A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

توفر الدراسة الحالية بروتوكولا معدلا لعزل الضامة الزليلية والخلايا الليفية من أنسجة التهاب المفاصل الالتهابي في الفئران.

Abstract

التهاب المفاصل الروماتويدي هو أحد أمراض المناعة الذاتية التي تؤدي إلى التهاب مزمن في المفاصل. تلعب البلاعم الزليلية والخلايا الليفية الزليلية أدوارا مركزية في التسبب في التهاب المفاصل الروماتويدي. من المهم فهم وظائف كل من مجموعات الخلايا للكشف عن الآليات الكامنة وراء التقدم المرضي والمغفرة في التهاب المفاصل الالتهابي. بشكل عام ، يجب أن تحاكي الظروف التجريبية في المختبر البيئة في الجسم الحي قدر الإمكان. تم استخدام الخلايا المشتقة من الأنسجة الأولية في التجارب التي تميز الخلايا الليفية الزليلية في التهاب المفاصل. في المقابل ، في التجارب التي تبحث في الوظائف البيولوجية للبلاعم في التهاب المفاصل الالتهابي ، تم استخدام خطوط الخلايا ، والبلاعم المشتقة من نخاع العظم ، والبلاعم المشتقة من الدم الوحيد. ومع ذلك ، فمن غير الواضح ما إذا كانت هذه الضامة تعكس بالفعل وظائف الضامة المقيمة في الأنسجة. للحصول على الضامة المقيمة ، تم تعديل البروتوكولات السابقة لعزل وتوسيع كل من الضامة الأولية والخلايا الليفية من الأنسجة الزليلية في نموذج فأر التهاب المفاصل الالتهابي. قد تكون هذه الخلايا الزليلية الأولية مفيدة للتحليل في المختبر لالتهاب المفاصل.

Introduction

التهاب المفاصل الروماتويدي (RA) هو أحد أمراض المناعة الذاتية التي تتميز بتضخم الغشاء الزليلي ، مما يؤدي إلى تدمير المفاصل 1,2. توجد البلاعم والخلايا الليفية المقيمة في الأنسجة في الغشاء الزليلي الصحي للحفاظ على توازن المفاصل. في مرضى التهاب المفاصل الروماتويدي ، تتكاثر الخلايا الليفية الزليلية (SFs) ، وتتسلل الخلايا المناعية ، بما في ذلك الخلايا الوحيدة ، إلى الغشاء الزليلي وسائل المفاصل ، وهي عمليات مرتبطة بالالتهاب1،3،4. يتم تنشيط الضامة الزليلية (SMs) ، والتي تشمل الضامة المقيمة والبلاعم المشتقة من الخلايا الوحيدة ....

Protocol

تمت الموافقة على التجارب التي شملت الحيوانات من قبل لجنة التجارب على الحيوانات بجامعة إهيمه وتم إجراؤها وفقا لإرشادات جامعة إهيمه للتجارب على الحيوانات (37A1-1 * 16).

1. إعداد الأدوات والكواشف ووسط الاستزراع

  1. تحضير وسط الاستزراع على النحو التالي: مكمل وسط النسر المعدل من Dulbecco (DMEM) مع 10٪ مصل بقري جنيني (FBS) و 1٪ محلول مضاد حيوي مضاد حيوي (مضاد للطهرو).
  2. تحضير وسط الهضم على النحو التالي: تكملة وسط الاستزراع مع 1 ملغ / مل كولاجيناز من النوع الرابع. اضبط تركيز كولاجيناز قبل الاستخدام مباشرة.
  3. خفف الكولاجين من النوع I-C إلى تركيز 0.15 مجم / مل بمحلول 1 مللي مول حمض الهيدروكلوريك. أطباق ثقافة ال....

النتائج

خضعت إناث الفئران C57BL / 6 في عمر 7-8 أسابيع لالتهاب المفاصل الناجم عن الأجسام المضادة للكولاجين. تم عزل الخلايا الشبيهة بالبلاعم والخلايا الشبيهة بالخلايا الليفية بشكل مستقل عن أنسجة التهاب المفاصل الالتهابي وفقا للإجراء الموصوف أعلاه (الشكل 2 أ ، ب). تم استخدام الخل.......

Discussion

تعمل هذه الطريقة التي تم تطويرها هنا على تحسين التقنيات السابقة لعزل كل من SFs من التهاب المفاصل في الفئران والبلاعم المقيمة من عدد من الأعضاء7،11. يمكن للطريقة المعدلة عزل كل من الضامة والخلايا الليفية من الغشاء الزليلي الالتهابي بنقاوة عالية ، وهي بسيطة وقا.......

Disclosures

يعلن أصحاب البلاغ أنه ليس لديهم مصالح متنافسة.

Acknowledgements

يشكر المؤلفون الموظفين في قسم دعم البحوث الطبية ، ومركز دعم البحوث المتقدمة (ADRES) ، وأعضاء قسم الفيزيولوجيا المرضية التكاملية ، مركز علوم البروتينات (PROS) ، جامعة إهيمه ، على مساعدتهم الفنية ودعمهم المفيد. تم دعم هذه الدراسة جزئيا من قبل الجمعية اليابانية لتعزيز العلوم (JSPS) KAKENHI منح JP17K17929 ، JP19K16015 ، JP21K05974 (إلى NS) و JP23689066 ، JP15H04961 ، JP15K15552 ، JP17K19728 ، JP19H03786 (إلى YI) ؛ منح من مؤسسة أوساكا للبحوث الطبية للأمراض المستعصية ، ومؤسسة ناكاتومي ، والجمعية اليابانية لأبحاث العظام والمعادن (JSBMR) منحة النجوم الصاعدة ، ومؤسسة سوميتومو ، ومؤسسة سينشين للبحوث الطبية ، ومؤسسة موتشيدا التذكارية (إلى NS) ؛ ومنحة مؤسسة تاكيدا للعلوم للبحوث ا....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
5.0 g/L Trypsin/5.3 mmol/L EDTA solutionnacalai tesque35556-44Diluted with HBSS
Antibiotic–antimycotic (anti/anti)Gibco15240-062
Butterfly needleTERUMOSV-23DLK23G
Cell strainerFalcon35234040 µm pore, Nylon
Cellmatrix Type I-CNitta gelatin637-00773Type I-C collagen
Centriguge tube 15TPP9101415 mL tube
Centriguge tube 50TPP9105050 mL tube
Collagenase from C. HistolyticumSigmaC5138Type IV collagenase
Dulbecco’s Modified Eagle Medium GlutaMax (DMEM)Gibco10569-010
Fetal bovine serum (FBS)SIGAM173012Heat inactivation was performed
Hanks' balanced salt solution (HBSS)Wako085-09355
ScissorsBio Research CenterPRI28-1525A
Tissue culture dish 40TPP93040For cell culture
Tissue culture dish 60TPP92006For cell culture
TweezersKFI1-9749-31Fine-point
TweezersBio Research CenterPRI28-1522Serrated tip
ZEISS Stemi 305ZEISSSTEMI305-EDUStereomicroscope

References

  1. Smolen, J. S., Aletaha, D., McInnes, I. B. Rheumatoid arthritis. Lancet. 388 (10055), 2023-2038 (2016).
  2. McInnes, I. B., Schett, G. The pathogenesis of rheumatoid arthritis. The New England Journal of Medicine. 365 (23), 2205-2219 (2011).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

192

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved