JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Данный протокол описывает разработку колориметрического метода анализа для определения способности соединений ингибировать или активировать эластазную активность.

Аннотация

Эластаза, сериновая протеаза, играет важную роль в деградации эластина. Эластин — это внеклеточный белок, который помогает поддерживать эластичность тканей легких, кожи и кровеносных сосудов. Жесткая регуляция активности эластазы имеет решающее значение для тканевого гомеостаза, поскольку нарушение регуляции может способствовать таким патологиям, как эмфизема, морщины и атеросклероз. Некоторые соединения, такие как фитохимические вещества природного происхождения, продемонстрировали потенциал для терапевтического вмешательства и вызвали значительный интерес. Выяснение модулирующих эффектов различных соединений на эластазу, будь то ингибиторные или стимулирующие, имеет решающее значение для разработки новых терапевтических и косметических стратегий, направленных на эластаза-ассоциированные расстройства. Широко распространенным методом измерения активности эластазы является колориметрический анализ эластазы. В этом анализе специфический субстрат используется для расщепления эластазы, высвобождая обнаруживаемое желтое соединение,-нитроанилин (pNA). Количество вырабатываемой пНК отражает активность эластазы в образце и может быть измерено с помощью колориметрии. Этот анализ имеет ряд преимуществ, включая простоту, высокую чувствительность, быстрые результаты и адаптируемость к различным исследовательским потребностям. Колориметрический анализ эластазы остается ценным инструментом для изучения того, как соединения влияют на активность эластазы. Благодаря своей простоте использования и эффективности, этот анализ является краеугольным камнем исследований в этой области.

Введение

Эластаза — это фермент сериновой протеазы, который играет решающую роль в расщеплении эластина, белка, обеспечивающего эластичность различным тканям организма, включая легкие, кожу и кровеносные сосуды. Активность эластазы жестко регулируется для поддержания гомеостаза тканей, а нарушение регуляции может привести к патологическим и кожным заболеваниям, таким как эмфизема, атеросклероз и морщины на коже1.

Существует несколько видов эластаз, каждый из которых обладает определенными характеристиками и функциями. Нейтрофильные эластазы, продуцируемые нейтрофилами, играют важную роль в иммунном ответе и воспалении. Эти ферменты могут разрушать широкий спектр внеклеточных белков и участвуют в развитии хронических воспалительныхзаболеваний. Панкреатические эластазы, с другой стороны, играют роль в переваривании белка в тонком кишечнике3. Различие между этими эластазами имеет решающее значение для разработки специфических методов лечения различных заболеваний.

Здоровый уровень эластина и пути, регулирующие активность эластазы, помогают сохранить эластичность кожи и предотвратить преждевременное старение. Такие факторы, как старение, ультрафиолетовое излучение, воспаление, генетическая предрасположенность, загрязнители окружающей среды и питание, значительно влияют на активность и деградацию эластазы4. Новой областью интересов является изучение эластокинов, биологически активных фрагментов, образующихся в результате деградации эластина эластаза. Эти молекулы могут вызывать значительные биологические эффекты, включая усиление воспаления, кальцификацию эластичных волокон и отложение липидов, среди прочего5. Эластокины могут влиять на прогрессирование заболеваний, связанных с деградацией эластина, и представлять собой потенциальную мишень для новых терапевтических вмешательств (Рисунок 1).

Некоторые соединения, такие как фитохимические вещества природного происхождения, привлекли значительное внимание благодаря своим потенциальным терапевтическим и косметическим эффектам, включая их способность модулировать активность эластазы6. Например, было показано, что кверцетин, флавоноид, содержащийся в яблоках и луке, эффективно подавляет активность эластазы, что способствует его противовоспалительному и омолаживающему эффекту7. Куркумин, биологически активное соединение в куркуме, является еще одним хорошо изученным фитохимическим веществом, которое проявляет ингибирование эластазы, обеспечивая защитный эффект против старения кожи и воспаления8. Кроме того, галлат эпигаллокатехина (EGCG), основной катехин в зеленом чае, продемонстрировал мощную ингибиторную активность эластазы, что делает его ценным соединением для составов по уходу за кожей, направленных на сохранение эластичности кожи9. Эти примеры подчеркивают потенциал фитохимических веществ в качестве природных ингибиторов эластазы, обеспечивая основу для разработки новых терапевтических и косметических продуктов.

В настоящее время колориметрический анализ эластазы является широко используемым методом измерения активности эластазы 7,10,11,12,13. Этот анализ основан на способности фермента гидролизовать специфический субстрат, N-сукцинил-(Ala)3-нитроанилид (SANA), до сукциниламиновых кислот и-нитроанилина (pNA). pNA представляет собой хромофор желтого цвета, который можно легко обнаружить на длине волны 410 нм с помощью спектрофотометра (рис. 2). Скорость продукции пНК прямо пропорциональна активности эластазы в образце14.

Этот метод имеет широкий спектр применения в различных областях исследований. С помощью этого метода исследователи могут быстро определить способность соединений модулировать активность эластазы, исследовать механизмы действия ингибиторов эластазы и оценить эффективность этих ингибиторов в клеточных и животных моделях заболеваний, связанных с эластазой. Кроме того, анализ может быть использован для изучения различных механизмов ингибирования, таких как конкурентное или неконкурентное ингибирование, предоставляя ценную информацию о том, как природные или синтетические соединения модулируют активность эластазы.

Анализ модуляции активности эластазы имеет ряд преимуществ по сравнению с другими методами измерения активности эластазы. Он прост и удобен в выполнении, требует минимальных технических знаний и может проводиться в стандартных лабораторныхусловиях15. Кроме того, анализ обладает высокой чувствительностью и может обнаруживать небольшие изменения в активности эластазы. Анализ дает быстрые и количественные результаты, что позволяет эффективно анализировать данные. Кроме того, он может быть адаптирован к различным форматам, включая высокопроизводительный скрининг и кинетические исследования16.

Тем не менее, анализ также имеет несколько ограничений, таких как низкая субстратная специфичность (поскольку он специфичен для эластазы) и восприимчивость к интерференции других компонентов в образце, таких как окрашенные соединения или ингибиторы гидролиза pNA. Таким образом, исследователи должны учитывать эти ограничения и использовать дополнительные методы для всестороннего изучения механизмов, лежащих в основе действия ингибиторов эластазы.

Существуют альтернативные методы мониторинга активности эластазы, такие как зимография, которая предлагает отличный инструмент для идентификации и дифференциации различных изоформ эластазы, что имеет решающее значение при изучении специфического вклада различных подтипов эластазы в конкретный патологический процесс. Тем не менее, зимография является полуколичественным методом и требует дополнительных этапов для визуализации; Таким образом, по сравнению со спектрофотометрическим методом, зимография менее эффективна для высокопроизводительногоанализа18. Флуориметрические анализы обеспечивают повышенную чувствительность к спектрофотометрическому методу, обеспечивая более низкие пределы обнаружения. Это позволяет проводить более чувствительный анализ активности эластазы и модуляторных взаимодействий, обеспечивая более полную картину ферментативных процессов19. Тем не менее, флуориметрические анализы требуют специализированных приборов и могут быть чувствительны к помехам со стороны определенных соединений в биологических образцах. Радиометрические анализы достигают исключительной чувствительности, что делает их идеальными для обнаружения очень низких уровней активности эластазы. Однако использование радиоактивных материалов требует специализированного оборудования, строгих протоколов безопасности и надлежащих процедур захоронения отходов, что создает логистические проблемы и проблемы безопасности20. Иммунологические анализы отличаются своей универсальностью и могут использоваться для прямого измерения активности эластазы или количественного определения комплексов эластаза-ингибитор, что дает представление об эффективности ингибитора. Кроме того, иммунологические анализы могут быть адаптированы для работы со сложными биологическими образцами, такими как тканевые гомогенаты, в отличие от метода SANA. Тем не менее, разработка и валидация иммунологических тестов может занимать много времени и требовать специфических антител, что потенциально может привести к более высоким затратам по сравнению с более простыми спектрофотометрическими подходами.

Анализ модуляции активности колориметрической эластазы является ценным инструментом для исследования способности любого соединения изменять активность эластазы. Благодаря своей простоте, чувствительности и адаптивности, метод широко используется в различных исследовательских условиях. Тем не менее, исследователи должны учитывать ограничения анализа и использовать дополнительные методы для всестороннего определения механизмов, лежащих в основе активности ингибиторов эластазы.

протокол

Подробная информация о реагентах и оборудовании, использованном для этого исследования, приведена в Таблице материалов.

1. Приготовление 0,2 М М трис-основания реакционного буфера (RB)

  1. Взвесьте соответствующее основание Tris с помощью аналитических весов.
  2. Переложите основание Tris в стакан и добавьте деионизированную воду с помощью градуированного цилиндра.
  3. Размешайте раствор магнитной мешалкой до полного растворения основы Триса.
  4. Отрегулируйте pH до 8,0, добавив 4 Н HCl по каплям. Используйте рН-метр для контроля pH.
  5. Как только желаемый pH будет достигнут, переложите раствор в мерную колбу и заполните до нужной отметки объема деионизированной водой.
  6. Переложите буфер в бутылку с маркировкой и храните при комнатной температуре до использования.

2. Подготовка образцов

  1. Точно взвесьте необходимое количество образцов с помощью аналитических весов. Для этого исследования достаточно 1 мг каждого образца.
  2. Растворите образцы в РБ до нужной концентрации. Можно протестировать различные концентрации образцов, при этом хорошим ориентиром является 1 мг/мл.
  3. Используйте вихревой смеситель, чтобы убедиться, что образцы полностью растворены.
  4. Храните подготовленные образцы на льду до готовности к использованию.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Если образец имеет сильную окраску, которая может повлиять на показания абсорбции, подготовьте контроль цвета, следуя той же процедуре, но без добавления фермента эластазы на последующих этапах.

3. Получение фермента эластазы

  1. Готовят рабочий раствор эластазы в РБ в конечной концентрации 10 мкг/мл. Используйте следующее уравнение для расчета необходимого объема исходного раствора:
    Объем запаса (μл) = Желаемый конечный объем (μл) x Желаемая конечная концентрация (μг/мл)/Концентрация запаса (μг/мл)
  2. Приготовленный раствор эластазы храните на льду до готовности к применению.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Учитывайте конкретную активность фермента, предоставленную поставщиком, которая может варьироваться в зависимости от партии. Также после заморозки может снизиться активность ферментов; По возможности готовьте свежие растворы.

4. Подготовка субстрата SANA

  1. Приготовьте 0,8 мМ раствора SANA, растворив соответствующее количество порошка SANA в RB. Используйте следующее уравнение:
    Масса SANA (мг) = Желаемый конечный объем (μл) × Желаемая конечная концентрация (мМ) × Молекулярная масса (мг/ммоль)/1000
  2. Защитите раствор от света и храните его при температуре 4 °C до использования.

5. Приготовление стокового раствора фенилметилсульфонилфторида (PMSF)

  1. Приготовьте 100 мМ стокового раствора PMSF в изопропаноле.
  2. Приготовленный раствор PMSF храните на льду до готовности к применению.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Разбавьте раствор PMSF в меньшие объемы (например, 100 мкл) и храните при температуре -20 °C, чтобы избежать циклов замораживания-оттаивания.

6. Настройка пробы

  1. В микроцентрифужных пробирках готовят следующие растворы в трех экземплярах:
    1. Отрицательный контроль: пипетка 800 мкл RB.
    2. Управление транспортным средством: Добавьте 600 μL RB и 200 μL растворителя, используемого для растворения образца.
    3. Контроль положительного ингибирования: добавьте 24 мкл стокового раствора PMSF и 776 мкл RB.
    4. Контроль изопропанола: добавьте 24 мкл изопропанола и 776 мкл RB.
    5. Образцы: Пипеткой нанесите 200 мкл приготовленного раствора образца и добавьте 600 мкл RB.
    6. Управление цветом (при необходимости): Нанесите пипеткой 200 μL раствора образца и добавьте 800 μL RB.
  2. Добавьте по 100 мкл раствора эластазы (10 мкг/мл) в каждую пробирку, за исключением регуляторов цвета.
  3. Инкубируйте все пробирки при комнатной температуре в течение 20 минут.
  4. Добавьте 100 μL раствора подложки SANA (0,8 мМ) в каждую пробирку, за исключением цветовых регуляторов.
  5. Тщательно перемешайте растворы, аккуратно перевернув трубки несколько раз. Переведите 300 μL из каждой пробирки на 96-луночный планшет, обеспечивая тройные измерения для каждого образца.
  6. Поместите 96-луночный планшет в считыватель микропланшетов, настроенный на 410 нм. Измеряйте поглощение периодически, каждую минуту, в течение 20 минут или до стабилизации сигнала. Установите считыватель на измерение при комнатной температуре.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Если считыватель пластин поддерживает кинетические измерения, запрограммируйте его на автоматическое снятие показаний через заданные интервалы. В противном случае вручную запишите поглощение в нужные моменты времени.

7. Анализ данных

  1. Нормализуйте результаты, установив положительный контроль торможения (PMSF) как 100% ингибирование, а отрицательный контроль (только RB) как 0% ингибирования.
  2. Рассчитайте процент торможения для каждого образца по следующей формуле:
    % ингибирования = 100 - [(Поглощение образца - Поглощение при управлении автомобилем - Поглощение под контролем цвета)/(Отрицательное поглощение под контролем - Положительное поглощение под контролем - Поглощение под контролем изопропанола)] × 100
  3. Используйте программное обеспечение для построения графиков для построения графиков процентного соотношения концентрации каждого образца с концентрацией образца, чтобы визуализировать ингибирующий эффект.

Результаты

После завершения разработки протокола можно получить данные об абсорбции, необходимые для выполнения соответствующих расчетов и количественной оценки способности образцов модулировать активность эластазы. На рисунке 3 показано расположение скважи...

Обсуждение

В настоящем методе модулирующие эффекты фитохимических веществ на ферменты эластазы исследуются с помощью колориметрического анализа. Эластаза, сериновая протеаза, имеющая решающее значение для деградации эластина, играет важную роль в поддержании эластичности тк...

Раскрытие информации

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Благодарности

Это исследование финансировалось Министерством науки и инноваций Испании (MCIN/AEI/10.13039/501100011033/FEDER, UE; проекты: RTI2018-096724-B-C21, TED2021-129932B-C21 и PID2021-125188OB-C32) и Женералитатом Валенсианы (PROMETEO/2021/059). Эта работа также была поддержана Официальным агентством по финансированию биомедицинских исследований правительства Испании, Институтом здравоохранения Карлоса III (ISCIII) через CIBEROBN (CB12/03/30038), Agencia Valenciana de la Innovación: INNEST/2022/103; который софинансируется Европейским фондом регионального развития. Э.Б.-К и М.Х.-Л. были поддержаны грантом Переквалификации Испанской университетской системы на 2021/2023 год. Ф.Ж.Б.-М. был поддержан грантами Маргариты Салас на обучение молодых врачей 2021/2023. Мы хотели бы выразить сердечную благодарность административному и техническому вспомогательному персоналу, чья непоколебимая помощь была неоценима в разработке этого протокола.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
96 Well Cell Culture PlateCorning Incorporated3599Flat bottom with lid, polystyrene
Cell Imaging Multimode ReaderAgilentBioTek Cytation 1Used with Gen5 software
Elastase From Porcine PancreasSigma-AldrichE7885CAS 39445-21-1; 25,9 kDa
Isopropanol 99.5%Fisher ScientificAC184130010CAS 67-63-0; C3H8O; 60.10 g/mol
N-Succinil-(Ala)3-nitroanilideSigma-AldrichS4760CAS 52299-14-6; C19H25N5O8 ; 451.43 g/mol
pH MeterHach LangesensION+ PH31With magnetic stirrer and sensor holder
Phenylmethanesulfonyl FluorideSigma-AldrichP7626CAS 329-98-6; C7H7FO2S; 174,19 g/mol
Tris For Molecular BiologyPanReac AppliChemA2264CAS 77-86-1; C4H11NO3; 121,14 g/mol

Ссылки

  1. Imokawa, G., Ishida, K. Biological mechanisms underlying the ultraviolet radiation-induced formation of skin wrinkling and sagging I: Reduced skin elasticity, highly associated with enhanced dermal elastase activity, triggers wrinkling and sagging. Int J Mol Sci. 16 (4), 7753-7775 (2015).
  2. Voynow, J. A., Shinbashi, M. Neutrophil elastase and chronic lung disease. Biomolecules. 11 (8), 11081065 (2021).
  3. Whitcomb, D. C., Lowe, M. E. Human pancreatic digestive enzymes. Dig Dis Sci. 52 (1), 1-17 (2007).
  4. Heinz, A. Elastic fibers during aging and disease. Ageing Res Rev. 66, 101255 (2021).
  5. Antonicelli, F., Bellon, G., Debelle, L., Hornebeck, W. Elastin-elastases and inflamm-aging. Curr Top Dev Biol. 79, 99-155 (2007).
  6. Desmiaty, Y., Faizatun, F., Noviani, Y., Ratih, H., Ambarwati, N. S. S. Potential of natural products in inhibiting premature skin aging. Int J Appl Pharm. 14 (Special Issue 3), 1-5 (2022).
  7. Bhatiya, M., Pathak, S., Jothimani, G., Duttaroy, A. K., Banerjee, A. A comprehensive study on the anti-cancer effects of quercetin and its epigenetic modifications in arresting progression of colon cancer cell proliferation. Arch Immunol Ther Exp (Warsz). 71 (1), 6 (2023).
  8. Shen, D., et al. Computational analysis of curcumin-mediated alleviation of inflammation in periodontitis patients with experimental validation in mice. J Clin Periodontol. 51 (6), 787-799 (2024).
  9. Yücel, &. #. 1. 9. 9. ;., Karatoprak, G. &. #. 3. 5. 0. ;., Yalçıntaş, S., Böncü, T. E. Ethosomal (−)-epigallocatechin-3-gallate as a novel approach to enhance antioxidant, anti-collagenase and anti-elastase effects. Beilstein J Nanotechnol. 13, 491-502 (2022).
  10. Wojtkiewicz, A. M., Oleksy, G., Malinowska, M. A., Janeczko, T. Enzymatic synthesis of a skin active ingredient - glochidone by 3-ketosteroid dehydrogenase from Sterolibacterium denitrificans. J Steroid Biochem Mol Biol. 241, 106513 (2024).
  11. Amnuaykan, P., Juntrapirom, S., Kanjanakawinkul, W., Chaiyana, W. Enhanced antioxidant, anti-aging, anti-tyrosinase, and anti-inflammatory properties of Vanda coerulea griff. ex lindl. protocorm through elicitations with chitosan. Plants. 13 (13), 13131770 (2024).
  12. Petcharaporn, K., Thongkao, K., Thongmuang, P., Sudjaroen, Y. Nutritional composition, capsaicin content and enzyme inhibitory activities from "Bang Chang" thai cultivar chili pepper (capsicum annuum var. acuminatum) after drying process. Int J Pharm Qual Assur. 14 (3), 707-711 (2023).
  13. Jeon, D. H., et al. Antioxidant activity and inhibitory effects of whitening and wrinkle-related enzymes of Polyozellus multiplex extracts. J Food Meas Charact. 17 (2), 1279-1288 (2023).
  14. Putri, I. R., Handayani, R., Elya, B. Anti-elastase activity of rumput teki (Cyperus rotundus L.) rhizome extract. Pharmacogn J. 11 (4), 754-758 (2019).
  15. Liyanaarachchi, G. D., Samarasekera, J. K. R. R., Mahanama, K. R. R., Hemalal, K. D. P. Tyrosinase, elastase, hyaluronidase, inhibitory and antioxidant activity of Sri Lankan medicinal plants for novel cosmeceuticals. Ind Crops Prod. 111, 597-605 (2018).
  16. Apraj, V. D., Pandita, N. S. Evaluation of skin anti-aging potential of Citrus reticulata blanco peel. Pharmacogn Res. 8 (3), 160-168 (2016).
  17. Pandey, B. P., Pradhan, S. P., Adhikari, K., Nepal, S. Bergenia pacumbis from Nepal, an astonishing enzymes inhibitor. BMC Complement Med Ther. 20 (1), 198 (2020).
  18. Dharwal, V., Sandhir, R., Naura, A. S. PARP-1 inhibition provides protection against elastase-induced emphysema by mitigating the expression of matrix metalloproteinases. Mol Cell Biochem. 457 (1-2), 41-49 (2019).
