Aşağıdaki deney, karabiber bitkilerinde Phytophthora capsici için etkili bir aşılama ve hassas örnekleme yöntemi sunmaktadır. Tipik bir odunsu asma olan karabiber, ekonomik açıdan önemli bir baharat ürünüdür. Karabiber üretimi çoğunlukla Phytophthora capsici'nin neden olduğu kök çürüklüğü hastalığından etkilenir ve endüstriyel gelişmeyi ciddi şekilde etkilemiştir.
Karabiber bitkilerinde Phytophthora capsici için etkili bir aşılama ve hassas bir örnekleme sistemi, bitki-patojen etkileşiminin incelenmesi için önemlidir. Bu çalışmanın temel amacı, karabiberin bazal başının Phytophthora capsici ile aşılandığı ayrıntılı bir metodolojiyi göstermek ve ayrıca odunsu asma bitkilerinin aşılanması için bir referans sağlamaktır. Bu yöntem, toprak damlaması veya kök daldırma gibi geleneksel aşılama yönteminin getirdiği dengesizliği çözmek için daha iyi bir yol sağlar.
Deneysel prosedürler. Karabiber kesimleri iki ay boyunca kontrollü ortamda ekilir. Alt kültür Phytophthora capsicive ve 25 santigrat derecenin altında beş gün boyunca kuluçkaya yatırın.
Enfeksiyon gününde, agar blokları iğne tarafından yapıştırılan üç delik üzerinde kaplanır. Ve son olarak, hastalık semptomlarını karakterize edin. Karabiber kesme tesislerinin enfeksiyon için hazırlanması.
Ortotropik dalları 40 santimetre uzunluğunda ve 0,5 santimetre çapında kesin ve alt düğümlerdeki plajiyotropik dalları steril bıçak ve secateur ile çıkarın. Kesilen dal, su kaybını azaltmak için üstte iki düğüm ve beş yaprak içermelidir. Üst kısmı düz bir kesime ve alt kısmı eğik bir kesime kesin.
Karabiber kesiminin köklenme substratı, gübresi, koyun gübresi vb. gibi toprak ve hayvan gübresini içeren bir karışım halinde bire bir oranında hazırlandı. Toprak 20 dakika boyunca yaklaşık 121 santigrat derecede otoklavlandı. Köklenme substratlarını yerleştirmek için 30 santimetre çapında ve 50 santimetre yüksekliğinde üreme torbalarını kullanın.
Substratları doldurmak için 50 derecelik bir eğim hazırlayın. Kesimler, substratın altında üçten fazla düğüm bulunan 50 derecelik bir açıyla yerleştirildi. Köklenme ortamı ile kaplandılar ve yardımcı kısım ortama yapışmalıdır.
Son olarak, kesimler tamamen sızdı. Kesimi yerleştirmek için düz kesim benimsendi. Phytophthora capsici kültürlerinin hazırlanması.
Hastalıksız patatesleri seçin. Patatesleri temizleyin ve küçük kareler halinde kesin. 200 gram patatesi 800 mililitre çift damıtılmış suya koyun ve 20 dakika kaynatın.
Sonra karışımı süzün. 20 gram dekstroz ekleyin. Karışımı bir litreye çift damıtılmış suyla doldurun.
Filtratın içine 15 gram agar tozu ekleyin. Ortamı şişelere dağıtın ve Parafilm kullanarak kapatın. Ortamı 20 dakika boyunca 121 santigrat derecede otoklavlayın.
Hesaplanan patates agar ortamı, Petri çanak tabaklarına dağıtıldı ve katılaşma için steril tezgahta soğutuldu. Aşılama iğnesi, alkol yakan lamba kullanılarak ısıtılarak ve birkaç saniye soğutularak sterilize edildi. Steril aşılama kullanarak küçük mantar örnekleri alın ve PDA'ya yerleştirin.
Miselyum plakanın yaklaşık dörtte üçünü kaplar. Kültürler daha fazla deney için hazır. Karabiber enfeksiyonu.
Substratın yüzeyinden beş santimetre uzaktaki konum, kuluçka noktası olarak kabul edildi. Kuluçka yeri, enfektif sürenin uzamasını önlemeyi amaçlayan kökten uzak olmamalıdır. Pinpricking'in ayrıntılı adımları aşağıdaki gibidir.
Bir tıpa delici kullanılarak Phytophthora capsici'nin bir miselyum peleti toplandı. Özellikle, plakanın kenarındaki yeni geliştirilen miselyum peletleri, daha yüksek enfektif aktiviteleri nedeniyle tercihen seçilmiştir. Bir sapı% 75 etanol kullanarak sterilize edin ve aşılama iğnesini kullanarak sterilize edilmiş konumda üç üçgen gözenek alın.
Aşılama yerindeki üç üçgen gözenek, aşılama iğnesi kullanılarak sıkışmış ve üç gözenek üzerinde misel peletleri kaplanmıştır. Sekiz saat sonra, gözenekler genel olarak siyaha döndü. İnkübasyonun uzamasıyla genişleme genişletildi.
Yedi ila on gün sonra, yapraklar sararır ve karabiber ölene kadar düşer. Sunum sonuçları aşağıdaki gibidir. Enfeksiyondan sonra, yaprak sararması ve solgunluğu, ksilem kahverengileşmesi ve damar kararması dahil olmak üzere karabiber bitkilerinde semptomlar görülür.
Genlerin çoğu, Phytophthora capsici ile aşılamadan sonra, kontrol grubuna kıyasla farklı şekilde ifade edildi. Enfekte dokuların histopatolojik analizi, Phytophthora capsici'nin ksilemde kolonize olduğunu göstermiştir. Son. Bu çalışmada, etkili bir aşılama sağlamak için zarar görmesini sağlamak için bazal kafayı iğnelemek ve karabiberde ikiye katlama sistemi kullanılmıştır.
Bu arada, bu protokol aynı zamanda inkübasyon için bir referans sağlamanın daha etkili bir yolunu temsil eder-Yöntemimiz daha fazla zaman verebilir ve daha kısa bir süre çalışabilir. Bu protokol, bir bitki ile toprak kaynaklı patojen arasında güçlü bir etkileşim sağlayan daha iyi sonuç sağlar. Bitkiler ve patojenleri arasındaki dinamik süreci tespit etmek için görünür ve uygundur.
Yöntemimizde, karabiber bitkisinin bazal kafasını onlara zarar vermesi için iğnelemeye başlıyoruz. Daha sonra, hasarlı alan doğrudan Phytophthora capsici ile kaplanır ve nemi korur. Böylece patojen bitkiyi enfekte edebilir.
Ayrıca, tarımsal hassas ıslahta bitkiler ve diğer toprak kaynaklı bitki patojenleri arasındaki etki tarzının incelenmesi için umut verici bir yol sunuyoruz.
