JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Bu çalışma, tuzlu su karides öldürücülük testi olarak da tanımlanan Artemia salina öldürücülük biyotahlil prosedürünü değerlendirmeyi ve gözden geçirmeyi amaçlamaktadır. Bu basit ve ucuz yöntem, numunelerin, yani doğal ürünlerin genel toksisitesi (ön toksisite değerlendirmesi olarak kabul edilir) hakkında bilgi verir.

Özet

Doğal ürünler antik çağlardan beri ilaç üretmek için kullanılmıştır. Günümüzde, doğal kaynaklardan elde edilen ve çok sayıda hastalığa karşı kullanılan birçok kemoterapötik ilaç bulunmaktadır. Ne yazık ki, bu bileşiklerin çoğu sıklıkla sistemik toksisite ve yan etkiler gösterir. Seçilmiş potansiyel biyoaktif örneklerin tolere edilebilirliğini daha iyi değerlendirmek için, tuzlu su karidesi (Artemia salina) genellikle öldürücülük çalışmalarında bir model olarak kullanılır. A. salina testi, çalışılan biyoaktif bileşiklerin larva evrelerinde (nauplii) mikrokabukluları öldürme yeteneğine dayanmaktadır. Bu yöntem, sitotoksisite çalışmaları ve sentetik, yarı sentetik ve doğal ürünlerin genel toksisite taraması için uygun bir başlangıç noktasını temsil eder. Yukarıda belirtilen amaçlar için genellikle uygun olan diğer birçok tahlille (in vitro hücreler veya maya suşları, zebra balığı, kemirgenler) karşılaştırıldığında basit, hızlı ve düşük maliyetli bir tahlil olarak kabul edilebilir; dahası, herhangi bir özel eğitim olmadan bile kolayca gerçekleştirilebilir. Genel olarak, A. salina testi, seçilen bileşiklerin ön toksisite değerlendirmesi ve doğal ürün ekstraktlarının biyo-rehberli fraksiyonasyonu için yararlı bir araçtır.

Giriş

Bitkilerden, hayvanlardan veya mikroorganizmalardan elde edilen doğal ürünler, çeşitli biyolojik ve farmakolojik aktiviteleri nedeniyle yeni biyoaktif moleküllerin geliştirilmesinde yıllar içinde artan bir ilgi alanı olmuştur1. Bununla birlikte, ilişkili yan etkiler, ilaç direnci veya ajanların yetersiz özgüllüğü, özellikle antikanser ilaçları olarak kullanıldığında, etkisiz tedaviye yol açabilecek başlıca faktörleri temsil etmektedir 1,2.

Son birkaç on yılda, bazıları antikanser ajanları olarak kullanılan birkaç bitki kaynaklı sitotoksik ajan keşfedilmiştir 1,2,3. Bu bağlamda paklitaksel, doğal kökenli en iyi bilinen ve en aktif kemoterapötik ilaçlardan biri olarak bildirilmektedir 3,4. Şu anda, piyasadaki tüm ilaçların% 35'inden fazlasının doğal ürünlerden türetildiği veya bunlardan ilham aldığı tahmin edilmektedir5. Bu bileşiklerin potansiyel yüksek toksisitesi, tüm çalışma aşamalarında dikkate alınmasını gerektirir, çünkü farklı kirletici maddeler ve hatta bitkinin metabolik bileşenleri toksik etkilere neden olabilir. Bu nedenle, yeni potansiyel bitki bazlı tedavilerin biyolojik aktivitesini ve güvenliğini değerlendirmek için ön aşamada farmakolojik ve toksikolojik profiller yapılmalıdır. Yeni biyoaktif örneklerin toksisitesini değerlendirmek için, omurgasız hayvanlar incelenecek en iyi modeller olarak düşünülebilir. Minimum etik gereklilikler talep ederler ve omurgalılarda bir sonraki test turu için en umut verici ürünlere öncelik vermek için ön in vitro testlere izin verirler 1,6.

Genellikle tuzlu su karidesi olarak bilinen A. salina, Artemia cinsine ait küçük bir halofilik omurgasızdır (Artemiidae familyası, Anostraca, subphylum Crustacea; Şekil 1). Deniz ve sucul tuzlu su ekosistemlerinde, tuzlu su karidesleri mikroalglerle beslendikleri ve balıkları beslemek için kullanılan zooplanktonun bileşenleri oldukları için önemli bir besinsel rol oynarlar. Ayrıca, larvaları (nauplii olarak bilinir), ön çalışmalarsırasında genel toksisitenin değerlendirilmesinde yaygın olarak kullanılmaktadır 1,3,7.

Artemia spp. öldürücülük çalışmalarında yaygın olarak kullanılmaktadır ve aynı zamanda laboratuvarda yetiştirilen nauplii'yi öldürme yeteneklerine dayanarak potansiyel olarak biyoaktif bileşiklerin toksisitesini izleyerek toksisite değerlendirmeleri için uygun bir başlangıç noktasıdır 1,8. Bu nedenle, A. salina kullanımı genel toksisite çalışmalarında cazibe kazanmıştır, çünkü hayvan modelleri9 üzerindeki diğer testlere kıyasla çok verimli ve kullanımı kolay bir yöntemdir.

Basit anatomileri, küçük boyutları ve kısa yaşam döngüleri sayesinde, çok sayıda omurgasız tek bir deneyde incelenebilir. Bu nedenle, genetik uygunluğu ve düşük maliyetli uyumluluğu büyük ölçekli taramalarla birleştirirler1. Bu bağlamda, genel bir toksisite tahlilinde tuzlu su karidesinin kullanılması, hızlı büyüme (kuluçkadan ilk sonuçlara kadar 28-72 saat gereklidir), maliyet etkinliği ve ticari yumurtaların uzun raf ömrü gibi tüm yıl boyunca kullanılabilen 3,10 gibi çeşitli avantajlar göstermektedir. Öte yandan, omurgasızlar ilkel bir organ sistemine sahip olduklarından ve adaptif bir bağışıklık sisteminden yoksun olduklarından, insan hücreleri için mükemmel ve güvenilir bir model temsil etmezler1.

Bununla birlikte, seçilen numunelerin genel toksisitesi için bir ön değerlendirme yöntemi sağlar. Ölümcül bir tahlil olarak yaygın olarak kullanıldığından, potansiyel antikanser ajanlarının toksik etkileri hakkında geçici endikasyonlar sağlayabilir. Genellikle Artemia karidesleri arasında mümkün olan en düşük ölüm oranını göstermenin gerekli olduğu diğer biyolojik aktivitelerle donatılmış bileşiklerin genel toksisitesi hakkında geri bildirim almak için de kullanılır.

Grubumuzdan devam eden bir çalışmada, Plectranthus türlerinden elde edilen farklı ekstraktlar antioksidan ve antimikrobiyal aktiviteler göstermiştir (yayınlanmamış sonuçlar). Paralel olarak, ekstraktların saflaştırılmasıyla izole edilmiş bileşikler elde edildi ve daha sonra kimyasal olarak modifiye edildi. Ekstraktlar, saf bileşikler ve yarı sentetik türevler daha sonra genel toksisite açısından test edildi. Bu bağlamda, bu çalışma, Plectranthus11 cinsinin farklı bitkilerinden biyoaktif ekstraktların ve izole edilmiş bileşiklerin genel toksisitesi ve potansiyel sitotoksik aktivitesinin değerlendirilmesi için Artemia öldürücülük biyotestinin kullanımına genel bir bakış sunmayı amaçlamaktadır.

figure-introduction-5398
Resim 1: Mikroskop altında Artemia salina . Mikroskop altında görüldüğü gibi A. salina'nın yeni yumurtadan çıkmış nauplii (büyütme 12x). Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protokol

1. Ekipman hazırlığı

  1. Ticari olarak temin edilebilen kuluçka ekipmanlarını satın alın. Kuluçka ekipmanını kurmak için uygun bir yer seçin (Şekil 2A). Huni şeklindeki kabı siyah desteğe (sete dahil) yerleştirin ve seviye işaretini ve musluğu görmek için huniyi uygun bir yöne çevirin.
  2. El yapımı migrasyon ekipmanı yapmak için, 12 cm'lik bir son yükseklik elde etmek için iki adet 0,5 L (5,8 cm çapında) plastik şişenin üstünü kesin. Her şişede alttan 7 cm uzakta bir tarafta 1,5 cm çapında bir delik oluşturun ve iki açıklık arasına 13 cm'lik bir lastik tüp (1,3 cm dış ve 0,9 cm iç çap) yerleştirin. Açıklıkları sıcak tutkalla kapatın (Şekil 2B) ve 15 dakika kurumaya bırakın; şişeleri düz bir yüzeye koyun ve sızıntı olmadığını doğrulamak için suyla doldurun.

2. Yapay tuz çözeltisinin hazırlanması

  1. Bir cam beherde, 35 g / L konsantrasyonda yapay bir tuz çözeltisi (tuzlu su karides tuzu) hazırlayın. Bunu yapmak için, üreticinin talimatlarına göre 800mL musluk suyuna 28 g tuz ekleyin. Tüm tuz iyice çözülene kadar bir karıştırma çubuğuyla karıştırın.
    NOT: Hazırlanan tuzlu su çözeltisinin hacmini, mevcut kapların boyutuna göre ayarlayın.

3. Numune hazırlama

  1. Uygun miktarda ekstraktı çözerek tüm numuneleri bir mikrosantrifüj tüpünde hazırlayın (Plectranthus extracts, Pa- P. ambigerus; Pb- P. barbatus; Pc- P. cylindraceus ; ve Pe- P. ecklonii) veya bileşikler 1-5 ( Plectranthus spp. ve üç yarı sentetik türev [3, 4, 5]'den elde edilen iki doğal bileşik [1 ve 2]; Şekil 3) dimetil sülfoksit (DMSO)12'de, 10 mg / mL'lik bir nihai konsantrasyon elde etmek için (numune suda çözünürse, DMSO kullanımı gerekli değildir).
  2. Her numunenin 10 μL'sini (ve negatif kontrol için DMSO'yu), 0.1 mg / mL'lik bir nihai konsantrasyon elde etmek için adım 2.1'de hazırlanan 990 μL yapay salin çözeltisi kullanarak yeni bir mikrosantrifüj tüpünde seyreltin.
  3. Bir duman başlığı altında, bir Erlenmeyer şişesinde, damıtılmış suda 1 mg/ mL 13,14,15 konsantrasyonunda bir potasyum dikromat çözeltisi (K 2 Cr 2O7) hazırlayın.

4. Salamura karides öldürücülük biyotahlili

NOT: Bu tahlil,1,16,17,18,19 modifikasyonları ile birkaç yazarın çalışmalarından geliştirilmiştir.

  1. Kuluçkalık kabı, seviye işaretine (500 mL) kadar adım 2.1'de hazırlanan ortamla doldurun (Şekil 2C).
  2. Tuz çözeltisine bir kaşık (yaklaşık 0.75 g) tuzlu su karides kistleri yerleştirin ve ardından kabı kapatın. Doğrudan ekipmana doğru işaret eden bir lamba (masa lambası, 40 W, 230 V, 50 Hz, 8 W, 4.000 K, 830 lm LED ampullü) yerleştirin (Şekil 2A) ve açın.
  3. Hava tedarikçi sistemini (3 W çıkış, 50 Hz, 230 V) ekipmanın üstüne yerleştirilen konektöre takın ve pompayı açın.
  4. Oda sıcaklığını 25 ± 3 °C'de tutun. Salamura karides kistleri, yapay tuz çözeltisinde, kuvvetli havalandırma, sürekli aydınlatma ve sabit sıcaklık altında, 24 saat ila 48 saat sonra yumurtadan çıkar.
    NOT: Alternatif olarak, dikey bir inkübatör kullanılabilir.
  5. Yumurtalar yumurtadan çıktıktan sonra, hava pompasını kapatın ve nauplii (huninin dibine doğru hareket eden) boş yumurta kutularından (üstte yüzen) ayrılana kadar bekleyin.
  6. Yumurtadan çıkmamış yumurtaları canlı nauplii'den ayırmak için, alttaki çıkış musluğunu açın ve huninin içeriğini el yapımı göç ekipmanı kabının kaplarından birine boşaltın (adım 1.2'de açıklanmıştır). Nauplii ve artık yumurtadan çıkmamış yumurtaları içeren çözeltinin tüp seviyesinin altında olduğundan emin olun. İkinci kapta, artık tuz çözeltisini tüpün yüksekliğinin üzerindeki adım 2.1'den ekleyin.
  7. Kabı nauplii ve alüminyum folyo kullanarak artık yumurtadan çıkmamış yumurtalarla örtün. Lambayı sadece tuz çözeltisi ile ikinci kaba yerleştirin. Salamura karidesi ışıktan etkilenecek ve bir kaptan diğerine (hasat kabı) göç edecek ve yumurtalar (yavaşça dibe çökelmiş) ile canlı Artemia arasında verimli bir ayrıma yol açacaktır.
  8. Ardından, ekipmanı inkübatöre 4.4 adımında 4 saat boyunca kullanılan aynı koşullar altında yerleştirin (Şekil 2E). Hasat kabından, 10 ila 15 nauplii içeren 900 μL tuzlu su çözeltisi toplayın. Tuzlu su çözeltisini nauplii ile 24 delikli bir plakanın her bir kuyucuğuna yerleştirin (Şekil 2F); tüm numuneler quadruplicates halinde test edilir.
  9. Negatif kontrolün (DMSO), pozitif kontrolün (K 2 Cr2O7, potasyum dikromat), yapay tuz çözeltisinin ve numunelerin her birinin her birini ilgili kuyuya 100 μL ekleyin (Şekil 2F)13,14.
    NOT: Her bir kuyucuktaki numuneler 0.01 mg/mL konsantrasyonda olacaktır. Tuz çözeltisindeki pozitif kontrolün son konsantrasyonu, kuyudaki tüm naupliilerin potasyum dikromatın toksik etkisine maruz kaldığından ve öldüğünden emin olmak için 0.1 mg / mL olacaktır. Yapay tuz çözeltisi boş gibi davranacaktır.
  10. Plakayı 25 ± 3 °C'de 24 saat boyunca aydınlatma altında inkübe edin (Şekil 2G). 24 saat sonra, her bir kuyucuktaki ölü larva sayısını (5 s için mobil olmayan nauplii) bir dürbün mikroskobu (12x) 20 altında kaydedin (Şekil 2H). Alternatif olarak, bir el lensi kullanın.
  11. Kalan canlı larvaların ölümüne neden olmak için 100 μL potasyum dikromat çözeltisi ekleyin ve 6 saat bekleyin. Her kuyucuktaki toplam ölü larvaları mikroskop altında sayın. Ölüm oranını aşağıdaki denkleme göre belirleyin.
    figure-protocol-6310
  12. Tüm tahlilleri üçlü olarak yapın. Standart sapmaları (SD) hesaplayın ve sonuçları, her biri dahili dörtgenlere (n = 12) sahip üç bağımsız deneyin ortalaması olarak ifade edin ± SD. Meyer ve ark. tarafından belirtildiği gibi, ham ekstraktları ve LC50< 1.000 μg / mL ile saf bileşikleri toksik olarak düşünün; Ayrıca, tuzlu su karidesinin ölüm oranının, test edilen numunelerin konsantrasyonu ile orantılı olduğunu dikkate alın21.

figure-protocol-6950
Şekil 2: Artemia salina öldürücülük biyotahlil yöntemi. (A) Salamura karides kistlerinin kuluçkalanması için kullanılan ticari olarak temin edilebilen ekipman; (B) El yapımı göç ekipmanları; (C) Tuzlu su çözeltisi ile doldurulmuş kuluçkalık kap; (D) Yumurtadan çıkmamış yumurta ve naupliilerin toplanması; (E) Migrasyon adımı sırasında inkübatörde bulunan el yapımı ekipman. Lambadan uzaktaki kap alüminyum folyo ile kaplanmalıdır; ancak, buradaki set kurulumunun daha iyi bir görünümü için kaldırıldı; (F) Tahlil yapılmadan önce kuyularda Artemia'nın toplanması. Bileşikler gösterildiği gibi yerleştirilmelidir: - negatif kontrole (DMSO), + pozitif kontrole (K2Cr2O7), yapay tuz çözeltisine tuza ve test edilecek numunelere 1 ila 3'e (bu durumda bileşikler 1-3) atıfta bulunur; (G) Artemia'yı ve seçilen numuneleri içeren 24 delikli plakanın kuluçkalanması; (H) Artemia dürbün mikroskobu altında sayılır. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

figure-protocol-8437
Şekil 3: Seçilmiş bileşiklerin yapıları. Plectranthus türlerinden ekstrakte edilen bileşiklerin 1-2 ve yarı sentez ile elde edilen 3-5 numaralı bileşiklerin yapısı. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Sonuçlar

Son zamanlarda grubumuz tarafından incelenen bazı doğal ürünlerin genel toksisitesi, tuzlu su karidesi öldürücülük biyotahlili ile değerlendirilmiştir. Dört ekstrakt (Pa- P. ambigerus; Pb- P. barbatus; Pc- P. cylindraceus; ve antioksidan aktiviteleri ile bilinen Plectranthus cinsinden Pe- P. ecklonii) test edildi (yayınlanmamış sonuçlar). Ek olarak, Plectranthus spp.'den elde edilen iki doğal bileşik (1 ve 2) ve üç yarı sentetik türev (3, 4, 5; ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Son yıllarda, bilimsel topluluk toksisite taramaları için alternatif modellere olan dikkatini artırmıştır21. A. salina öldürücülük biyotahlilinin yanı sıra, diğer metodolojiler genellikle numune tolere edilebilirliğinin değerlendirilmesi için yapılır ve omurgalı biyotahlilleri (kemirgenler gibi), omurgasızlar (zebra balığı gibi), maya suşları veya hücreleri kullanan in vitro yöntemler ve siliko yöntemler22,23,24,25

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Açıklamalar

Yazarlar, finansal veya başka türlü hiçbir çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.

Teşekkürler

Profesör Amilcar Roberto'nun anısına.

