Danilo Maddalo bir araştırma bursu, Karlsruhe Teknoloji Enstitüsü Genç Araştırmacı Grubu (YIG) olarak bir alıcı.

1. Hücreleri Seeding <ol><li> Başlamadan önce, 37 az bir su banyosu içinde, kültür ortamı, PBS 1X ve tripsin ısınmak ˚ C </li><li> Kuluçka hücrelerini alın ve orta aspire. </li><li> 5 ml PBS 1X nazikçe yıkayın hücreleri geçerlidir. </li><li> PBS 1X aspire tripsin EDTA% 0,025 içeren 1 ml uygulayın. </li><li> Tripsin eşit bir dağılıma sahip olduğu plaka hafifçe döndürün. </li><li> 37 inkübatör hücrelerin yerleştirin ˚ C (hücre tipine bağlı olarak 5-10 dakika). Zaman zaman kontrol hücreleri plaka sallayarak ayrılmış. </li><li> 10-20 ml orta hücrelerin 50 ml şahin tüp içinde süspanse edin ve onları toplamak. </li><li> Beckman sayacı kullanarak hücre sayımı. Hücrelerin sayısı yaklaşık% 60-70 oranında bir izdiham sağlamak için yeterli olmalıdır. </li><li> Plate hücreleri ve 6-8 saat süreyle tohum onlara izin verir. </li></ol> 2. TransInfeksiyon <ol><li> Transfeksiyon için önce 37 ˚ C&#39;ye bir su banyosu içinde bir kısım serum orta ısınmak </li><li> X-treme Gen 9 oda sıcaklığına getirin. </li><li> 2 Eppendorf tüpler serum serbest orta (1 tüp = 1 transfeksiyon) pipetleyin. </li><li> Pipetleyin ucu, 5 dakika, Eppendorf ve inkübe plastik duvar temas edip etmediğini, serum serbest orta ödeyerek dikkat X-treme Gen 9. Bu arada iki DNA karışımlarını hazırlamak: Bir tüp içinde, başka bir tüp renilla, ateş böceği ve moleküler şaperon renilla, ateş böceği ve boş bir vektör kontrolü için plazmid karıştırın. </li><li> + X-treme Gen 9, vortex ve 20 dakika oda sıcaklığında inkübe içeren serum serbest ortam her Eppendorf DNA karışımını ekleyin. </li><li> 37, 24 saat boyunca her plaka ve inkübe üzerine damla damla her karışımı ° C ve% 5 CO 2 </li></ol> 3. Yarma hücreleri <ol><li> 24 saat sonra transfeksiyon, tryps1.4 &#39;de açıklandığı gibi hücrelere inize - 1.6 ve% 60-70 oranında son bir confluency 6 plaka onları sulandırmak. </li><li> Olmayan şok kontrol için bir tabak hazırlayın ve analiz edilmesi gereken kurtarma zamanı noktaları gibi birçok tabak, Şekil gösterdi. 2. </li></ol> 4. Isı şoku <ol><li> Isı çarpması için, önceden ılık serum içeren bir su banyosunda 37 ° orta ˚ C </li><li> 20 mM nihai konsantrasyonu 20 mg / ml ve MOPS serum içeren orta Siklohekzimidsiz içinde seyreltilmesi hazırlayın &#39;ısı şok tampon. </li><li> Şimdi inkübatör tabak ve orta aspire. </li><li> &#39;Isı şok tampon&#39; her iyi 1 ml ekleyin ve 37 az 30 dakika boyunca inkübe ˚ C ve% 5 CO 2 (aynı zamanda bu tedavi referans plaka). Bu, de novo protein sentezi durur. </li><li> Bu arada bir su banyosu anahtarı ve temperature ˚ C 45 </li><li> Inkübasyondan sonra, daha önce şeritler halinde kesilmiş plakalar Parafilm kapak mühür. Referans plaka (refolfed ateşböceği% 100) inkübatör bırakılır. </li><li> 45 ˚ C &#39;de 30 dakika boyunca plakalar inkübe edin. </li><li> Su banyosu plakaları çıkarın parafilm kaldırmak ve kurtarma izin inkübatör geri tabak koyun. </li><li> Her zaman noktası hasat hücrelerin az ve 4 için 2000Xg ˚ C&#39;de 1 dakika santrifüj PBS 1X yıkayın </li></ol> 5. Hücre parçalama ve lusiferaz tahlil <ol><li> Verimli bir hücre erimesi için, sıvı nitrojen içinde hücre pelletini dondurmak oturtun. </li><li> Bir cam tüp çift distile su 1:05 seyreltilmiş pasif lizis tamponu 200 ul ekleyin. </li><li> 96 plaka 30 ul hücre lizat ekleyin. Her örnek, üç nüsha olarak pipetlenir. </li><li> Sadece olmayan şok &#39;referans örnek olacakBu adım, eşit transfeksiyon etkinliğini kontrol etmek için kullanılan bu yana, renilla lusiferaz aktivitesini okuyun. </li><li> Test için çözümler hazırlayın. Luciferase çözümü için Gly-Gly tampon son konsantrasyonu 0.2 mM luciferase sulandırmak. Reaksiyon tamponu için Gly-Gly tampon 1mm son konsantrasyonu DTT ve ATP sulandırmak. Coelenterazine reaksiyon tamponu için, nihai konsantrasyonu 0.2 mcM coelenterazine tampon coelenterazine sulandırmak. Luciferase çözüm ve coelenterazine reaksiyon tamponu ışık korumalı tutun. </li><li> Şimdi luminometreye 96-plaka yeri ve programı &#39;Wallac 1420 İş İstasyonu&#39; başlatmak. </li><li> Coelenterazine çözeltisi içeren şahin tüpe Pump1 tanıtın. Hiç ışık tüpü ile temas böylece kapağını kapatın. </li><li> Seçeneği &#39;Dispenser bakım menüden seçiniz ve Pump1 işaretleyiniz. </li><li> &#39;Doldur&#39; seçeneğini seçin. </li><li> Menüde &#39;plaka düzeni seçeneği düzenlemek için protokol ve sonuç keşfedin. Üzerinde protokol ve çift tıklayarak seçin. Şimdi kuyu okunacak seçin. </li><li> &#39;Wallac Müdürü&#39; geri dönün ve &#39;Başlat&#39; düğmesine tıklayın. Renilla lusiferaz ve substrat coelenterazine arasındaki reaksiyon pik, 482 nm dalga boylu ışık yayar. </li><li> Okuduktan sonra, &#39;Dispenser bakım gidin ve geri kalan tüm çözüm tüp serbest bırakmak için&#39; Boş &#39;ve Pump1 seçin. </li><li> Şimdi, su içeren bir şahin tüp tüp taşımak ve &#39;Flush&#39; işaretleyiniz. </li><li> Kızarma adımdan sonra, &#39;Boş&#39; seçerek tüp boş. </li><li> Reaksiyon tampon şahin tüp Pump1 ve luciferase şahin tüp Pump2 biri tüp yerleştirin. </li><li> Plaka düzenini değiştirin. </li><li> &#39;Di Pump1 ve Pump2&#39; Doldur &#39;seçinSpenser Bakım &#39;menüsünden. </li><li> Protokolü seçin ve okumaya başlayın. Firefly lusiferaz ve substrat luciferase arasındaki reaksiyon, 560 nm arasında bir zirve dalga boyuna sahip bir ışık yayar. </li><li> Okuma sonunda Pump1 ve Pump2 Flush-Boş Boş işlemi tekrarlayın. </li><li> Sonuçlar &#39;Wallac 1420 Explorer&#39; artık mevcuttur. </li><li> Her deneyde bir test numarası ile ilişkili, başlangıç ​​ve bitiş tarihi kullanıcı adınızı. </li><li> Sonuçlar artık bir Excel dosyası olarak ihraç edilebilir. </li><li> 1: hesaplamalar için, hücreleri üç gruba ayrılır. olmayan şok referans örnekleri (% 100 ateşböceği lusiferaz refolded set); 2. şok moleküler hastabakıcı ve ısı olmadan hücreler; 3. hücrelerin moleküler şaperon ısı ve şok. </li></ol> 6. Temsilcisi Sonuçlar Protein refolding sistem yanlısı çalışıp çalışmadığını test etmek için bu nedenle iyileşme süresi doğrudan ilgili<html> Perly bir tahlil, farklı zaman noktalarında hücrelerin toplanması yapılacak. Doğrudan bir korelasyon zaman / refolding yüzdesi, deney düzgün bir şekilde gerçekleştirilir ve bu nedenle bir sınırlayıcı faktör temsil olduğunu gösterir. Ancak her zaman ısı şokundan sonra refolding doyurarak bir olaydır ve bu nedenle uygun bir zaman ders analizi, herhangi bir deney başlamadan önce yapılmalıdır dikkate alınmalıdır. <img src="/files/ftp_upload/3540/3540fig1.jpg" alt="Şekil 1"/> Şekil 1. Deney Bakış. In vivo refolding tayininde tamamlanması 3 ila 4 gün gerektirir. Gün 1 hücreleri numaralı seribaşı ve transfekte. Ertesi gün, hücreleri daha küçük bir biçime parçalı ve 3. günde ısı şok. Bu noktada sağ hücreler hasat sonrası lusiferaz tahlil gerçekleştirmek için veya -80 ° C&#39;de hücre pelletini kaydetmek ve bir an tahlil gerçekleştirmek mümkün _content &quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/3540/3540fig2.jpg" alt="Şekil 2"/> Şekil 2. Hücre bölünmesi. Gününde 2 hücreleri 6 plaka ayrılır. Her transfeksiyon aynı plaka üzerindeki tüm transfeksiyon sahip olmak için iyi bir seyreltilmiş olacaktır. Her plaka belirli bir iyileşme süresi artı olmayan bir şok referans plaka karşılık gelir. <img src="/files/ftp_upload/3540/3540fig3.jpg" alt="Şekil 3"/> Şekil 3. Temsilcisi iyi bir sonuç. Refolding, A. Yüzde doğrudan ateşböceği lusiferaz aktivite ile ölçülür. Her çubuk grafik, farklı kurtarma zaman noktalarında moleküler şaperon varlığı yokluğu (siyah çubuklar) ve (kırmızı bar) refolding yüzdesini temsil eder. B. yokluğu (siyah çizgi) ve hastabakıcı varlığı (kırmızı çizgi) ve refolding arasında korelasyon. R kare değerleri arasında iyi bir korelasyon göstermektedir. Fig.3A hücrelerin yokluğunda ısı şok (siyah çubuklar) 15, 30, 45, 60 ve 120 dakika sonra ve moleküler şaperon varlığı (kırmızı bar) toplandı bir temsilci sonuçları gösterilir. Yüzde refolded, uzamış iyileşme süresi ve moleküler şaperon transfeksiyon lusiferaz artar. Refolding ve zaman kontrolü (Şekil 3B, siyah çizgi) ve moleküler hastabakıcı-transfekte hücreler (Şekil 3B, kırmızı çizgi) arasındaki ilişki gösterilmiştir. <img src="/files/ftp_upload/3540/3540fig4.jpg" alt="Şekil 4"/> Şekil 4 Temsilcisi kötü bir sonuç. A. refolding, Yüzde doğrudan luciferase aktivitesi ölçülür. Her çubuk grafik, farklı kurtarma zaman noktalarında moleküler şaperon varlığı yokluğu (siyah çubuklar) ve (kırmızı bar) refolding yüzdesini temsil eder. Yokluğunda ve varlığında zaman ve refolding arasında B. Korelasyon (kırmızı lhastabakıcı ine). R kare değerleri kötü bir korelasyon göstermektedir. Şekil 4A düzgün yapılan bir deneyin temsili bir sonuç göstermektedir. Kontrol (siyah çubuklar) ve moleküler hastabakıcı-transfekte hücreleri (kırmızı bar) her ikisi de zaman refolding protein bir artış göstermemiştir. Buna ek olarak, moleküler şaperon transfeksiyon refolding bir artışa yol açmamıştır. Bu zayıf bir korelasyon Şekil teyit edilir. Kontrolü (siyah çizgi) ve moleküler hastabakıcı-transfekte hücreler (kırmızı çizgi) için sırasıyla 0,6619 ve 0,1882 r kare değeri gösteren 4B.

<ol>
	<li>Bukau, B., Weissman, J., Horwich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+chaperones+and+protein+quality+control.">Molecular chaperones and protein quality control.</a> Cell. 125, 443-443 (2006).</li><li>Ritossa, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovery+of+the+heat+shock+response.">Discovery of the heat shock response.</a> Cell Stress Chaperones. 1, 97-97 (1996).</li><li>Hendrick, J. P., Hartl, F. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+chaperone+functions+of+heat-shock+proteins.">Molecular chaperone functions of heat-shock proteins.</a> Annu. Rev. Biochem. 62, 349-349 (1993).</li><li>Fuqua, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heat+shock+proteins+and+drug+resistance.">Heat shock proteins and drug resistance.</a> Breast. Cancer. Res. Treat. 32, 67-67 (1994).</li><li>Guzhova, I., Margulis, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hsp70+chaperone+as+a+survival+factor+in+cell+pathology.">Hsp70 chaperone as a survival factor in cell pathology.</a> Int. Rev. Cytol. 254, 101-101 (2006).</li><li>Whitesell, L., Lindquist, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HSP90+and+the+chaperoning+of+cancer.">HSP90 and the chaperoning of cancer.</a> Nat. Rev. Cancer. 5, 761-761 (2005).</li><li>Konstantinopoulos, P. A., Papavassiliou, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=17-AAG:+mechanisms+of+antitumour+activity.">17-AAG: mechanisms of antitumour activity.</a> Expert. Opin. Investig. Drugs. 14, 1471-1471 (2005).</li><li>Galluzzi, L., Giordanetto, F., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+HSP70+for+cancer+therapy.">Targeting HSP70 for cancer therapy.</a> Mol. Cell. 36, 176-176 (2009).</li><li>Ozacmak, V. H., Barut, F., Ozacmak, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melatonin+provides+neuroprotection+by+reducing+oxidative+stress+and+HSP70+expression+during+chronic+cerebral+hypoperfusion+in+ovariectomized+rats.">Melatonin provides neuroprotection by reducing oxidative stress and HSP70 expression during chronic cerebral hypoperfusion in ovariectomized rats.</a> J. Pineal. Res. 47, 156-156 (2009).</li><li>Schroder, H., Langer, T., Hartl, F. U., Bukau, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DnaK,+DnaJ+and+GrpE+form+a+cellular+chaperone+machinery+capable+of+repairing+heat-induced+protein+damage.">DnaK, DnaJ and GrpE form a cellular chaperone machinery capable of repairing heat-induced protein damage.</a> EMBO. J. 12, 4137-41 (1993).</li><li>Thulasiraman, V., Matts, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+geldanamycin+on+the+kinetics+of+chaperone-mediated+renaturation+of+firefly+luciferase+in+rabbit+reticulocyte+lysate.">Effect of geldanamycin on the kinetics of chaperone-mediated renaturation of firefly luciferase in rabbit reticulocyte lysate.</a> Biochemistry. 35, 13443-13443 (1996).</li><li>Howarth, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hsp40+molecules+that+target+to+the+ubiquitin-proteasome+system+decrease+inclusion+formation+in+models+of+polyglutamine+disease.">Hsp40 molecules that target to the ubiquitin-proteasome system decrease inclusion formation in models of polyglutamine disease.</a> Mol. Ther. 15, 1110-1110 (2007).</li><li>Nollen, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bag1+functions+in+vivo+as+a+negative+regulator+of+Hsp70+chaperone+activity.">Bag1 functions in vivo as a negative regulator of Hsp70 chaperone activity.</a> Mol. Cell. Biol. 20, 1083-1083 (2000).</li></ol>

Yazarlar ifşa etmek başka bir şey var.

Bu çalışmada, moleküler şaperonlar içi refolding aktivitesini ölçmek için bir protokol sunulmuştur. Şekil bakış gösterildiği gibi tüm testi 3 ila 4 gün içinde yapılabilir. 1. Ateş böceği ve renilla lusiferaz tarafından üretilen ışık sinyali sağlamlık ve doğrusallık, tekrarlanabilirlik protokol için sağlam bir temel temsil eder. Testin kritik adım, moleküler hastabakıcı ve ateşböceği lusifer...

Bu deneme için bir Luminometre formu Perkin Elmer &#39;1420 Lüminesans Sayaç &#39;Vektör Light&#39; kullanıldı Luminometre Programları: Renilla: Pompa 1, 100 ul enjeksiyon Reaksiyon Tamponu: Pump1, 70 ul enjeksiyon Luciferase: Pump2, 30μl enjeksiyon Tamponlar çift distile su bu stok solüsyonları hazırlamak için: <ul style="list-style:none"><li> 1M MgSO 4: 1 litre 246,48 g MgSO 4 * 7H 2 O </li><li> - 0,5 M EGTA: 1 litre 190,18 g EGTA </li><li> - 1M KH 2 PO 4: 1 litre 136,09 g KH 2 PO 4 </li><li> - 1M K2 HPO 4: 228,23 g K 2 HPO 4 * 1 litre 3H 2 O </li><li> - 5M NaCl: 1 litre 292,2 g NaCl </li><li> - 0,5 M EDTA: 1 litre 186,12 g EDTA * 2H 2 O &nbsp;</li></ul> Gly-Gly-tampon: <ul style="list-style:none"><li> - 25mm Glycylglycin </li><li> - 15mm MgSO 4 </li><li> - 4mm EGTA </li></ul> Için 1 litre Glycylglycin kullanımı 3,3 g, 1M MgSO4 çözüm ve 0,5 M EGTA çözüm, 8 ml 15ml. Su içinde çözün, 7,8 pH ayarlamak ve toplam hacim 1 litre getirmek. Renilla / Coelenterazine tampon reaksiyon tamponu: <ul style="list-style:none"><li> &amp; Nbsp; 13,4 mM KH 2 PO 4 </li><li> KH 2 PO 4 - 86,6 mM </li><li> - 0,5 M NaCl </li><li> - 1mm EDTA </li></ul> 1 litre 1M KH 2 PO 4 çözümü kullanmak 13,4 ml, 86,6 ml, 5M NaCl çözeltisi ve 2 ml 0,5 M EDTA çözeltisi 100ml 1M bir K 2 HPO 4 çözüm . <table border="1"><tr><td></td><td> Şirket </td><td> Katalog / Ürün Numarası: </td></tr><tr><td> DMEM (Dulbecco&#39;nun Modifiye Eagle Orta 1X) </td><td> Gibco </td><td> 41966029 </td></tr><tr><td> Fetal Bovine Serum Altın </td><td> PAA </td><td> A15-151 </td></tr><tr><td> X-treme Gen 9 DNA Transfeksiyon Reaktif </td><td> Roche </td><td&gt; 06365809001 </td></tr><tr><td> PBS Dulbecco&#39;nun Fosfat Tuzlu 1X Tamponlu </td><td> Gibco </td><td> 14190-094 </td></tr><tr><td> MOPS 3 - (N-morfolino) propan sülfonik asit </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> M1254 </td></tr><tr><td> Cycloheximide </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C7698 </td></tr><tr><td> Pasif Lizis Tampon 5X </td><td> Promega </td><td> E194A </td></tr><tr><td> Glycylglycin EGTA MgSO 4 (MgSO 4 * 2 O 7H) </td><td> Sigma-Aldrich Roth Roth </td><td> G7278 3054,2 P027.1 </td></tr><tr><td> KH 2 PO 4 K 2 HPO 4 (K 2 HPO 4 * 3H 2 O) NaCl EDTA </td><td> Roth Roth Roth Roth </td><td> 3904,1 6878,2 3957,1 8043,1 </td></tr><tr><td> Luciferase Firefly </td><td> Biosynth </td><td> L8200 </td></tr><tr><td> Coelenterazine </td><td> Biosynth </td><td> C7000 </td></tr><tr><td> DTT (dithiothreitol) </td><td> Roth </td><td> 6908,2 </td></tr><tr><td> ATP (adenozin trifosfat) </td><td> Roche </td><td> 10519987001 </td></tr></table>

intracellular refolding assay

Bu protokol, bir hücre tabanlı bir sistem ve inhibitör / uyarıcı aktiviteye sahip bileşikler olası etkileri içinde moleküler şaperonlar enzimatik aktivitesini ölçmek için bir yöntem açıklanır. Moleküler şaperonlar 1 katlama protein yönetmelikte yer alan proteinler ve ısı şok 2, besin açlık ve kimyasallar / zehirler 3 maruz kalma gibi stres hakaretler üzerine hücre sağkalım teşvik çok önemli bir rol var. Bu nedenle şaperonlar tümör gelişimi, kanser hücreleri 4 chemioresistance yanı sıra nörodejenerasyon 5 gibi etkinliklere yer bulunur. Bu nedenle, bu enzimlerin aktivitesini inhibe veya teşvik etmek için küçük moleküllerin tasarımı, kanser tedavisi 7 ve nörodejeneratif hastalıkların 9 için en çok çalışılan stratejileri biridir. Burada açıklanan belirli bir moleküler şaperon refolding aktivitesini ölçmek ve comp etkisini araştırmak için tahlil imkanı sunarfaaliyet ounds. Bu yöntemde, incelenen moleküler şaperon gen ateşböceği lusiferaz gen ekspresyon vektörü kodlama ile birlikte transfekte. Zaten denatüre ateşböceği lusiferaz moleküler şaperonlar 10,11 refolded olabileceği tarif edilmiştir. Transfeksiyon kontrolü normalleştirilmesi gibi, renilla lusiferaz gen için bir vektör kodlama transfekte. Bu protokolü açıklanan tüm transfections HEK-293 hücrelerinde X-treme Gen 11 (Roche) ile yapılmaktadır. İlk adımda, protein sentezi, Siklohekzimidsiz hücrelerin tedavi inhibe edilir. Bundan sonra açığa çıkmasını protein 30 dakika boyunca 45 ° C&#39;de ısı şok indüklenir. 37 ° kurtarma üzerine ° C, proteinler yeniden katlanmış ve onların aktif konformasyon ateşböceği lusiferaz faaliyet okuma olarak kullanılır: daha fazla ışık olacak, daha fazla protein orijinal konformasyon yeniden kazanmış olacaktır. Isıl şok hücreleri referans (refolded,% 100 olarak belirlenmiştirlusiferaz).

Watch this Scientific Journal Video about Intracellular Refolding Assay at JoVE.com

Intracellular Refolding Assay

Bu protokol ısı şok sonra hücre içi protein refolding ölçmek için bir yöntem açıklanmıştır. Bu yöntem, faaliyetlerini etkilemek için moleküler şaperonlar ve bunların eş-faktörleri veya bileşikleri gibi foldases incelemek için kullanılabilir. Firefly lusiferaz aktivitesini muhabir olarak hastabakıcı refolding aktivitesini ölçmek için kullanılır.

Hücre içi Refolding Testi

This protocol describes a method to measure the enzymatic activity of molecular chaperones in a cell-based system and the possible effects of compounds ...

Research

JoVE Journal

Biology

14.0K Görüntüleme.  Karlsruhe Institute of Technology. Bu protokol ısı şok sonra hücre içi protein refolding ölçmek için bir yöntem açıklanmıştır. Bu yöntem, faaliyetlerini etkilemek için moleküler şaperonlar ve bunların eş-faktörleri veya bileşikleri gibi foldases incelemek için kullanılabilir. Firefly lusiferaz aktivitesini muhabir olarak hastabakıcı refolding aktivitesini ölçmek için kullanılır.