Isolamento e coltura di macrofagi sinoviali primari e fibroblasti da tessuto di artrite murina

Riepilogo

Il presente studio fornisce un protocollo modificato per isolare i macrofagi sinoviali e i fibroblasti dal tessuto dell'artrite infiammatoria murina.

Abstract

L'artrite reumatoide è una malattia autoimmune che porta all'infiammazione cronica delle articolazioni. I macrofagi sinoviali e i fibroblasti sinoviali hanno ruoli centrali nella patogenesi dell'artrite reumatoide. È importante comprendere le funzioni di entrambe le popolazioni cellulari per rivelare i meccanismi alla base della progressione patologica e della remissione nell'artrite infiammatoria. In generale, le condizioni sperimentali in vitro dovrebbero imitare il più possibile l'ambiente in vivo . Le cellule primarie derivate dai tessuti sono state utilizzate in esperimenti che caratterizzano i fibroblasti sinoviali nell'artrite. Al contrario, negli esperimenti che studiano le funzioni biologiche dei macrofagi nell'artrite infiammatoria, sono state utilizzate linee cellulari, macrofagi derivati dal midollo osseo e macrofagi derivati dai monociti del sangue. Tuttavia, non è chiaro se tali macrofagi riflettano effettivamente le funzioni dei macrofagi residenti nei tessuti. Per ottenere macrofagi residenti, i protocolli precedenti sono stati modificati per isolare ed espandere sia i macrofagi primari che i fibroblasti dal tessuto sinoviale in un modello murino di artrite infiammatoria. Queste cellule sinoviali primarie possono essere utili per l'analisi in vitro dell'artrite infiammatoria.

Introduzione

L'artrite reumatoide (RA) è una malattia autoimmune caratterizzata da iperplasia della sinovia, che porta alla distruzione articolare ^1,2. I macrofagi e i fibroblasti residenti nei tessuti sono presenti nella sinovia sana per mantenere l'omeostasi articolare. Nei pazienti con AR, i fibroblasti sinoviali (SF) proliferano e le cellule immunitarie, compresi i monociti, si infiltrano nella sinovia e nel liquido articolare, processi associati all'infiammazione ^1,3,4. I macrofagi sinoviali (SM), che comprendono i macrofagi ....

Protocollo

Gli esperimenti che coinvolgono animali sono stati approvati dall'Animal Experiment Committee dell'Università di Ehime e sono stati eseguiti in conformità con le linee guida dell'Università di Ehime per gli esperimenti sugli animali (37A1-1 * 16).

1. Preparazione di strumenti, reagenti e terreno di coltura

1. Preparare il terreno di coltura come segue: integrare Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM) con siero bovino fetale al 10% (FBS) e soluzione antibiotico-antimicotica all'1% (anti-anti).
2. Preparare il mezzo di digestione come segue: integrare il terreno di coltura con 1 mg/ml di collagenasi di tipo IV. R....

Discussione

Questo metodo sviluppato qui migliora le tecniche precedenti per isolare sia le SF dall'artrite murina che i macrofagi residenti da un certo numero di organi ^7,11. Il metodo modificato può isolare sia i macrofagi che i fibroblasti dalla sinovia infiammatoria con elevata purezza ed è semplice e riproducibile. Poiché il metodo non richiede strumenti complessi come uno smistatore cellulare, chiunque può condurlo. Inoltre, la presente tecnica evita preoccupazioni.......

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
5.0 g/L Trypsin/5.3 mmol/L EDTA solution	nacalai tesque	35556-44	Diluted with HBSS
Antibiotic–antimycotic (anti/anti)	Gibco	15240-062
Butterfly needle	TERUMO	SV-23DLK	23G
Cell strainer	Falcon	352340	40 µm pore, Nylon
Cellmatrix Type I-C	Nitta gelatin	637-00773	Type I-C collagen
Centriguge tube 15	TPP	91014	15 mL tube
Centriguge tube 50	TPP	91050	50 mL tube
Collagenase from C. Histolyticum	Sigma	C5138	Type IV collagenase
Dulbecco’s Modified Eagle Medium GlutaMax (DMEM)	Gibco	10569-010
Fetal bovine serum (FBS)	SIGAM	173012	Heat inactivation was performed
Hanks' balanced salt solution (HBSS)	Wako	085-09355
Scissors	Bio Research Center	PRI28-1525A
Tissue culture dish 40	TPP	93040	For cell culture
Tissue culture dish 60	TPP	92006	For cell culture
Tweezers	KFI	1-9749-31	Fine-point
Tweezers	Bio Research Center	PRI28-1522	Serrated tip
ZEISS Stemi 305	ZEISS	STEMI305-EDU	Stereomicroscope