Bu çalışma, CBIOS ve doktora hibesi SFRH / BD / 018'e (Vera Isca) atfedilen UIDB / 04567/2020 ve UIDP / 04567 / 2020 projeleri kapsamında Fundação para a Ciência e a 137671 Tecnologia (FCT, Portekiz) tarafından finansal olarak desteklenmiştir.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
24-well platesThermo Fisher Scientific, Denmark174899Thermo Scientific Nunc Up Cell 24 multidish
Aluminium foilAlbal-Can be purchased in supermarket
Artemio SetJBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Germany61066000Can be purchased in pet shops
Binocular microscopeCeti, Belgium 1700.0000Flexum-24AED, 220-240 V, 50 Hz
Bottles--0.5 L Diameter: 5.8 cm; Height: 12 cm
Brine shrimp cystsJBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Germany3090700Can be purchased in pet shops
Brine shrimp saltJBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Germany3090600Can be purchased in pet shops
Dimethyl sulfoxide (DMSO)VWR chemicalsCAS: 67-68-5 99% purity
Discartable tipsDiamondF171500Volume range: 100 - 1000 µL
Eppendorf microtubesBRAND7,80,546Microtubes, PP, 2 mL, BIO-CERT PCR QUALITY
Erlenmeyer flaskVWR chemicals4,47,109volume: 100 mL
Glass beakerNormax3.2111654NVolume: 1000 mL
GlovesGuantes LunaGLSP3-
GraphPad PrismGraphPad Software, San Diego, CA, USA-GraphPad Prism version 5.00 for Windows, www.graphpad.com, accessed on 5 February 2021; commercial statistical analysis software
Home-made A. salina Grower - -Home made: two plastic bottles connected by a hose
Hot glueParksidePHP500E3230 V, 50 Hz, 25 W
IncubatorHeidolph Instruments, Denmark  -One Heidolph Unimax 1010 equipment and one Heidolph Inkubator 1006
LightRoblanSKYC3008FE14LED light bulb
MicropipettesVWR chemicals613-5265Volume range: 100 - 1000 µL
Potassium dichromate (K2Cr2O7)VWR chemicalsCAS: 7778-50-9 99% purity
Pump ProAir a50JBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Germany -Included in the Artemio Set+1 kit
Rubber tube--1.3 cm outer and 0.9 cm inner diameter
Stirring rodVWR chemicals441-0147figure-materials-2755 6 mm, 250 mm
TermometerVWR chemicals620-08210 - 100 °C

Referanslar

  1. Ntungwe, N. E., et al. Artemia species: An important tool to screen general toxicity samples. Current Pharmaceutical Design. 26 (24), 2892-2908 (2020).
  2. Cragg, G. M., Newman, D. J. Natural products: A continuing source of novel drug leads. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - General Subjects. 1830 (6), 3670-3695 (2013).
  3. Ntungwe, E., et al. General toxicity screening of Royleanone derivatives using an artemia salina model. Journal Biomedical and Biopharmaceutical Research. 18 (1), 114(2021).
  4. Seca, A., Plant Pinto, D. secondary metabolites as anticancer agents: Successes in clinical trials and therapeutic application. International Journal of Molecular Sciences. 19 (1), 263(2018).
  5. Calixto, J. B. The role of natural products in modern drug discovery. Anais da Academia Brasileira de Ciências. 91 (3), 1-7 (2019).
  6. Mandrell, D., et al. Automated zebrafish chorion removal and single embryo placement: optimizing throughput of zebrafish developmental toxicity screens. Journal of Laboratory Automation. 17 (1), 66-74 (2012).
  7. Zhang, Y., Mu, J., Han, J., Gu, X. An improved brine shrimp larvae lethality microwell test method. Toxicology Mechanisms and Methods. 22 (1), 23-30 (2012).
  8. Domínguez-Villegas, V., et al. antioxidant and cytotoxicity activities of methanolic extract and prenylated flavanones isolated from leaves of eysehardtia platycarpa. Natural Product Communications. 8 (2), 177-180 (2013).
  9. Hamidi, M. R., Jovanova, B., Panovska, T. K. Toxicological evaluation of the plant products using Brine Shrimp (Artemia salina L.) model. Macedonian Pharmaceutical Bulletin. 60 (01), 9-18 (2014).
  10. Libralato, G., Prato, E., Migliore, L., Cicero, A. M., Manfra, L. A review of toxicity testing protocols and endpoints with Artemia spp. Ecological Indicators. 69, 35-49 (2016).
  11. Mendes Hacke, A. C., et al. Cytotoxicity of cymbopogon citratus (DC) Stapf fractions, essential oil, citral, and geraniol in human leukocytes and erythrocytes. Journal of Ethnopharmacology. 291, 115147(2022).
  12. Thangapandi, V., Pushpanathan, T. Comparison of the Artemia salina and Artemia fransiscana bioassays for toxicity of Indian medicinal plants. Journal of Coastal Life Medicine. 2 (6), 453-457 (2014).
  13. Syahmi, A. R. M., et al. Acute oral toxicity and brine shrimp lethality of Elaeis guineensis Jacq., (Oil Palm Leaf) methanol extract. Molecules. 15 (11), 8111-8121 (2010).
  14. Sasidharan, S., et al. Acute toxicity impacts of Euphorbia hirta L extract on behavior, organs body weight index and histopathology of organs of the mice and Artemia salina. Pharmacognosy Research. 4 (3), 170(2012).
  15. Libralato, G. The case of Artemia spp. in nanoecotoxicology. Marine Environmental Research. 101, 38-43 (2014).
  16. Okumu, M. O., et al. Artemia salina as an animal model for the preliminary evaluation of snake venom-induced toxicity. Toxicon: X. 12, 100082(2021).
  17. Rajabi, S., Ramazani, A., Hamidi, M., Naji, T. Artemia salina as a model organism in toxicity assessment of nanoparticles. DARU Journal of Pharmaceutical Sciences. 23 (1), 20(2015).
  18. Svensson, B. -M., Mathiasson, L., Mårtensson, L., Bergström, S. Artemia salina as test organism for assessment of acute toxicity of leachate water from landfills. Environmental Monitoring and Assessment. 102 (1), 309-321 (2005).
  19. Banti, C., Hadjikakou, S. Evaluation of toxicity with brine shrimp assay. Bio-Protocol. 11 (2), 3895(2021).
  20. Pecoraro, R., et al. Artemia salina: A microcrustacean to assess engineered nanoparticles toxicity. Microscopy Research and Technique. 84 (3), 531-536 (2021).
  21. Lillicrap, A., et al. Alternative approaches to vertebrate ecotoxicity tests in the 21st century: A review of developments over the last 2 decades and current status. Environmental Toxicology and Chemistry. 35 (11), 2637-2646 (2016).
  22. Ribeiro, I. C., et al. Yeasts as a model for assessing the toxicity of the fungicides Penconazol, Cymoxanil and Dichlofulanid. Chemosphere. (10), 1637-1642 (2000).
  23. Armour, C. D., Lum, P. Y. From drug to protein: using yeast genetics for high-throughput target discovery. Current Opinion in Chemical Biology. 9 (1), 20-24 (2005).
  24. Modarresi Chahardehi, A., Arsad, H., Lim, V. Zebrafish as a successful animal model for screening toxicity of medicinal plants. Plants. 9 (10), 1345(2020).
  25. Fischer, I., Milton, C., Wallace, H. Toxicity testing is evolving. Toxicology Research. 9 (2), 67-80 (2020).
  26. de Araújo, G. L., et al. Alternative methods in toxicity testing: the current approach. Brazilian Journal of Pharmaceutical Sciences. 50 (1), 55-62 (2014).
  27. Toussaint, M., et al. A high-throughput method to measure the sensitivity of yeast cells to genotoxic agents in liquid cultures. Mutation Research/Genetic Toxicology and Environmental Mutagenesis. 606 (1), 92-105 (2006).
  28. Horzmann, K. A., Freeman, J. L. Making waves: New developments in toxicology with the zebrafish. Toxicological Sciences. 163 (1), 5-12 (2018).
  29. Avdesh, A., et al. Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: An introduction. Journal of Visualized Experiments. (69), e4196(2012).
  30. Cunliffe, V. T. Zebrafish: A Practical Approach. Nüsslein-Volhard, C., Dahm, R. , Oxford University Press. (2002).
  31. Sitarek, P., et al. Insight the biological activities of selected Abietane Diterpenes isolated from Plectranthus spp. Biomolecules. 10 (2), 194(2020).
  32. Matias, D., et al. Cytotoxic activity of Royleanone Diterpenes from Plectranthus madagascariensis Benth. ACS Omega. 4 (5), 8094-8103 (2019).
  33. Garcia, C., et al. Royleanone derivatives from Plectranthus spp. as a novel class of P-glycoprotein inhibitors. Frontiers in Pharmacology. 11, (2020).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

KimyaSay 188

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır