Bu çalışma, Deutsche Forschungsgemeinschaft (KD ve RW WE849/16 1 / 2) tarafından desteklenmiştir. Biz ışık uyarımı yazılım QDS Thomas Euler (Töbingen Almanya) teşekkür ediyoruz.

Aşağıdaki açıklama, deneyci, retina yapısı, patch-kelepçe kayıt, ve iki-foton mikroskopi temel bir anlayış olduğunu varsayar. Patch-kelepçe kurulum ve iki foton görüntüleme sistemi kurmak ve işletmek konusunda yararlı bilgiler için refs [7-12]. 1. Hayvan ve doku hazırlama <ol><li> Fare, en az 3 saat süreyle karanlığa uyumlu tutun Bu arada, carbogen ile gazla oluşan ekstrasellüler çözüm 1-2 l (mM) 125 NaCl, 2.5 KCl, 1 CaCl 2, 1.6 MgCl 2, 25 NaHCO 3, 10 D-glukoz hazırlamak ve pH 7.4 &#39;e dengelenmesi oda sıcaklığında (% 5 O 2 CO 2). </li> bir <li> CO 2 doz aşımı servikal dislokasyon ile hava geçirmez bir odasında fare Euthanize. Bu prosedür ve aşağıdaki adımları karanlıkta yapılmalıdır. Uzun dalga boyu loş aydınlatma (690 nm-longpas soğuk ışık kaynağı kısa dalga boylarında blok kullanın.hayvanın gözleri koyu (fareler sadece ışık tayfının kırmızı bölümüne kötü bir vizyona sahip) adapte tutarak filtre) kişisel vizyonu desteklemek için. Zifiri karanlığa kullanımı (&gt; 800 nm) kızılötesi aydınlatma çalışmaları ve gece görüş gözlüğü kullanınız. </li><li> Kavisli iris makası çifti ve ekstrasellüler çözüm diseksiyon mikroskobu altında yerleştirilen bir tabak aktarabilirsiniz aydınlatmak gözler. </li><li> Kornea ve bir çift yaylı makas (ilk delmek için kesim için bir başlangıç ​​noktası bir neşter kullanmak) ora serrata (retina ve siliyer cisim arasındaki sınır) birlikte göz ampul açarak siliyer cisim çıkarın. Lens ve retina pigment epiteli dikkatle ayırın. Retinanın yönünü incelemek için önemli ise, Ref gibi göstermektedir [12]. Kes retina pigment epiteli arasında optik sinir ve retina Göz yuvası kaldırmak. Retina yüzeylerin yönde Not: kıvrılmış retinanın iç Gangliyon pil tarafı; dış fotoreseptör tarafı. </li><li> Vitreus iç retina yüzeyinde bir kürdan yardımı ile yavaşça çekerek çıkarın. Bu amaçla, sadece retinanın küçük bir hacim kaplayan ekstrasellüler çözüm kullanın. Vitreus kürdan sopa ve retina kapalı savurma sürüklenebilir. Sonra, doku düzleştirme kolaylaştırmak için retina çevresince kısa kesiler geçerlidir. </li><li> Cam taban üzerine yaymak (biz ince bir fırça kullanın), paslanmaz çelik bir naylon sinirli çerçeve ile hareketsiz, kayıt odasının aşağı fotoreseptör tarafı retina aktarın. Aynı şekilde ikinci retina hazırlayın ve daha sonra kullanmak için carboxygenated ekstrasellüler çözüm koyu adapte tutmak. </li></ol> 2. Kayıtlar <ol><li> Dik bir lazer tarama mikroskop altında karanlıkta kayıt odası yükleyin ve (sürekli retina hazırlık superfuse en az 5 ml / micarboxygenated ekstrasellüler çözüm n) 35 ° C&#39;ye kadar ısıtılır Mikroskop (bir kızılötesi hassas CCD kamera ile donatılmıştır) elektronik koruma için bir Faraday kafesi içinde bir şok emici hava tablo yer almaktadır. Kafes, karanlıkta hazırlık tutmak için şeffaf olmayan bir perde ile kaplayın. Ayrıca, bilgisayar monitörleri ışık kapalı kırmızı şeffaf film ekran. </li><li> Mod-kilitli duruma geçiş, GFP ifade hücreleri görselleştirmek için iki foton uyarma, kızılötesi lazer 850-870 nm ya da daha uzun dalga boylarında ayarlayın. Floresan hücre net olarak tanınması için yeterli bir derece için lazer tarama yazılımı tarafından kontrol nötral yoğunluk filtreleri kullanarak lazer çıktı zayıflatır. </li><li> Oluşan hücre içi çözüm (mM) 125 K-glukonat, 10 KCl, 0.5 EGT dolu akım kelepçe modunu kullanmak cam mikropipetler yama klemp kayıtları (borosilikat cam tüp 1,5 mm dış çapında ve 0,225 mm et kalınlığı)KOH (M yaklaşık 5 pipet direnç veren) ile pH 7.4 &#39;e titre, 10 Hepes. Voltaj-klemp kayıt gibi diğer deneysel koşullar altında, farklı bir çözüm gerektirdiğini unutmayın. Boya enjeksiyonları istenirse, floresan bir prob (10 mM Alexa Fluor 594) veya bir izleme molekülü (3% Neurobiotin) ekleyin. Mikropipet yuvaya yerleştirin ve referans elektrot (klorlu gümüş tel) kayıt odasında ekstraselüler çözümü ile temas halinde olduğundan emin olun. </li><li> Mikropipet basınç uygulayın ve hedef GFP-eksprese eden hücre (40 kat su altında kalacak hedefi, NA 1.25). Amacrine hücre gövdeleri iç nükleer tabakanın proksimal parçası (hazırlık içinde yaklaşık 55-75 mikron derin) ganglion hücre tabakası (doğrudan retinanın yönde yüzeyinin altında) hem de bulunmaktadır. Hedeflenen hücre, iç limitan membran (glial endfeet yapılmış bir kılıf) ile retina mikropipet temasa geçmeden önceyüzeyine nüfuz olmak zorundadır. Başarılı penetrasyon mikropipet ucundan dışarı sürülür ve IR CCD kamera tarafından yakalanan bir kızılötesi görüntü görülebilir olarak altta yatan retina dokusunun iç sınırlayıcı zarı ayırır intrasellüler çözümü ile tanınır. </li><li> IR CCD kamera kayıt mikropipet konumunu gösteren resim ile iki foton görüntü soma pozisyonu karşılaştırarak istediğiniz hücreye Yaklaşım. GFP-eksprese eden hücre mikropipet doğru yönlendirmek için kızılötesi görüntü kabul etmek gerekir, çünkü bu adımı kolayca elde olmadığına dikkat edin ve biraz pratik gerektirir. Doğru hedefleme mikropipet ucu iki foton görüntü görülebilir hücre yüzeyinin dimpling neden olduğunda elde edilir. Bu yönteme alternatif olarak, iki foton görüntü mikropipet konumunu ortaya çıkarmak için intrasellüler çözüm floresan boya kullanın (örneğin, Alexa Fluor 594, 100 mcM). İki foton kızılötesi uyarım bu boya mikropipet ayırt yapmak için yeterli floresan sağlar. Bu amaçla, lazer tarama yazılımı kırmızı floresan de kapsayacak şekilde algılama aralığı ayarlayın. </li><li> Mikropipet baskısı bırakın ve akım kelepçe modunda bir bütün hücre patch-klemp yapılandırma almak. Kullanılabilir bir kayıt, bir zar potansiyeli -50 ile -55 mV ve en azından 20 dakika için son vermelidir. </li><li> Bir bilgisayar monitörü stimülasyon yazılım (QDS: Thomas Euler, Tübingen Üniversitesi, Almanya) 11 tarafından oluşturulan Mevcut görsel uyaranlara . Stimülasyon kaydedilen hücre merkezli mekansal konumunu ayarlayın: IR CCD kamera ve merkezi bir nokta gibi uyaran üzerine iletim görüntü gösteren monitör hücre pozisyonunu işaretleyin. Işın yoluna nötral yoğunluk filtreleri takarak uyaran yoğunluğunu ayarlayın. Ref [14] monitör spektrum ve yoğunluk kalibrasyonu için bkz. Prolonge seçind interstimulus aralığı (örneğin 15 s) uyum önlemek için. Uyaran zamanlama kaydını tutmak için bir ışın yolu içinde fotodiyot ekleyin. </li><li> Stimülasyon protokolü başlatın ve hafif yanıtları (5 kHz-spike olmayan hücreler için filtreleme ile 10 kHz örnekleme oranı kullanır; başak kayıt için 20 kHz gibi yüksek bir örnekleme oranı tavsiye edilir) kayıt. Kayıt yazılımı tetiklemek için ışık uyarımı yazılımı kullanın. </li><li> Boya için dolgu hücre mikropipet dikkatle geri çekilmeden önce, 30-45 dakika süreyle kayıtlı hücreye floresan ajan diffüz izin. Hücre gövdesinden dışarı çekmeye özen gösterin. Floresan olmayan tracer Neurobiotin kullanılmış olsaydı, bir fluorofor konjuge streptavidin (4 gece boyunca streptavidin Cy3, 1:400 ° C bağlanarak görselleştirme ihtiyaçlarını retina paraformaldehid fiksasyon 20 dakika sonra, boya-kaplin çalışmaları streptavidin inkübasyon) 3 d uzatılabilir. Alternatif olarak, enjeksiyonlar da yapılabilir.boya kazığa hücre (0,25-1 nA, 100 ms aralığı 100 ms, toplam süre 3-6 dk dikdörtgen darbeler) iontophoretically tahrik keskin elektrot (M 100). </li></ol> 3. Temsilcisi Sonuçlar: Aşağıdaki sonuçlar bir fare üzerinde yapılan bir çalışmada tirozin hidroksilaz 13,14, katekolamin sentezini adım (: GFP fare TH) hız sınırlama katalize enzim organizatörü altında yeşil floresan proteini (GFP) ifade kaynaklanan. GFP sinyal iki farklı hücre popülasyonlarının parlaklık dayanarak ayırt edilebilir (Şekil 2A). Yüksek GFP düzeyde eksprese eden hücrelerin (GCL, Şekil 2B), iç nükleer tabaka (INL, Şekil 2A) bulunan ya da ganglion hücre tabakası yerinden hücre bedenlere sahip ve iç pleksiform tabakasının ortasında tabakalandırmak (IPL, Şekil 2C) . Tip 2 hücreler 14-16 olarak tespit edildi ve morfolojisi açısından sistematik olarak incelenmiştir (Şekil 3) ve seçme olabilirrical aktivite (Şekil 4), nüfus yoğunluğu 250 hücre / mm 2 miktarda bile. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3457/3457fig1.jpg" /> Şekil 1. Deney düzeneği şematik. İki foton uyarma (kırmızı noktalı ışık yolu) fluorofor ifade sağlam retina hücre görsel bir mikropipet (yeşil emisyon ışık yolu) hedeflemektedir. Retinanın, mikroskop (sarı ışık yolu) kondansatör aracılığıyla yansıtılan optik uyaranlara maruz kalır ve hücresel ışığı yanıtları kaydedildi. <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3457/3457fig2.jpg" /> Şekil 2. GFP ifade TH bir retina flatmount hücreleri: GFP fare. Zayıf floresan (A, ok) gösteren INL bulunan tip 1 hücrelerinin (DA hücreleri) ve yoğun etiketli tip 2 hücreleri iki nüfus GFP sinyal parlaklık tarafından ayırt edilebilir.INL (A, oklara bakın) veya GCL (B) ve IPL stratum S3 (C) dendritik tabakalaşma yerinden ya hücre organları ile. Ölçek barlar, 50 mikron. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/3457/3457fig3.jpg" /> Şekil 3 tracer Neurobiotin enjekte tip 2 hücre morfolojisi. Tracer sonradan streptavidin Cy3 bağlama (eflatun) tarafından görüntülendi. GFP sinyal (yeşil) tasvir mikrografı, görüntü yığınlarının GCL ve IPL kapsayan bir projeksiyon. Ölçek çubuğu, 50 mm. <img alt="Şekil 4" src="/files/ftp_upload/3457/3457fig4.jpg" /> Şekil 4. GCL bulunan bir tip 2 hücre Işık cevapları. Tepki desen scotopic aralığında artan yoğunluğu beyaz ışık tam saha aydınlatma. Stimulus yoğunluğu çubuk (Rh * / çubuk / s), saniyede ortalama photoisomerizations verilir. 3 sn uzun bir uyaran daha iyi farklı için kullanılanyanıtı uyaran başlangıcı bileşenleri (tepki ON) ve (kapalı yanıtı) ofset iyon.