  19. Jugniot, N., Voisin, P., Bentaher, A., Mellet, P. Neutrophil elastase activity imaging: Recent approaches in the design and applications of activity-based probes and substrate-based probes. Contrast Media Mol Imaging. 2019, (2019).
  20. Stone, P. J., Morris, S. M., Thomas, K. M., Schuhwerk, K., Mitchelson, A. Repair of elastase-digested elastic fibers in acellular matrices by replating with neonatal rat-lung lipid interstitial fibroblasts or other elastogenic cell types. Am J Respir Cell Mol Biol. 17 (3), 289-301 (1997).
  21. Weiss, F. U., Budde, C., Lerch, M. M. Specificity of a polyclonal fecal elastase ELISA for CELA3. PLoS ONE. 11 (7), 0159363 (2016).
  22. Thring, T. S. A., Hili, P., Naughton, D. P. Anti-collagenase, anti-elastase and anti-oxidant activities of extracts from 21 plants. BMC Complement Altern Med. 9 (1), 27 (2009).
  23. Donà, M., et al. Neutrophil restraint by green tea: Inhibition of inflammation, associated angiogenesis, and pulmonary fibrosis 1. J Immunol. 170, 4335-4341 (2003).
  24. Michailidis, D., Angelis, A., Nikolaou, P. E., Mitakou, S., Skaltsounis, A. L. Exploitation of vitis vinifera, foeniculum vulgare, cannabis sativa and punica granatum by-product seeds as dermo-cosmetic agents. Molecules. 26 (3), 26030731 (2021).
  25. Suzuki, M., et al. Curcumin attenuates elastase- and cigarette smoke-induced pulmonary emphysema in mice. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 296 (4), L614-L623 (2009).
  26. Brás, N. F., et al. Inhibition of pancreatic elastase by polyphenolic compounds. J Agric Food Chem. 58 (19), 10668-10676 (2010).
  27. Álvarez-Martínez, F. J., Díaz-Puertas, R., Barrajón-Catalán, E., Micol, V. Plant-derived natural products for the treatment of bacterial infections. Handbook of Experimental Pharmacology. , (2024).
  28. Álvarez-Martínez, F. J., Barrajón-Catalán, E., Herranz-López, M., Micol, V. Antibacterial plant compounds, extracts and essential oils: An updated review on their effects and putative mechanisms of action. Phytomedicine. 90, 153626 (2021).
  29. Saganuwan, S. A. Application of modified Michaelis-Menten equations for determination of enzyme inducing and inhibiting drugs. BMC Pharmacol Toxicol. 22 (1), 57 (2021).
  30. AlShaikh-Mubarak, G. A., Kotb, E., Alabdalall, A. H., Aldayel, M. F. A survey of elastase-producing bacteria and characteristics of the most potent producer, Priestia megaterium gasm32. PLoS ONE. 18, 0282963 (2023).
  31. Sánchez-Moreiras, A. M., Reigosa, M. J. Advances in plant ecophysiology techniques. Adv Plant Ecophysiol Tech. , (2018).
  32. Dharwal, V., Sandhir, R., Naura, A. S. PARP-1 inhibition provides protection against elastase-induced emphysema by mitigating the expression of matrix metalloproteinases. Mol Cell Biochem. 457 (1-2), 41-49 (2019).
  33. Zhang, X., et al. Engineering molecular probes for in vivo near-infrared fluorescence/photoacoustic duplex imaging of human neutrophil elastase. Anal Chem. 94 (7), 3227-3234 (2022).
  34. Ahn, C. M., Sandler, H., Saldeen, T. Decreased lung hyaluronan in a model of ARDS in the rat: Effect of an inhibitor of leukocyte elastase. Ups J Med Sci. 117 (1), 1-9 (2012).
  35. Vanga, R. R., Tansel, A., Sidiq, S., El-Serag, H. B., Othman, M. O. Diagnostic performance of measurement of fecal elastase-1 in detection of exocrine pancreatic insufficiency: Systematic review and meta-analysis. Clin Gastroenterol Hepatol. 16 (8), 1220-1228 (2018).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

215

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены