerin çoğu sıklıkla sistemik toksisite ve yan etkiler gösterir. Seçilmiş potansiyel biyoaktif örneklerin tolere edilebilirliğini daha iyi değerlendirmek için, tuzlu su karidesi (Artemia salina) genellikle öldürücülük çalışmalarında bir model olarak kullanılır. A. salina testi, çalışılan biyoaktif bileşiklerin larva evrelerinde (nauplii) mikrokabukluları öldürme yeteneğine dayanmaktadır. Bu yöntem, sitotoksisite çalışmaları ve sentetik, yarı sentetik ve doğal ürünlerin genel toksisite taraması için uygun bir başlangıç noktasını temsil eder. Yukarıda belirtilen amaçlar için genellikle uygun olan diğer birçok tahlille (in vitro hücreler veya maya suşları, zebra balığı, kemirgenler) karşılaştırıldığında basit, hızlı ve düşük maliyetli bir tahlil olarak kabul edilebilir; dahası, herhangi bir özel eğitim olmadan bile kolayca gerçekleştirilebilir. Genel olarak, A. salina testi, seçilen bileşiklerin ön toksisite değerlendirmesi ve doğal ürün ekstraktlarının biyo-rehberli fraksiyonasyonu için yararlı bir araçtır.

Giriş

Bitkilerden, hayvanlardan veya mikroorganizmalardan elde edilen doğal ürünler, çeşitli biyolojik ve farmakolojik aktiviteleri nedeniyle yeni biyoaktif moleküllerin geliştirilmesinde yıllar içinde artan bir ilgi alanı olmuştur¹. Bununla birlikte, ilişkili yan etkiler, ilaç direnci veya ajanların yetersiz özgüllüğü, özellikle antikanser ilaçları olarak kullanıldığında, etkisiz tedaviye yol açabilecek başlıca faktörleri temsil etmektedir ^1,2.

Son birkaç on yılda, bazıları antikanser ajanları olarak kullanılan birkaç bitki kaynaklı sitotoksik ajan keşfedilmiştir<....

Protokol

1. Ekipman hazırlığı

1. Ticari olarak temin edilebilen kuluçka ekipmanlarını satın alın. Kuluçka ekipmanını kurmak için uygun bir yer seçin (Şekil 2A). Huni şeklindeki kabı siyah desteğe (sete dahil) yerleştirin ve seviye işaretini ve musluğu görmek için huniyi uygun bir yöne çevirin.
2. El yapımı migrasyon ekipmanı yapmak için, 12 cm'lik bir son yükseklik elde etmek için iki adet 0,5 L (5,8 cm çapında) plastik şişenin üstünü kesin. Her şişede alttan 7 cm uzakta bir tarafta 1,5 cm çapında bir delik oluşturun ve iki açıklık arasına 13 cm'lik bir lastik tüp (1,3 cm dış ve 0,9 cm iç çap) yerleştirin. Açıklıklar....

Sonuçlar

Son zamanlarda grubumuz tarafından incelenen bazı doğal ürünlerin genel toksisitesi, tuzlu su karidesi öldürücülük biyotahlili ile değerlendirilmiştir. Dört ekstrakt (Pa- P. ambigerus; Pb- P. barbatus; Pc- P. cylindraceus; ve antioksidan aktiviteleri ile bilinen Plectranthus cinsinden Pe- P. ecklonii) test edildi (yayınlanmamış sonuçlar). Ek olarak, Plectranthus spp.'den elde edilen iki doğal bileşik (1 ve 2) ve üç yarı sentetik türev (3, 4, 5; .......

Tartışmalar

Son yıllarda, bilimsel topluluk toksisite taramaları için alternatif modellere olan dikkatini artırmıştır²¹. A. salina öldürücülük biyotahlilinin yanı sıra, diğer metodolojiler genellikle numune tolere edilebilirliğinin değerlendirilmesi için yapılır ve omurgalı biyotahlilleri (kemirgenler gibi), omurgasızlar (zebra balığı gibi), maya suşları veya hücreleri kullanan in vitro yöntemler ve siliko yöntemler^22,23,24,25

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
24-well plates	Thermo Fisher Scientific, Denmark	174899	Thermo Scientific Nunc Up Cell 24 multidish
Aluminium foil	Albal	-	Can be purchased in supermarket
Artemio Set	JBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Germany	61066000	Can be purchased in pet shops
Binocular microscope	Ceti, Belgium	1700.0000	Flexum-24AED, 220-240 V, 50 Hz
Bottles	-	-	0.5 L Diameter: 5.8 cm; Height: 12 cm
Brine shrimp cysts	JBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Germany	3090700	Can be purchased in pet shops
Brine shrimp salt	JBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Germany	3090600	Can be purchased in pet shops
Dimethyl sulfoxide (DMSO)	VWR chemicals	CAS: 67-68-5	99% purity
Discartable tips	Diamond	F171500	Volume range: 100 - 1000 µL
Eppendorf microtubes	BRAND	7,80,546	Microtubes, PP, 2 mL, BIO-CERT PCR QUALITY
Erlenmeyer flask	VWR chemicals	4,47,109	volume: 100 mL
Glass beaker	Normax	3.2111654N	Volume: 1000 mL
Gloves	Guantes Luna	GLSP3	-
GraphPad Prism	GraphPad Software, San Diego, CA, USA	-	GraphPad Prism version 5.00 for Windows, www.graphpad.com, accessed on 5 February 2021; commercial statistical analysis software
Home-made A. salina Grower	-	-	Home made: two plastic bottles connected by a hose
Hot glue	Parkside	PHP500E3	230 V, 50 Hz, 25 W
Incubator	Heidolph Instruments, Denmark	-	One Heidolph Unimax 1010 equipment and one Heidolph Inkubator 1006
Light	Roblan	SKYC3008FE14	LED light bulb
Micropipettes	VWR chemicals	613-5265	Volume range: 100 - 1000 µL
Potassium dichromate (K2Cr2O7)	VWR chemicals	CAS: 7778-50-9	99% purity
Pump ProAir a50	JBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Germany	-	Included in the Artemio Set+1 kit
Rubber tube	-	-	1.3 cm outer and 0.9 cm inner diameter
Stirring rod	VWR chemicals	441-0147	6 mm, 250 mm
Termometer	VWR chemicals	620-0821	0 - 100 °C