<ol>
	<li>Masland, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fundamental+plan+of+the+retina.">The fundamental plan of the retina.</a> Nat. Neurosci. 4, 877-886 (2001).</li><li>Baccus, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Timing+and+computation+in+inner+retinal+circuitry.">Timing and computation in inner retinal circuitry.</a> Annu. Rev. Physiol. 69, 271-290 (2007).</li><li>Haverkamp, S., Inta, D., Monyer, H., Wässle, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+analysis+of+green+fluorescent+protein+in+retinal+neurons+of+four+transgenic+mouse+lines.">Expression analysis of green fluorescent protein in retinal neurons of four transgenic mouse lines.</a> Neuroscience. 160, 126-139 (2009).</li><li>Siegert, S., Gross-Scherf, B., Del Punta, K., Didkovsky, N., Heintz, N., Roska, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+address+book+for+retinal+cell+types.">Genetic address book for retinal cell types.</a> Nat. Neurosci. 12, 1197-1204 (2009).</li><li>Svoboda, K., Yasuda, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+two-photon+excitation+microscopy+and+its+applications+to+neuroscience.">Principles of two-photon excitation microscopy and its applications to neuroscience.</a> Neuron. 50, 823-839 (2006).</li><li>Euler, T., Detwiler, P. W., Denk, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directionally+selective+calcium+signals+in+dendrites+of+starburst+amacrine+cells.">Directionally selective calcium signals in dendrites of starburst amacrine cells.</a> Nature. 418, 845-852 (2002).</li><li>Sakmann, B., Neher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Single-Channel Recording. , (1995).</li><li>Jackson, M. B., Gerfen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-cell+voltage+clamp+recording.">Whole-cell voltage clamp recording.</a> Current Protocols in Neuroscience. , (1997).</li><li>Majewska, A., Yiu, G., Yuste, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+custom-made+two-photon+microscope+and+deconvolution+system.">A custom-made two-photon microscope and deconvolution system.</a> Pf&#252;gers Arch. - Eur. J. Physiol. 441, 398-408 (2000).</li><li>Yuste, R., Konnerth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> maging in Neuroscience and Development: A Laboratory Manual. , (2005).</li><li>Euler, T., Hausselt, S. E., Margolis, D. J., Breuninger, T., Castell, X., Detwiler, P. B., Denk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eyecup+scope+-+optical+recordings+of+light+stimulus-evoked+fluorescence+signals+in+the+retina.">Eyecup scope - optical recordings of light stimulus-evoked fluorescence signals in the retina.</a> Pfl&#252;gers Arch. - Eur. J. Physiol. 457, 1393-1414 (2009).</li><li>Wei, W., Elstrott, J., Feller, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+targeted+recording+of+GFP-expressing+neurons+for+light+responses+and+live-cell+imaging+in+the+mouse+retina.">Two-photon targeted recording of GFP-expressing neurons for light responses and live-cell imaging in the mouse retina.</a> Nat. Protoc. 5, 1347-1352 (2010).</li><li>Matsushita, N., Okada, H., Yasoshima, Y., Takahashi, N., Kiuchi, K., Kobayashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+tyrosine+hydroxylase+promoter+activity+during+midbrain+dopaminergic+neuron+development.">Dynamics of tyrosine hydroxylase promoter activity during midbrain dopaminergic neuron development.</a> J. Neurochem. 82, 295-304 (2002).</li><li>Knop, G. C., Feigenspan, A., Weiler, R., Dedek, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inputs+underlying+the+ON-OFF+light+responses+of+type+2+wide-field+amacrine+cells+in+TH-GFP+mice.">Inputs underlying the ON-OFF light responses of type 2 wide-field amacrine cells in TH-GFP mice.</a> J. Neurosci. 31, 4780-4791 (2011).</li><li>Zhang, D. Q., Stone, J. F., Zhou, T., Ohta, H., McMahon, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+genetically+labeled+catecholamine+neurons+in+the+mouse+retina.">Characterization of genetically labeled catecholamine neurons in the mouse retina.</a> Neuroreport. 15, 1761-1765 (2004).</li><li>Contini, M., Lin, B., Kobayashi, K., Okano, H., Masland, R. H., Raviola, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+input+to+ON-biploar+cells+onto+the+dopaminergic+neurons+of+the+mouse+retina.">Synaptic input to ON-biploar cells onto the dopaminergic neurons of the mouse retina.</a> J. Comp. Neurol. 518, 2035-2050 (2010).</li><li>Helmchen, F., Denk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+tissue+two-photon+microscopy.">Deep tissue two-photon microscopy.</a> Nat. Methods. 2, 932-940 (2005).</li><li>Dedek, K., Breuninger, T., de Sevilla M&#252;ller, L. P., Maxeiner, S., Schultz, K., Janssen-Bienhold, U., Willecke, K., Euler, T., Weiler, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+type+of+interplexiform+amacrine+cell+in+the+mouse+retina.">A novel type of interplexiform amacrine cell in the mouse retina.</a> Eur. J. Neurosci. 30, 217-228 (2009).</li><li>Denk, W., Detwiler, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+recording+of+light-evoked+calcium+signals+in+the+functionally+intact+retina.">Optical recording of light-evoked calcium signals in the functionally intact retina.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96, 7035-7040 (1999).</li></ol>

Fare ele ve hayvan refahı için kurumsal kurallar ve hayvan deneyleri Alman hükümeti tarafından çıkarılan kanunları uyarınca ötenazi edildi.

Bu yöntem, retinanın adaptasyonel durumu etkileyen görsel rehberliği altında sağlam retina belirli nöronların elektriksel özellikleri çalışma imkanı sunuyor. Özellikle şu anda hücreleri oldukça kötü amacrine hücrelerinin çoğu popülasyonları gibi düşük nüfus yoğunluğu nedeniyle eğitim karakterizasyonu için uygundur. İki foton uyarma, 17 doku derin kısımlarında, hassas hedefleme için önkoşul ve başarılı hücrelerin özellikle hücre gövdeleri, yüksek yoğunluklu INL yama-sıkma. Bile yüksek çözünürlüklü ve yüksek kontrastlı görüntü izin Izole fare retina deneysel koşullar altında 3-4 saat için geçerli. Ikinci retina sürekli carbogen gazlama altında tamamen karanlıkta saklanan ise, ağartılmamış photopigment mor rengini korur ve ilk retina ile deneyler bitirdikten sonra kullanılabilir. Başlangıçta, hedeflemeKaranlıkta çalışmak, özellikle de retina wholemount mikropipet ile seçili hücre biraz zorlu ve bazı pratik gerektirir. Aynı zamanda hücre ve mikropipet iki foton uyarma altında görünür çünkü mikropipet bir floresan boya dahil olmak üzere, prosedürü kolaylaştırmak. Ancak, hücre içi bir çözüm için bileşenler ekleyerek gigaseal oluşumunu engelleyen veya kayıt kalitesini acı neden olabilir. Bir kez başarıyla, iyi bir kayıt yaklaşık 1 saat sürebilir Oysa kendisi sadece kötü kızılötesi uyarma ışığı retina fotoreseptör tarafından emilir, heyecanlı, GFP ifade spektrumun görünür hücrelerin ışık yayarlar. Ancak, fluorophores sadece retinanın adaptasyonel durumu değiştirmek olası değildir küçük bir odak hacmi heyecan duyuyoruz. Daha fazla, uyarım sadece hedefleme için gereklidir ve ışık yanıtların kayıt sırasında kapatılabilir. Usefulnbu yaklaşımın ess zaten belirli populasyonlar üzerindeki elektrofizyolojik kayıtlar sadece kaza 12 ile aksi mümkün olurdu hangi amacrine hücreleri 14,18 çalışmalar ile gösterilmiştir. Son olarak, bu güçlü teknik bir farmakolojik yaklaşım 14, Ca 2 + görüntüleme 19 dahil ederek ya da enjekte edilen hücrelerin immünositokimyasal çalışmaları veya elektron mikroskobu kullanarak daha uzatılabilir. Bu şekilde, belirli bir hücre tipi retina devresi fonksiyonel pozisyonda sökülmüş olabilir.

<table border="1"><tbody><tr><th> Reaktif / ekipmanı </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th><th> Yorumlar </th></tr><tr><td> Gece görüş gözlüğü </td><td> Gutzeit GmbH, Warthausen, Almanya </td><td> Xtron F1 </td><td> 800 nm dalga boyundaki ışık kaynağı içerir </td></tr><tr><td> Optik filtre </td><td> Schott, Mainz, Almanya </td><td> RG9 </td><td> kesim ile 690 nm filtre longpass </td></tr><tr><td> İris makası </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 14061-09 </td><td> 22 mm bıçak ile kavisli </td></tr><tr><td> Bahar makas </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 15000-00 </td><td> 3 mm bıçak düz </td></tr><tr><td> Kayıt odasına </td><td> Luigs &amp; Neumann GmbH, Ratingen, Almanya </td><td> 2-100 500 0180 A tipi (TC) </td><td> Alt monte edilmiş cam kapak kayma teflon haznesi (yaklaşık 0,15 mm; No: 2-100 500 0182) </td></tr><tr><td> Akış ısıtıcı </td><td> Çok Kanallı Sistemleri, Reutlingen, Almanya </td><td> PH01, TC01 </td><td> sıcaklığı ile ısıtılabilir perfüzyon kanülüEnsor ve sıcaklık kontrolörü </td></tr><tr><td> Lazer tarama mikroskobu </td><td> Leica Microsystems </td><td> DM LFS </td><td> Leica Konfokal Software tarafından kontrol </td></tr><tr><td> Hava tablo </td><td> Newport </td><td> VH 3036W-OPT </td><td></td></tr><tr><td> Lazer </td><td> Spectra-fizik </td><td></td><td> Tsunami Mod-kilitlenmiş Ti: Safir Lazer </td></tr><tr><td> CCD kamera </td><td> pco AG, Kelheim, Almanya </td><td> PixelFly QE </td><td> kontrol yazılımı da dahil olmak üzere </td></tr><tr><td> Mikropipet cam kapilerleri </td><td> Hilgenberg, Malsfeld, Almanya </td><td> 1408411 </td><td></td></tr><tr><td> Mikropipet çektirmesi </td><td> Sutter Enstrüman </td><td> P-97 </td><td></td></tr><tr><td> Alexa Fluor 594 </td><td> Invitrogen </td><td> A-20004 </td><td> floresan boya </td></tr><tr><td> Neurobiotin </td><td> Axxora </td><td> VC-SP-1120-M050 </td><td> non-floresan tracer </td></tr><tr><td> Streptavidin-Cy3 </td><td> Dianova </td><td> 016-160-084 </td><td></td></tr><tr><td> Micromanipulator </td><td> Luigs &amp; Neumann GmbH, Ratingen, Almanya </td><td> 210-100 000 0010 </td><td> Mini25 manipülatör birim ile motorlu ekran SM-5 </td></tr><tr><td> Patch-kelepçe amplifikatör </td><td> NPI elektronik GmbH, Tamm, Almanya </td><td> SEC-05LX NPI </td><td></td></tr><tr><td> Sayısallaştırıcı </td><td> National Instruments </td><td> BNC-2090 </td><td></td></tr><tr><td> Veri toplama yazılımı WinWCP </td><td> John Dempster, Glasgow, İngiltere, İskoçya Üniversitesi </td><td></td><td> http://spider.science.strath. ac.uk / sipbs / software.htm </td></tr><tr><td> Görsel uyaran jeneratör QDS </td><td> Thomas Euler, Tübingen Üniversitesi, Almanya </td><td></td><td> ayrı bir bilgisayara 2 monitör (kullanıcı arabirimi, uyaran monitör) kontrol ameliyat olmak zorunda </td></tr><tr><td> Nötr yoğunluk filtreleri </td><td> Yaninda, Mainz, Almanya </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

electrophysiological characterization of gfp-expressing cell populations in the intact retina

Fizyolojik özellikleri ve sağlam doku belirli nöronların sinaptik bağlantıların incelenmesi göze çarpan morfolojik özellikleri olmayan ya da düşük bir nüfus yoğunluğu bu hücreler için bir meydan okuma. Bu durum özellikle, retina amacrine hücreleri, memeliler 1 kabaca 30 alt tipi oluşturan internöronlar son derece çok şekilli bir sınıf için geçerlidir . Görsel işleme retina çıkış 2 şekillenmesinde çok önemli bir parçası olmanın rağmen bu hücrelerin bir kayıt elektrodu ile karşılaşan nadir bir olay olduğundan, bu alt tiplerinin çoğu artık işlevsel bir bağlamda çalışılmıştır değil. Son zamanlarda, bir çok transgenik fare hatları kullanılabilir ifade floresan membran reseptörlerine ya da belirli bir doku 3,4 nöronların sadece bir alt kümesini özel enzimler için yararlanıcı grupların kontrolü altında yeşil floresan proteini (GFP) gibi belirteçler . Bu ön-işaretli hücrelerin bu nedenle accessible in situ fizyolojik özelliklerinin sistematik çalışma izin mikroskobik kontrolü altında hedef yönettiği mikroelektrot. Ancak, floresan belirteçlerin uyarma canlı doku için fototoksisite riski eşlik eder. Retina, bu yaklaşımın ek olarak uyarma ışık fotoreseptörlerin uygun stimülasyon neden olduğu, böylece photopigment inflicting ağartma ve ışık adapte retina devreler transfer sorunu bir engel teşkil etmektedir. Bu sakıncaları femtosecond aralığı kısa darbeler bir mod-kilitli lazer tarafından teslim kızılötesi uyarma kullanarak üstesinden. İki foton uyarma fluorofor uyarma için yeterli enerjiyi sağlar ve aynı zamanda küçük bir doku hacmi fotohasar 5 tehlikeleri en aza indirmek için uyarma kısıtlar. Ayrıca, kızılötesi ışık (850 nm) sadece kötü photopigments 6 tarafından emilir beri görsel uyaranlara duyarlı retina bırakır. &quot;jove_content&quot;&gt; in situ kayıtlarında elektrofizyolojik ulaşmak için bir transgenik fare retinanın kullanımını göstermek GFP ifade görsel iki foton uyarma tarafından hedef hücreleri . Retina hazırlanan ve karanlıkta tutulan ve mikroskop (Şekil 1) kondenser yoluyla tahmin edilmektedir optik uyaranlara maruz olabilir. Boya dolgu morfolojisini ortaya çıkarmak için, hedef hücre farklı deneysel düzeylerde ele böylece, komşu hücreler için kaplin boşluğu kavşağı-aracılı boya kontrol etmek için ışık yanıtları Patch-klemp kayıt ile kombine edilebilir.

Watch this Scientific Journal Video about Electrophysiological Characterization of GFP-Expressing Cell Populations in the Intact Retina at JoVE.com

Electrophysiological Characterization of GFP-Expressing Cell Populations in the Intact Retina

Bu makale, tek tek hücrelerin sağlam fare retinada floresan etiketli nöron popülasyonları kayıt gösteriyor. Iki foton kızılötesi uyarma kullanarak transgenetically etiketli hücreleri ışık tepkileri, açık alan özellikleri, ve morfoloji çalışması için patch-klemp kayıt için hedef alındı.

Bozulmamış Retina Elektrofizyolojik Karakterizasyonu GFP-ifade eden hücre popülasyonlarının

Studying the physiological properties and synaptic connections of specific neurons in the intact tissue is a challenge for those cells that lack ...

electrophysiological-characterization-gfp-expressing-cell-populations

Research

JoVE Journal

Neuroscience

13.3K Görüntüleme.  University of Oldenburg. Bu makale, tek tek hücrelerin sağlam fare retinada floresan etiketli nöron popülasyonları kayıt gösteriyor. Iki foton kızılötesi uyarma kullanarak transgenetically etiketli hücreleri ışık tepkileri, açık alan özellikleri, ve morfoloji çalışması için patch-klemp kayıt için hedef alındı.

Video: Electrophysiological Characterization of GFP-Expressing Cell Populations in the Intact Retina

Organotypic Slice Culture of GFP-expressing Mouse Embryos for Real-time Imaging of Peripheral Nerve Outgrowth

For many purposes, the cultivation of mouse embryos ex vivo as organotypic slices is desirable. For example, we employ a transgenic mouse line (tauGFP) in which the enhanced version of the green fluorescent protein (EGFP) is exclusively expressed in all neurons of the developing central and peripheral nervous system1, allowing the possibility to both film the innervation of the forelimb and to manipulate this process with pharmacological and genetic techniques2. The most critical parameter in the successful cultivation of such slice cultures is the method by which the slices are prepared. After extensive testing of a variety of methods, we have found that a vibratome is the best possible device to slice the embryos such that they routinely result in a culture that demonstrates viability over a period of several days, and most importantly, develops in an age-specific manner. For mid-gestation embryos, this includes the normal outgrowth of spinal nerves from the spinal cord and the dorsal root ganglia to their targets in the periphery and the proper determination of skeletal and muscle tissue. 
In this work, we present a method for processing whole embryos of embryonic day (E) E10 to E12 into 300 - 400 micrometer slices for cultivation in a standard tissue culture incubator, which can be studied for up to two days after slice preparation. Critical for the success of this approach is the use of a vibratome to slice each agarose-embedded embryo. This is followed by the cultivation of the slices upon Millicell culture membrane inserts placed upon a small volume of medium, resulting in an interface culture technique. One litter with an average of 7 embryos routinely produces at least 14 slices (2-3 slices of the forelimb region per embryo), which varies slightly due to the age of the embryos as well as to the thickness of the slices. About 80% of the cultured slices show nerve outgrowth, which can be measured througout the culturing period2. Representative results using the tauGFP mouse line are demonstrated.

We present a method to prepare organotypic slices of mid-gestation mouse embryos for the cultivation and time-lapse imaging of peripheral nerve outgrowth.

Organotipik Dilim Kültür GFP-Periferik Sinir akıbet Gerçek zamanlı Görüntüleme Fare Embriyolar ifade

For many purposes, the cultivation of mouse embryos ex vivo as organotypic slices is desirable. For example, we employ a transgenic mouse line (tauGFP) in ...

Nörobilim

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

The functional characterization of genes expressed during mammalian retinal development remains a significant challenge. Gene targeting to generate constitutive or conditional loss of function knockouts remains cost and labor intensive, as well as time consuming. Adding to these challenges, retina expressed genes may have essential roles outside the retina leading to unintended confounds when using a knockout approach. Furthermore, the ability to ectopically express a gene in a gain of function experiment can be extremely valuable when attempting to identify a role in cell fate specification and/or terminal differentiation.
We present a method for the rapid and efficient incorporation of DNA plasmids into the neonatal mouse retina by electroporation. The application of short electrical impulses above a certain field strength results in a transient increase in plasma membrane permeability, facilitating the transfer of material across the membrane 1,2,3,4. Groundbreaking work demonstrated that electroporation could be utilized as a method of gene transfer into mammalian cells by inducing the formation of hydrophilic plasma membrane pores allowing the passage of highly charged DNA through the lipid bilayer 5. Continuous technical development has resulted in the viability of electroporation as a method for in vivo gene transfer in multiple mouse tissues including the retina, the method for which is described herein 6, 7, 8, 9, 10. 
DNA solution is injected into the subretinal space so that DNA is placed between the retinal pigmented epithelium and retina of the neonatal (P0) mouse and electrical pulses are applied using a tweezer electrode. The lateral placement of the eyes in the mouse allows for the easy orientation of the tweezer electrode to the necessary negative pole-DNA-retina-positive pole alignment. Extensive incorporation and expression of transferred genes can be identified by postnatal day 2 (P2). Due to the lack of significant lateral migration of cells in the retina, electroporated and non-electroporated regions are generated. Non-electroporated regions may serve as internal histological controls where appropriate. 
Retinal electroporation can be used to express a gene under a ubiquitous promoter, such as CAG, or to disrupt gene function using shRNA constructs or Cre-recombinase. More targeted expression can be achieved by designing constructs with cell specific gene promoters. Visualization of electroporated cells is achieved using bicistronic constructs expressing GFP or by co-electroporating a GFP expression construct. Furthermore, multiple constructs may be electroporated for the study of combinatorial gene effects or simultaneous gain and loss of function of different genes. Retinal electroporation may also be utilized for the analysis of genomic cis-regulatory elements by generating appropriate expression constructs and deletion mutants. Such experiments can be used to identify cis-regulatory regions sufficient or required for cell specific gene expression 11. Potential experiments are limited only by construct availability.

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

A method for the incorporation of plasmid DNA into murine retinal cells for the purpose of performing either gain- or loss of function studies in vivo is presented. This method capitalizes on the transient increase in permeability of cell plasma membranes induced by the application of an external electrical field.

Gelişmekte olan Fare Retina in vivo Elektroporasyon olarak

The functional characterization of genes expressed during mammalian retinal development remains a significant challenge.  Gene targeting to generate ...

Intact Histological Characterization of Brain-implanted Microdevices and Surrounding Tissue

Research into the design and utilization of brain-implanted microdevices, such as microelectrode arrays, aims to produce clinically relevant devices that interface chronically with surrounding brain tissue. Tissue surrounding these implants is thought to react to the presence of the devices over time, which includes the formation of an insulating "glial scar" around the devices. However, histological analysis of these tissue changes is typically performed after explanting the device, in a process that can disrupt the morphology of the tissue of interest.
Here we demonstrate a protocol in which cortical-implanted devices are collected intact in surrounding rodent brain tissue. We describe how, once perfused with fixative, brains are removed and sliced in such a way as to avoid explanting devices. We outline fluorescent antibody labeling and optical clearing methods useful for producing an informative, yet thick tissue section. Finally, we demonstrate the mounting and imaging of these tissue sections in order to investigate the biological interface around brain-implanted devices.

Here we present a histological method for capturing, labeling, optically clearing, and imaging the intact brain tissue interface around chronically implanted microdevices in rodent brain tissue. Results from the techniques comprising this method are useful for understanding the impact of various penetrating brain-implants on their surrounding tissue.

Beyin-implante Microdevices ve Çevresi Doku Bozulmamış Histolojik Karakterizasyonu

Research  into the design and utilization of brain-implanted microdevices, such as  microelectrode arrays, aims to produce clinically relevant devices ...

Electrophysiological Recording in the Brain of Intact Adult Zebrafish

Previously, electrophysiological studies in adult zebrafish have been limited to slice preparations or to eye cup preparations and electrorentinogram recordings. This paper describes how an adult zebrafish can be immobilized, intubated, and used for in vivo electrophysiological experiments, allowing recording of neural activity. Immobilization of the adult requires a mechanism to deliver dissolved oxygen to the gills in lieu of buccal and opercular movement. With our technique, animals are immobilized and perfused with habitat water to fulfill this requirement. A craniotomy is performed under tricaine methanesulfonate (MS-222; tricaine) anesthesia to provide access to the brain. The primary electrode is then positioned within the craniotomy window to record extracellular brain activity. Through the use of a multitube perfusion system, a variety of pharmacological compounds can be administered to the adult fish and any alterations in the neural activity can be observed. The methodology not only allows for observations to be made regarding changes in neurological activity, but it also allows for comparisons to be made between larval and adult zebrafish. This gives researchers the ability to identify the alterations in neurological activity due to the introduction of various compounds at different life stages.

This paper describes how an adult zebrafish can be immobilized, intubated, and used for in vivo electrophysiological experiments to allow recordings and manipulation of neural activity in an intact animal.

Sağlam Yetişkin Zebra balığı Beyin Elektrofizyolojik Kayıt

Previously, electrophysiological studies in adult zebrafish have been limited to slice preparations or to eye cup preparations and electrorentinogram ...

Assessment of Vascular Regeneration in the CNS Using the Mouse Retina

The rodent retina is perhaps the most accessible mammalian system in which to investigate neurovascular interplay within the central nervous system (CNS). It is increasingly being recognized that several neurodegenerative diseases such as Alzheimer&#8217;s, multiple sclerosis, and amyotrophic lateral sclerosis present elements of vascular compromise. In addition, the most prominent causes of blindness in pediatric and working age populations (retinopathy of prematurity and diabetic retinopathy, respectively) are characterized by vascular degeneration and failure of physiological vascular regrowth. The aim of this technical paper is to provide a detailed protocol to study CNS vascular regeneration in the retina. The method can be employed to elucidate molecular mechanisms that lead to failure of vascular growth after ischemic injury. In addition, potential therapeutic modalities to accelerate and restore healthy vascular plexuses can be explored. Findings obtained using the described approach may provide therapeutic avenues for ischemic retinopathies such as that of diabetes or prematurity and possibly benefit other vascular disorders of the CNS.

The rodent retina has long been recognized as an accessible window to the brain. In this technical paper we provide a protocol that employs the mouse model of oxygen-induced retinopathy to study the mechanisms that lead to failure of vascular regeneration within the central nervous system after ischemic injury. The described system can also be harnessed to explore strategies to promote regrowth of functional blood vessels within the retina and CNS.

Fare Retina kullanma CNS&#39;deki Vasküler Rejenerasyon Değerlendirilmesi

The rodent retina is perhaps the most accessible mammalian system in which to investigate neurovascular interplay within the central nervous system (CNS). ...

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

The mouse accessory olfactory system (AOS) is a specialized sensory pathway for detecting nonvolatile social odors, pheromones, and kairomones. The first neural circuit in the AOS pathway, called the accessory olfactory bulb (AOB), plays an important role in establishing sex-typical behaviors such as territorial aggression and mating. This small (&#60;1 mm3) circuit possesses the capacity to distinguish unique behavioral states, such as sex, strain, and stress from chemosensory cues in the secretions and excretions of conspecifics. While the compact organization of this system presents unique opportunities for recording from large portions of the circuit simultaneously, investigation of sensory processing in the AOB remains challenging, largely due to its experimentally disadvantageous location in the brain. Here, we demonstrate a multi-stage dissection that removes the intact AOB inside a single hemisphere of the anterior mouse skull, leaving connections to both the peripheral vomeronasal sensory neurons (VSNs) and local neuronal circuitry intact. The procedure exposes the AOB surface to direct visual inspection, facilitating electrophysiological and optical recordings from AOB circuit elements in the absence of anesthetics. Upon inserting a thin cannula into the vomeronasal organ (VNO), which houses the VSNs, one can directly expose the periphery to social odors and pheromones while recording downstream activity in the AOB. This procedure enables controlled inquiries into AOS information processing, which can shed light on mechanisms linking pheromone exposure to changes in behavior.

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

The mouse accessory olfactory bulb (AOB) has been difficult to study in the context of sensory coding. Here, we demonstrate a dissection that produces an ex vivo preparation in which AOB neurons remain functionally connected to their peripheral inputs, facilitating research into information processing of mouse pheromones and kairomones.

Bozulmamış Vomeronasal Organ ve Aksesuar Koku Ampul Ex Vivo Hazırlıklar

The mouse accessory olfactory system (AOS) is a specialized sensory pathway for detecting nonvolatile social odors, pheromones, and kairomones. The first ...

Isolation of Distinct Cell Populations from the Developing Cerebellum by Microdissection

Microdissection is a novel technique that can isolate specific regions of a tissue and eliminate contamination from cellular sources in adjacent areas. This method was first utilized in the study of Nestin-expressing progenitors (NEPs), a newly identified population of cells in the cerebellar external germinal layer (EGL). Using microdissection in combination with fluorescent-activated cell sorting (FACS), a pure population of NEPs was collected separately from conventional granule neuron precursors in the EGL and from other contaminating Nestin-expressing cells in the cerebellum. Without microdissection, functional analyses of NEPs would not have been possible with the current methods available, such as Percoll gradient centrifugation and laser capture microdissection. This technique can also be applied for use with various tissues that contain either recognizable regions or fluorescently-labeled cells. Most importantly, a major advantage of this microdissection technique is that isolated cells are living and can be cultured for further experimentation, which is currently not possible with other described methods.

Nestin-expressing&#160;progenitors are a newly identified population of neuronal progenitors in the developing cerebellum. Using the microdissection technique presented here in combination with fluorescent-activated cell sorting, this cell population can be purified with no contamination from other cerebellar regions and can be cultured for further studies.

Mikrodisseksiyon tarafından Gelişmekte Serebellumunda farklı olarak hücre popülasyonlarının İzolasyonu

Microdissection is a novel technique that can isolate specific regions of a tissue and eliminate contamination from cellular sources in adjacent areas. ...

In-depth Physiological Analysis of Defined Cell Populations in Acute Tissue Slices of the Mouse Vomeronasal Organ

In most mammals, the vomeronasal organ (VNO) is a chemosensory structure that detects both hetero- and conspecific social cues. Vomeronasal sensory neurons (VSNs) express a specific type of G protein-coupled receptor (GPCR) from at least three different chemoreceptor gene families allowing sensitive and specific detection of chemosensory cues. These families comprise the V1r and V2r gene families as well as the formyl peptide receptor (FPR)-related sequence (Fpr-rs) family of putative chemoreceptor genes. In order to understand the physiology of vomeronasal receptor-ligand interactions and downstream signaling, it is essential to identify the biophysical properties inherent to each specific class of VSNs.
The physiological approach described here allows identification and in-depth analysis of a defined population of sensory neurons using a transgenic mouse line (Fpr-rs3-i-Venus). The use of this protocol, however, is not restricted to this specific line and thus can easily be extended to other genetically modified lines or wild type animals.

Here, we describe a physiological approach that allows identification and in-depth analysis of a defined population of sensory neurons in acute coronal tissue slices of the mouse vomeronasal organ using whole-cell patch-clamp recordings.

Fare Vomeronazal Organ Akut Doku Dilimleri Tanımlı hücre popülasyonlarının derinlemesine Fizyolojik Analizi

In most mammals, the vomeronasal organ (VNO) is a chemosensory structure that detects both hetero- and conspecific social cues. Vomeronasal sensory ...

Preparation of Horizontal Slices of Adult Mouse Retina for Electrophysiological Studies

Vertical slice preparations are well established to study circuitry and signal transmission in the adult mammalian retina. The plane of sectioning in these preparations is perpendicular to the retinal surface, making it ideal for the study of radially oriented neurons like photoreceptors and bipolar cells. However, the large dendritic arbors of horizontal cells, wide-field amacrine cells, and ganglion cells are mostly truncated, leaving markedly reduced synaptic activity in these cells. Whereas ganglion cells and displaced amacrine cells can be studied in a whole-mounted preparation of the retina, horizontal cells and amacrine cells located in the inner nuclear layer are only poorly accessible for electrodes in whole retina tissue.
To achieve maximum accessibility and synaptic integrity, we developed a horizontal slice preparation of the mouse retina, and studied signal transmission at the synapse between photoreceptors and horizontal cells. Horizontal sectioning allows&#160;(1) easy and unambiguous visual identification of horizontal cell bodies for electrode targeting, and (2) preservation of the extended horizontal cell dendritic fields, as a prerequisite for intact and functional cone synaptic input to horizontal cell dendrites.
Horizontal cells from horizontal slices exhibited tonic synaptic activity in the dark, and they responded to brief flashes of light with a reduction of inward current and diminished synaptic activity. Immunocytochemical evidence indicates that almost all cones within the dendritic field of a horizontal cell establish synapses with its peripheral dendrites. The horizontal slice preparation is therefore well suited to study the physiological properties of horizontally extended retinal neurons as well as sensory signal transmission and integration across selected synapses.

We developed a horizontal slice preparation of the adult mammalian retina with the plane of sectioning parallel to the retinal surface. Dendritic fields of nonradially oriented retinal neurons were not truncated, allowing the study of signal processing with patch-clamp and imaging techniques.

Elektrofizyolojik Çalışmalar Yetişkin Fare Retina Yatay Dilimleri hazırlanması

Vertical slice preparations are well established to study circuitry and signal transmission in the adult mammalian retina. The plane of sectioning in ...

In Vitro Characterization of the Electrophysiological Properties of Colonic Afferent Fibers in Rats

Dysfunction of the colonic sensory nerves has been implicated in the pathophysiology of several common conditions, including functional and inflammatory bowel diseases and diabetes. Here, we describe a protocol for the in vitro characterization of the electrophysiological properties of colonic afferents in rats. The colorectum, with the intact pelvic ganglion (PG) attached, is removed from the rat; superfused with carbogenated Krebs solution in the recording chamber; and cannulated at the oral and anal ends to allow for distension. A fine nerve bundle emanating from the PG is identified, and the multiunit afferent nerve activity is recorded using a suction electrode. Distension of the colonic segment elicits gradual increases in multiunit discharge. A principal component analysis is conducted to differentiate the low-threshold, the high-threshold, and the wide-dynamic range afferent fibers. Chemical sensitivity of colonic afferents can be studied through the bath or intraluminal administration of test compounds. This protocol can be modified for application to other species, such as mice and guinea pigs, and to study the differences in the electrophysiological properties of thoracolumbar/hypogastric and lumbosacral/pelvic afferents of the descending colon in normal and pathological conditions.

In Vitro Characterization of the Electrophysiological Properties of Colonic Afferent Fibers in Rats

Abnormal sensory function underlies visceral pain and other symptoms of functional and inflammatory bowel diseases. A protocol for the electrophysiological recording of the colonic afferent nerves in an ex vivo rat colorectum preparation is presented here.

Vitro Sıçanlarda kolon Afferent liflerinin Elektrofizyolojik özellikleri karakterizasyonu

Dysfunction of the colonic sensory nerves has been implicated in the pathophysiology of several common conditions, including functional and inflammatory ...