Drosophila Melanogaster'In Embriyodan Yetişkine Canlılığını Değerlendirmek Için Doğrudan ve Basit Bir Yöntem

Bu savarın birincil avantajı basitlik ve doğruluk, çünkü gıda şişesine aktarmak için bir embriyo durulama gerektirmez ve teknik hatalardan kaynaklanan kayıpları önler. Bu protokol uzman teknik beceriler gerektirmez. Ancak, uygun zamanlama ve dikkatli su transferi doğruluğu ve tekrarlanabilirliği için önemlidir.

Bu prosedürü gösteren Antonio Rockwell, benim laboratuvar dan yeni mezun doktora öğrencisi olacaktır. İşleme başlamadan önce, üzüm agarını 35 milimetrelik petri kabına yarı dolu dökün ve agarın bir saat katılaşmasını bekleyin. Agar katılaşmış olduğunda, hafifçe plaka nın dışında etrafında agar yüzeyini çizik için küçük bir plastik bıçak kullanın, plakanın ortasında çizikler serbest bırakarak.

Sonra yemeğin ortasına taze hazırlanmış maya ezmesi küçük bir miktar yerleştirin ve bir embriyo toplama mini kafes içine çanak yerleştirin. Embriyo toplama için, ilk 24 saat boyunca toplama kafes içinde iki bakire Drosophila kadın ve bir genç erkek yerleştirin. Ertesi gün, embriyo aramak için agar plakaalt inceleyin.

Embriyolar döşenmişse, agar plakasını nemli bir odaya aktarın ve dehidratasyondan kaçınmak için plakayı kapakla kapatın. Birkaç gün döşenmesi için, toplama kafesi içine yeni bir agar plaka yerleştirin. Yumurtadan çıkan embriyo ve L1 larvalarının sayısını belirlemek için mikroskobu kullanın ve embriyoları tüm yumurtadan çıkıp L1 larvalarına dönüşene kadar oda sıcaklığında nemli odaya geri döndürün.

48 saat sonra, yumurtadan çıkan embriyo ve L1 larvalarının sayısını sayın ve petri kabından üzüm agarının diskini dikkatlice çıkarmak için bir spatula kullanın, diski barındıracak kadar büyük bir besin şişesinde l1 tarafını gıdanın üzerine yerleştirin. Sonra dikkatle kalan larvalar için Petri çanak inceleyin. L2 ve L3 larvalarının gıdaya doğru giderken gözlemlenebildiği doğrulanın.

Daha fazla yetişkin gözlemlenene kadar saymaya devam eden ve sonraki nesli saymaktan kaçınarak pupa ve yetişkin Drosophila'nın sayısını kaydedin. Sonra bir ki-kare analizi gerçekleştirin. Null hipotez% 100 canlılık varsayar, yetişkin sayısı yumurtadan embriyo sayısına eşit olacak ve L1 başlangıçta kaydedilmiş ve gıda şişeleri aktarılır.

Agar şişenin yan tarafına yerleştirildiğinde, embriyo ve larvaların çoğu yetişkinler için olgun değildir, muhtemelen üzüm agar disk dehidratasyon nedeniyle. Üzüm agarı, gıda yüzeyi ile doğrudan temas halinde şişenin içine yüz üstü yerleştirildiğinde, agar şişenin içindeki anlık gıdanın nemi ile temas halindeyken sulu kaldığı ndan, sinalın %6'sından azı genellikle kaybolur. Yabani tip ve mutant soyundan gelişimi karşılaştıran bu temsili deneyde, mutant soyundan yaklaşık %91'i bu yöntemle yetişkinliğe erişirken, yabani sineklerin soyundan gelen singenin %94'ü bu yöntemle olgunlaşmıştır.

Agar diskembriyo tarafını gıda şişesine aktarmayı ve sonra da transfer edilemeyen kalan larvalar için boş Petri kabını kontrol etmeyi unutmayın. Bir diğer önemli adım da, dehidratasyonu önlemek için agar diskini embriyo toplama mini kafeslerinden üzüm agar plakasını çıkardıktan en geç 48 saat sonra bir gıda şişesine aktarmaktır.