JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Bu protokol, bileşiklerin elastaz aktivitesini inhibe etme veya aktive etme yeteneğini belirlemek için bir kolorimetrik tahlil yönteminin geliştirilmesini açıklar.

Özet

Bir serin proteaz olan elastaz, elastin yıkımında önemli bir rol oynar. Elastin, akciğerlerde, deride ve kan damarlarında doku elastikiyetinin korunmasına yardımcı olan hücre dışı bir proteindir. Elastaz aktivitesinin sıkı bir şekilde düzenlenmesi doku homeostazı için çok önemlidir, çünkü düzensizlik amfizem, kırışıklıklar ve ateroskleroz gibi patolojilere katkıda bulunabilir. Doğal olarak oluşan fitokimyasallar gibi bazı bileşikler, terapötik müdahale potansiyeli göstermiş ve önemli ilgi görmüştür. Farklı bileşiklerin elastaz üzerindeki modülatör etkilerinin aydınlatılması, ister inhibitör ister uyarıcı olsun, elastaz ile ilişkili bozuklukları hedef alan yeni terapötik ve kozmetik stratejiler geliştirmek için çok önemlidir. Elastaz aktivitesini ölçmek için yaygın olarak kabul edilen bir yöntem, kolorimetrik elastaz testidir. Bu tahlilde, elastazı parçalamak için spesifik bir substrat kullanılır ve saptanabilir sarı bir bileşik olan p-nitroanilin (pNA) açığa çıkar. Üretilen pNA miktarı, numunedeki elastaz aktivitesini yansıtır ve kolorimetri ile ölçülebilir. Bu tahlil, basitlik, yüksek hassasiyet, hızlı sonuçlar ve çeşitli araştırma ihtiyaçlarına uyarlanabilirlik dahil olmak üzere çeşitli avantajlar sunar. Kolorimetrik elastaz testi, bileşiklerin elastaz aktivitesini nasıl etkilediğini incelemek için değerli bir araç olmaya devam etmektedir. Kullanım kolaylığı ve etkinliği nedeniyle, bu tahlil bu alandaki araştırmaların temel taşıdır.

Giriş

Elastaz, akciğerler, cilt ve kan damarları dahil olmak üzere vücuttaki çeşitli dokulara elastikiyet sağlayan bir protein olan elastinin parçalanmasında çok önemli bir rol oynayan bir serin proteaz enzimidir. Elastaz aktivitesi, doku homeostazını korumak için sıkı bir şekilde düzenlenir ve düzensizlik, amfizem, ateroskleroz ve cilt kırışıklıkları gibi patolojik ve dermal durumlara yol açabilir1.

Her biri belirli özelliklere ve işlevlere sahip birkaç elastaz türü vardır. Nötrofiller tarafından üretilen nötrofil elastazlar, bağışıklık tepkisi ve inflamasyonda önemlidir. Bu enzimler çok çeşitli hücre dışı proteinleri parçalayabilir ve kronik enflamatuar hastalıklarda rol oynar2. Pankreas elastazları ise ince bağırsakta protein sindiriminde rol oynar3. Bu elastazlar arasında ayrım yapmak, farklı hastalıklar için spesifik tedaviler geliştirmek için çok önemlidir.

Sağlıklı elastin seviyeleri ve elastaz aktivitesini düzenleyen yollar, cildin elastikiyetini korumaya ve erken yaşlanmayı önlemeye yardımcı olur. Yaşlanma, UV radyasyonu, iltihaplanma, genetik yatkınlık, çevresel kirleticiler ve beslenme gibi faktörler elastaz4'ün aktivitesini ve bozulmasını önemli ölçüde etkiler. Ortaya çıkan bir ilgi alanı, elastinin elastaz tarafından bozunmasıyla üretilen biyoaktif fragmanlar olan elastokinlerin incelenmesidir. Bu moleküller, diğerlerinin yanı sıra artan inflamasyon, elastik lif kalsifikasyonu ve lipit birikimi dahil olmak üzere önemli biyolojik etkilere neden olabilir5. Elastokinler, elastin bozunması ile ilişkili hastalıkların ilerlemesini etkileyebilir ve yeni terapötik müdahaleler için potansiyel bir hedef sunabilir (Şekil 1).

Doğal olarak oluşan fitokimyasallar gibi bazı bileşikler, elastaz aktivitesini6 modüle etme yetenekleri de dahil olmak üzere potansiyel terapötik ve kozmetik etkileri nedeniyle önemli ölçüde dikkat çekmiştir. Örneğin, elma ve soğanda bulunan bir flavonoid olan quercetin'in, anti-inflamatuar ve yaşlanma karşıtı etkilerine katkıda bulunan elastaz aktivitesini etkili bir şekilde inhibe ettiği gösterilmiştir7. Zerdeçaldaki biyoaktif bileşik olan kurkumin, elastaz inhibisyonu sergileyen, cilt yaşlanmasına ve iltihaplanmaya karşı koruyucu etkiler sunan, iyi çalışılmış bir başka fitokimyasaldır8. Ek olarak, yeşil çaydaki birincil kateşin olan epigallocatechin gallat (EGCG), güçlü elastaz inhibitör aktivite göstermiştir ve bu da onu cilt elastikiyetini korumayı amaçlayan cilt bakım formülasyonları için değerli bir bileşik haline getirir9. Bu örnekler, yeni terapötik ve kozmetik ürünlerin geliştirilmesi için bir temel sağlayan doğal elastaz inhibitörleri olarak fitokimyasalların potansiyelinin altını çizmektedir.

Şu anda, kolorimetrik elastaz testi,elastaz aktivitesini ölçmek için yaygın olarak kullanılan bir yöntemdir 7,10,11,12,13. Bu tahlil, enzimin spesifik bir substrat olan N-süksinil-(Ala)3-nitroanilid (SANA) ile süksinilamino asitlere ve p-nitroaniline (pNA) hidrolize etme yeteneğine dayanır. pNA, bir spektrofotometre kullanılarak 410 nm'de kolayca tespit edilebilen sarı renkli bir kromofordur (Şekil 2). pNA üretim hızı, numune14'teki elastaz aktivitesi ile doğru orantılıdır.

Bu yöntem, çeşitli araştırma alanlarında geniş bir uygulama alanına sahiptir. Bu yöntem sayesinde araştırmacılar, bileşiklerin elastaz aktivitesini modüle etme yeteneğini hızlı bir şekilde belirleyebilir, elastaz inhibitörlerinin etki mekanizmalarını araştırabilir ve bu inhibitörlerin elastaz ile ilgili hastalıkların hücresel ve hayvan modellerinde etkinliğini değerlendirebilir. Ek olarak, tahlil, rekabetçi veya rekabetçi olmayan inhibisyon gibi farklı inhibisyon mekanizmalarını incelemek için kullanılabilir ve doğal veya sentetik bileşiklerin elastaz aktivitesini nasıl modüle ettiği hakkında değerli bilgiler sağlar.

Elastaz aktivite modülasyon testi, elastaz aktivitesini ölçmek için diğer yöntemlere göre çeşitli avantajlar sunar. Basit ve gerçekleştirmesi kolaydır, minimum teknik uzmanlık gerektirir ve standart bir laboratuvar ortamında gerçekleştirilebilir15. Ek olarak, tahlil oldukça hassastır ve elastaz aktivitesindeki küçük değişiklikleri tespit edebilir. Tahlil, verimli veri analizine olanak tanıyan hızlı ve nicel sonuçlar sağlar. Ayrıca, yüksek verimli tarama ve kinetik çalışmalar16 dahil olmak üzere çeşitli formatlara uyarlanabilir.

Bununla birlikte, tahlilin ayrıca düşük substrat özgüllüğü (elastaz için spesifik olduğu için) ve numunedeki renkli bileşikler veya pNA hidrolizi inhibitörleri gibi diğer bileşenlerden kaynaklanan parazitlere karşı duyarlılık gibi çeşitli sınırlamaları vardır. Bu nedenle, araştırmacılar bu sınırlamaları göz önünde bulundurmalı ve elastaz inhibitörlerinin17 etkisinin altında yatan mekanizmaları kapsamlı bir şekilde araştırmak için tamamlayıcı yöntemler kullanmalıdır.

Farklı elastaz alt tiplerinin belirli bir hastalık sürecine spesifik katkılarını incelerken çok önemli olan, çeşitli elastaz izoformlarını tanımlamak ve ayırt etmek için mükemmel bir araç sunan zymography gibi elastaz aktivitesi izleme alternatif yöntemleri vardır. Bununla birlikte, zymografi yarı kantitatif bir tekniktir ve görselleştirme için ek adımlar gerektirir; Bu nedenle, spektrofotometrik yöntemle karşılaştırıldığında, zymografi yüksek verimli analiz için daha az verimlidir18. Florometrik tahliller, spektrofotometrik yönteme daha fazla hassasiyet sunarak daha düşük tespit limitleri sağlar. Bu, elastaz aktivitesinin ve modülatör etkileşimlerinin daha hassas bir analizine izin vererek enzimatik süreçlerin daha eksiksiz bir resmini sağlar19. Bununla birlikte, florometrik testler özel enstrümantasyon gerektirir ve biyolojik numunelerdeki belirli bileşiklerden kaynaklanan parazitlere karşı hassas olabilir. Radyometrik tahliller olağanüstü hassasiyet sağlar, bu da onları çok düşük elastaz aktivitesi seviyelerinin tespiti için ideal hale getirir. Bununla birlikte, radyoaktif malzemelerin kullanımı, lojistik zorluklar ve güvenlik endişeleri oluşturan özel ekipman, sıkı güvenlik protokolleri ve uygun atık bertaraf prosedürleri gerektirir20. İmmünoanalizler çok yönlülükleri ile öne çıkar ve elastaz aktivitesini doğrudan ölçmek veya elastaz inhibitör komplekslerini ölçmek için kullanılabilir, bu da inhibitör etkinliği hakkında bilgi sağlar. Ek olarak, immünolojik testler, SANA yönteminden farklı olarak doku homojenatları gibi karmaşık biyolojik numunelerle çalışacak şekilde uyarlanabilir. Bununla birlikte, immünolojik testlerin geliştirilmesi ve doğrulanması zaman alıcı olabilir ve spesifik antikorlar gerektirebilir, bu da potansiyel olarak daha basit spektrofotometrik yaklaşımlardan daha yüksek maliyetlere yol açabilir21.

Kolorimetrik elastaz aktivite modülasyon testi, herhangi bir bileşiğin elastaz aktivitesini değiştirme yeteneğini araştırmak için değerli bir araçtır. Basitliği, duyarlılığı ve uyarlanabilirliği nedeniyle, yöntem çeşitli araştırma ortamlarında yaygın olarak kullanılmaktadır. Bununla birlikte, araştırmacılar testin sınırlamalarını göz önünde bulundurmalı ve elastaz inhibitörlerinin aktivitesinin altında yatan mekanizmaları kapsamlı bir şekilde belirlemek için tamamlayıcı yöntemler kullanmalıdır.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protokol

Bu çalışma için kullanılan reaktiflerin ve ekipmanın detayları Malzeme Tablosunda listelenmiştir.

1. 0.2 M Tris baz reaksiyon tamponunun (RB) hazırlanması

  1. Analitik bir terazi kullanarak ilgili Tris bazını tartın.
  2. Tris tabanını bir behere aktarın ve dereceli bir silindir kullanarak deiyonize su ekleyin.
  3. Tris tabanı tamamen eriyene kadar çözeltiyi manyetik bir karıştırıcı ile karıştırın.
  4. Damla damla 4 N HCl ekleyerek pH'ı 8.0'a ayarlayın. pH'ı izlemek için bir pH metre kullanın.
  5. İstenilen pH'a ulaşıldığında, çözeltiyi hacimsel bir şişeye aktarın ve istenen hacim işaretine kadar deiyonize su ile doldurun.
  6. Tamponu etiketli bir saklama şişesine aktarın ve kullanana kadar oda sıcaklığında saklayın.

2. Numune hazırlama

  1. Analitik terazi kullanarak gereken miktarda numuneyi doğru şekilde tartın. Bu çalışma için her numuneden 1 mg yeterlidir.
  2. Numuneleri RB içinde istenen konsantrasyona kadar çözün. Farklı numune konsantrasyonları test edilebilir ve 1 mg/mL iyi bir referanstır.
  3. Numunelerin tamamen çözüldüğünden emin olmak için bir girdap karıştırıcı kullanın.
  4. Hazırlanan numuneleri kullanıma hazır olana kadar buz üzerinde saklayın.
    NOT: Numune, absorbans okumalarını engelleyebilecek güçlü bir renklenmeye sahipse, aynı prosedürü izleyerek ancak sonraki adımlarda elastaz enzimi eklemeden renk kontrollerini hazırlayın.

3. Elastaz enziminin hazırlanması

  1. RB'de 10 μg/mL'lik bir nihai konsantrasyonda çalışan bir elastaz çözeltisi hazırlayın. Gerekli stok çözeltisi hacmini hesaplamak için aşağıdaki denklemi kullanın:
    Stok hacmi (μL) = İstenen nihai hacim (μL) x İstenen nihai konsantrasyon (μg/mL)/Stok konsantrasyonu (μg/mL)
  2. Hazırlanan elastaz solüsyonunu kullanıma hazır olana kadar buz üzerinde saklayın.
    NOT: Tedarikçi tarafından sağlanan ve partiler arasında değişebilen enzimin spesifik aktivitesini göz önünde bulundurun. Ayrıca, dondurulduktan sonra enzim aktivitesi azalabilir; Mümkün olduğunda taze çözeltiler hazırlayın.

4. SANA substratının hazırlanması

  1. Uygun miktarda SANA tozunu RB içinde çözerek 0.8 mM SANA çözeltisi hazırlayın. Aşağıdaki denklemi kullanın:
    SANA kütlesi (mg) = İstenen son hacim (μL) × İstenen nihai konsantrasyon (mM) × Molekül ağırlığı (mg/mmol)/1000
  2. Solüsyonu ışıktan koruyun ve kullanana kadar 4 °C'de saklayın.

5. Fenilmetilsülfonil florür (PMSF) stok çözeltisinin hazırlanması

  1. İzopropanol içinde 100 mM'lik bir PMSF stok çözeltisi hazırlayın.
  2. Hazırlanan PMSF çözeltisini kullanıma hazır olana kadar buz üzerinde saklayın.
    NOT: PMSF çözeltisini daha küçük hacimlere (örn. 100 μL) ayırın ve donma-çözülme döngülerini önlemek için -20 °C'de saklayın.

6. Tahlilin ayarlanması

  1. Aşağıdaki çözeltileri mikrosantrifüj tüplerinde üç kopya halinde hazırlayın:
    1. Negatif kontrol: 800 μL RB pipetleyin.
    2. Araç kontrolü: Numuneyi çözmek için kullanılan 600 μL RB ve 200 μL çözücü ekleyin.
    3. Pozitif inhibisyon kontrolü: 24 μL PMSF stok çözeltisi ve 776 μL RB ekleyin.
    4. İzopropanol kontrolü: 24 μL izopropanol ve 776 μL RB ekleyin.
    5. Numuneler: Hazırlanan numune çözeltisinden 200 μL pipetleyin ve 600 μL RB ekleyin.
    6. Renk kontrolleri (gerekirse): 200 μL numune solüsyonunu pipetleyin ve 800 μL RB ekleyin.
  2. Renk kontrolleri dışında her tüpe 100 μL elastaz solüsyonu (10 μg/mL) ekleyin.
  3. Tüm tüpleri oda sıcaklığında 20 dakika inkübe edin.
  4. Renk kontrolleri dışında her tüpe 100 μL SANA substrat çözeltisi (0,8 mM) ekleyin.
  5. Tüpleri birkaç kez hafifçe ters çevirerek çözeltileri iyice karıştırın. Her tüpten 300 μL'yi 96 oyuklu bir plakaya aktarın ve her numune için üç parçalı ölçümler sağlayın.
  6. 96 oyuklu plakayı 410 nm'ye ayarlanmış bir mikroplaka okuyucuya yerleştirin. Absorbansı periyodik olarak, her dakika, 20 dakika boyunca veya sinyal stabilize olana kadar ölçün. Okuyucuyu oda sıcaklığında ölçüm yapacak şekilde ayarlayın.
    NOT: Plaka okuyucu kinetik ölçümleri destekliyorsa, ayarlanan aralıklarla otomatik olarak okuma yapacak şekilde programlayın. Aksi takdirde, istenen zaman noktalarında absorbasyonu manuel olarak kaydedin.

7. Veri analizi

  1. Pozitif inhibisyon kontrolünü (PMSF) %100 inhibisyon ve negatif kontrolü (yalnızca RB) %0 inhibisyon olarak ayarlayarak sonuçları normalleştirin.
  2. Aşağıdaki formülü kullanarak her numune için inhibisyon yüzdesini hesaplayın:
    % İnhibisyon = 100 - [(Numune absorbansı - Araç kontrol absorbansı - Renk kontrol absorbansı)/(Negatif kontrol absorbansı - Pozitif kontrol absorbansı - İzopropanol kontrol absorbansı)] × 100
  3. İnhibitör etkiyi görselleştirmek için numune konsantrasyonuna karşı her numune konsantrasyonu için inhibisyon yüzdelerini çizmek için grafik yazılımı kullanın.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Sonuçlar

Protokol tamamlandıktan sonra, ilgili hesaplamaları gerçekleştirmek ve numunelerin elastaz aktivitesini modüle etme kapasitesini ölçmek için gerekli absorbans verileri elde edilebilir. Şekil 3 , farklı kontroller ve numunelerle kuyuların konumunu vurgulamaktadır. Bu örnekte kullanılanlar gibi renkli numuneler söz konusu olduğunda, renk, 410 nm'de pNA'nın sarı renginin ölçümünü engelleyebileceğinden, spektrofotometrik paraziti en aza i...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Mevcut yöntemde, fitokimyasalların elastaz enzimleri üzerindeki modülatör etkileri kolorimetrik bir test kullanılarak incelenmiştir. Elastin yıkımı için çok önemli olan bir serin proteaz olan elastaz, çeşitli organlarda doku elastikiyetinin korunmasında önemli bir rol oynar. Bu çalışmada açıklanan kolorimetrik elastaz testi, elastaz aktivitesini ölçmek için basit, hassas ve hızlı bir yöntem sunar.

Bu bağlamda araştırmacılar, ela...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Açıklamalar

Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir.

Teşekkürler

Bu araştırma İspanya Bilim ve Yenilik Bakanlığı (MCIN/AEI/10.13039/501100011033/FEDER, UE; projeler: RTI2018-096724-B-C21, TED2021-129932B-C21 ve PID2021-125188OB-C32) ve Generalitat Valenciana (PROMETEO/2021/059) tarafından finanse edilmiştir. Bu çalışma aynı zamanda İspanyol Hükümeti Biyomedikal Araştırma Resmi Fon Ajansı, Sağlık Enstitüsü Carlos III (ISCIII) tarafından CIBEROBN (CB12/03/30038), Agencia Valenciana de la Innovación: INNEST/2022/103; Avrupa Bölgesel Kalkınma Fonu tarafından ortaklaşa finanse edilmektedir. E.B.-C ve M.H.-L. 2021/2023 hibesi için İspanyol Üniversite Sisteminin Yeniden Yeterliliği ile desteklenmiştir. F.J.Á.-M. 2021/2023 genç doktorların eğitimi için Margarita Salas Hibeleri tarafından desteklenmiştir. Bu protokolün geliştirilmesinde paha biçilmez destekleri olan idari ve teknik destek personeline en içten şükranlarımızı sunarız.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
96 Well Cell Culture PlateCorning Incorporated3599Flat bottom with lid, polystyrene
Cell Imaging Multimode ReaderAgilentBioTek Cytation 1Used with Gen5 software
Elastase From Porcine PancreasSigma-AldrichE7885CAS 39445-21-1; 25,9 kDa
Isopropanol 99.5%Fisher ScientificAC184130010CAS 67-63-0; C3H8O; 60.10 g/mol
N-Succinil-(Ala)3-nitroanilideSigma-AldrichS4760CAS 52299-14-6; C19H25N5O8 ; 451.43 g/mol
pH MeterHach LangesensION+ PH31With magnetic stirrer and sensor holder
Phenylmethanesulfonyl FluorideSigma-AldrichP7626CAS 329-98-6; C7H7FO2S; 174,19 g/mol
Tris For Molecular BiologyPanReac AppliChemA2264CAS 77-86-1; C4H11NO3; 121,14 g/mol

Referanslar

  1. Imokawa, G., Ishida, K. Biological mechanisms underlying the ultraviolet radiation-induced formation of skin wrinkling and sagging I: Reduced skin elasticity, highly associated with enhanced dermal elastase activity, triggers wrinkling and sagging. Int J Mol Sci. 16 (4), 7753-7775 (2015).
  2. Voynow, J. A., Shinbashi, M. Neutrophil elastase and chronic lung disease. Biomolecules. 11 (8), 11081065(2021).
  3. Whitcomb, D. C., Lowe, M. E. Human pancreatic digestive enzymes. Dig Dis Sci. 52 (1), 1-17 (2007).
  4. Heinz, A. Elastic fibers during aging and disease. Ageing Res Rev. 66, 101255(2021).
  5. Antonicelli, F., Bellon, G., Debelle, L., Hornebeck, W. Elastin-elastases and inflamm-aging. Curr Top Dev Biol. 79, 99-155 (2007).
  6. Desmiaty, Y., Faizatun, F., Noviani, Y., Ratih, H., Ambarwati, N. S. S. Potential of natural products in inhibiting premature skin aging. Int J Appl Pharm. 14 (Special Issue 3), 1-5 (2022).
  7. Bhatiya, M., Pathak, S., Jothimani, G., Duttaroy, A. K., Banerjee, A. A comprehensive study on the anti-cancer effects of quercetin and its epigenetic modifications in arresting progression of colon cancer cell proliferation. Arch Immunol Ther Exp (Warsz). 71 (1), 6(2023).
  8. Shen, D., et al. Computational analysis of curcumin-mediated alleviation of inflammation in periodontitis patients with experimental validation in mice. J Clin Periodontol. 51 (6), 787-799 (2024).
  9. Yücel, Ç, Karatoprak, G. Ş, Yalçıntaş, S., Böncü, T. E. Ethosomal (−)-epigallocatechin-3-gallate as a novel approach to enhance antioxidant, anti-collagenase and anti-elastase effects. Beilstein J Nanotechnol. 13, 491-502 (2022).
  10. Wojtkiewicz, A. M., Oleksy, G., Malinowska, M. A., Janeczko, T. Enzymatic synthesis of a skin active ingredient - glochidone by 3-ketosteroid dehydrogenase from Sterolibacterium denitrificans. J Steroid Biochem Mol Biol. 241, 106513(2024).
  11. Amnuaykan, P., Juntrapirom, S., Kanjanakawinkul, W., Chaiyana, W. Enhanced antioxidant, anti-aging, anti-tyrosinase, and anti-inflammatory properties of Vanda coerulea griff. ex lindl. protocorm through elicitations with chitosan. Plants. 13 (13), 13131770(2024).
  12. Petcharaporn, K., Thongkao, K., Thongmuang, P., Sudjaroen, Y. Nutritional composition, capsaicin content and enzyme inhibitory activities from "Bang Chang" thai cultivar chili pepper (capsicum annuum var. acuminatum) after drying process. Int J Pharm Qual Assur. 14 (3), 707-711 (2023).
  13. Jeon, D. H., et al. Antioxidant activity and inhibitory effects of whitening and wrinkle-related enzymes of Polyozellus multiplex extracts. J Food Meas Charact. 17 (2), 1279-1288 (2023).
  14. Putri, I. R., Handayani, R., Elya, B. Anti-elastase activity of rumput teki (Cyperus rotundus L.) rhizome extract. Pharmacogn J. 11 (4), 754-758 (2019).
  15. Liyanaarachchi, G. D., Samarasekera, J. K. R. R., Mahanama, K. R. R., Hemalal, K. D. P. Tyrosinase, elastase, hyaluronidase, inhibitory and antioxidant activity of Sri Lankan medicinal plants for novel cosmeceuticals. Ind Crops Prod. 111, 597-605 (2018).
  16. Apraj, V. D., Pandita, N. S. Evaluation of skin anti-aging potential of Citrus reticulata blanco peel. Pharmacogn Res. 8 (3), 160-168 (2016).
  17. Pandey, B. P., Pradhan, S. P., Adhikari, K., Nepal, S. Bergenia pacumbis from Nepal, an astonishing enzymes inhibitor. BMC Complement Med Ther. 20 (1), 198(2020).
  18. Dharwal, V., Sandhir, R., Naura, A. S. PARP-1 inhibition provides protection against elastase-induced emphysema by mitigating the expression of matrix metalloproteinases. Mol Cell Biochem. 457 (1-2), 41-49 (2019).
  19. Jugniot, N., Voisin, P., Bentaher, A., Mellet, P. Neutrophil elastase activity imaging: Recent approaches in the design and applications of activity-based probes and substrate-based probes. Contrast Media Mol Imaging. 2019, (2019).
  20. Stone, P. J., Morris, S. M., Thomas, K. M., Schuhwerk, K., Mitchelson, A. Repair of elastase-digested elastic fibers in acellular matrices by replating with neonatal rat-lung lipid interstitial fibroblasts or other elastogenic cell types. Am J Respir Cell Mol Biol. 17 (3), 289-301 (1997).
  21. Weiss, F. U., Budde, C., Lerch, M. M. Specificity of a polyclonal fecal elastase ELISA for CELA3. PLoS ONE. 11 (7), 0159363(2016).
  22. Thring, T. S. A., Hili, P., Naughton, D. P. Anti-collagenase, anti-elastase and anti-oxidant activities of extracts from 21 plants. BMC Complement Altern Med. 9 (1), 27(2009).
  23. Donà, M., et al. Neutrophil restraint by green tea: Inhibition of inflammation, associated angiogenesis, and pulmonary fibrosis 1. J Immunol. 170, 4335-4341 (2003).
  24. Michailidis, D., Angelis, A., Nikolaou, P. E., Mitakou, S., Skaltsounis, A. L. Exploitation of vitis vinifera, foeniculum vulgare, cannabis sativa and punica granatum by-product seeds as dermo-cosmetic agents. Molecules. 26 (3), 26030731(2021).
  25. Suzuki, M., et al. Curcumin attenuates elastase- and cigarette smoke-induced pulmonary emphysema in mice. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 296 (4), L614-L623 (2009).
  26. Brás, N. F., et al. Inhibition of pancreatic elastase by polyphenolic compounds. J Agric Food Chem. 58 (19), 10668-10676 (2010).
  27. Álvarez-Martínez, F. J., Díaz-Puertas, R., Barrajón-Catalán, E., Micol, V. Plant-derived natural products for the treatment of bacterial infections. Handbook of Experimental Pharmacology. , (2024).
  28. Álvarez-Martínez, F. J., Barrajón-Catalán, E., Herranz-López, M., Micol, V. Antibacterial plant compounds, extracts and essential oils: An updated review on their effects and putative mechanisms of action. Phytomedicine. 90, 153626(2021).
  29. Saganuwan, S. A. Application of modified Michaelis-Menten equations for determination of enzyme inducing and inhibiting drugs. BMC Pharmacol Toxicol. 22 (1), 57(2021).
  30. AlShaikh-Mubarak, G. A., Kotb, E., Alabdalall, A. H., Aldayel, M. F. A survey of elastase-producing bacteria and characteristics of the most potent producer, Priestia megaterium gasm32. PLoS ONE. 18, 0282963(2023).
  31. Sánchez-Moreiras, A. M., Reigosa, M. J. Advances in plant ecophysiology techniques. Adv Plant Ecophysiol Tech. , Springer International Publishing. (2018).
  32. Dharwal, V., Sandhir, R., Naura, A. S. PARP-1 inhibition provides protection against elastase-induced emphysema by mitigating the expression of matrix metalloproteinases. Mol Cell Biochem. 457 (1-2), 41-49 (2019).
  33. Zhang, X., et al. Engineering molecular probes for in vivo near-infrared fluorescence/photoacoustic duplex imaging of human neutrophil elastase. Anal Chem. 94 (7), 3227-3234 (2022).
  34. Ahn, C. M., Sandler, H., Saldeen, T. Decreased lung hyaluronan in a model of ARDS in the rat: Effect of an inhibitor of leukocyte elastase. Ups J Med Sci. 117 (1), 1-9 (2012).
  35. Vanga, R. R., Tansel, A., Sidiq, S., El-Serag, H. B., Othman, M. O. Diagnostic performance of measurement of fecal elastase-1 in detection of exocrine pancreatic insufficiency: Systematic review and meta-analysis. Clin Gastroenterol Hepatol. 16 (8), 1220-1228 (2018).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

BiyokimyaSay 215

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır