Ambystoma mexicanum'da Plak Fiksasyonu ile Femur Osteotomisinin Stabilize Edilmesi

Özet

Olgun aksolotllarda iç plak fiksasyonu ile femoral osteotomi cerrahisi için bir protokol sunulmuştur. Prosedür, suda yaşayan amfibilerde uzuv rejenerasyonu ve kırık iyileşmesi üzerine karşılaştırmalı çalışmalar yapmak için kullanılabilir.

Özet

Aksolotl (Ambystoma mexicanum), uzuvlar, beyin, kalp, kuyruk ve diğerleri dahil olmak üzere kaybedilen veya hasar gören organları yeniden oluşturma konusundaki olağanüstü yeteneği nedeniyle rejeneratif tıp için umut verici bir model organizmadır. Aksolotl üzerine yapılan çalışmalar, yaralanma sonrası progenitör aktivasyonu ve doku restorasyonunu yöneten hücresel ve moleküler yollara ışık tutmuştur. Bu bilgi, kemik kaynamaması gibi rejenerasyon yetersizliği olan yaralanmaların iyileşmesini kolaylaştırmak için uygulanabilir. Mevcut protokolde, internal plak fiksasyon sistemi kullanılarak femur osteotomi stabilizasyonu anlatılmaktadır. Prosedür, suda yaşayan hayvanlarda (axolotl, Ambystoma mexicanum) kullanılmak üzere uyarlanmıştır. ≥20 cm'lik burundan kuyruğa kadar uçlu, tamamen kemikleşmiş, fare boyutunda karşılaştırılabilir femurlara sahip aksolotllar kullanıldı ve plak konumlandırma ve fiksasyonun yanı sıra ameliyat sonrası bakıma özel dikkat gösterildi. Bu cerrahi teknik, standartlaştırılmış ve stabilize edilmiş kemik fiksasyonuna izin verir ve aksolotl uzuv rejenerasyonu ve amfibiler ve memeliler arasında benzer kemik iyileşmesi çalışmaları ile doğrudan karşılaştırma için yararlı olabilir.

Giriş

Aksolotl (Ambystoma mexicanum) kuyruk, omurilik, beyin, kalp, solungaçlar ve uzuvlar 1,2,3,4,5 dahil olmak üzere organ yenilenmesi için önemli bir modeldir. Aksolotl uzuv rejenerasyonu ile ilgili ayrıntılı çalışmalar, hücre farklılaşma mekanizmalarını ve amputasyon bölgesinde bir kök hücre havuzu, blastema oluşumunu ortaya çıkardı. Blastema hücrelerinin, desenli bir iskelet ^6,7 de dahil olmak üzere tüm eksi....

Protokol

Aşağıdaki prosedür Viyana Sulh Ceza Hakimi'nin onayı ile gerçekleştirilmiştir (GZ: MA 58-65248-2021-26). 5-8 yaşlarında, ≥ 20 cm burundan kuyruğa (burundan kuyruğun ucuna kadar) uzun aksolotllar (Ambystoma mexicanum) kırık cerrahisi ve amputasyonlar için kullanıldı. Ameliyatlar için hem erkekler hem de kadınlar kullanıldı. Aksolotllar, Moleküler Patoloji Araştırma Enstitüsü tesisinde yetiştirildi. Ağrı ve enfeksiyon riski, başarılı bir sonuç elde etmek için uygun analjezikler ve antibiyotiklerle yönetildi. Çalışma için kullanılan reaktifler ve ekipmanlar Malzeme Tablosunda listelenmiştir.

Tartışmalar

Şu anda tarif edilen femur plağı fiksasyonu ve osteotomi yöntemi, Ambystoma mexicanum (aksolotl) gibi suda yaşayan hayvanlarda uygulanmasına izin verir. Bu cerrahi yöntem son zamanlarda aksolotllarda kırık iyileşmesi ve uzuv rejenerasyonunu farelerde kırık iyileşmesi ile karşılaştırmak için kullanılmıştır⁹. Farelerde olduğu gibi, kendiliğinden kırılan vidalarla kemiğe 4 delikli bir fiksatör plakası takılabilir ve

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.66 mm Gigly wire saw	RISystem	RIS.590.120
7.0 Optilene suture	Braun	C3090538
Benzocaine	Sigma-Aldrich	E1501	dilute to 0.03%  prior to using
Butorphanol (Butomidor 10 mg/mL)	Richter Pharma AG	-	dilute to 0.5 mg/L  prior to using
Drill bit 0.30 mm	RISystem	RIS.590.200
Dumont #5 Forceps - Standard/Inox	Fine Science Tools	11251-20
Hand drill	RISystem	RIS.390.130	better to have at least 3 pieces
Micro CT data analyzer	Bruker, Billerica, MA, USA	SkyScan NRecon software
Micro CT specimen scanner	Bruker, Billerica, MA, USA	SkyScan 1172
Moria MC31b Iris forceps - smooth, curved, 10 cm	Fine Science Tools	11373-12FST	2 pieces
MouseFix Drill-&Saw guide 1.75 mm, rigid	RISystem	RIS.301.102
MouseFix plate 4 hole, rigid	RISystem	RIS.401.110
MouseFix screw, L =2.00 mm	RISystem	RIS.401.100	need 4 per bone
Narrow Pattern Forceps	VWR	FSCI11002-12
penicillin/streptomycin	Gibco	15140-122
Ring forceps	Fine Science Tools	11103-09
scalpel #15	B Braun, Thermo Fischer Scientific	5518032
Square box wrench 0.50 mm	RISystem	RIS.590.111
Sterile bone wax, 2.5 g	Ethicon, Johnson & Johnson	W810
Student Fine Scissors - Straight/11.5cm	Fine Science Tools	91460-11