Выделение и культивирование первичных синовиальных макрофагов и фибробластов из ткани мышиного артрита

Резюме

В настоящем исследовании представлен модифицированный протокол выделения синовиальных макрофагов и фибробластов из ткани воспалительного артрита мышей.

Аннотация

Ревматоидный артрит – это аутоиммунное заболевание, которое приводит к хроническому воспалению суставов. Синовиальные макрофаги и синовиальные фибробласты играют центральную роль в патогенезе ревматоидного артрита. Важно понимать функции обеих клеточных популяций, чтобы выявить механизмы, лежащие в основе патологического прогрессирования и ремиссии при воспалительном артрите. В целом, условия эксперимента in vitro должны максимально имитировать среду in vivo . Первичные клетки тканевого происхождения были использованы в экспериментах, характеризующих синовиальные фибробласты при артрите. Напротив, в экспериментах, изучающих биологические функции макрофагов при воспалительном артрите, использовались клеточные линии, макрофаги костного мозга и моноцитарные макрофаги крови. Однако неясно, действительно ли такие макрофаги отражают функции тканерезидентных макрофагов. Для получения резидентных макрофагов предыдущие протоколы были модифицированы для выделения и расширения как первичных макрофагов, так и фибробластов из синовиальной ткани в мышиной модели с воспалительным артритом. Эти первичные синовиальные клетки могут быть полезны для анализа воспалительного артрита in vitro .

Введение

Ревматоидный артрит (РА) – аутоиммунное заболевание, характеризующееся гиперплазией синовиальной оболочки, приводящей к разрушению сустава ^1,2. Тканевые резидентные макрофаги и фибробласты присутствуют в здоровой синовиальной оболочке для поддержания гомеостаза суставов. У пациентов с РА синовиальные фибробласты (СФ) пролиферируют, а иммунные клетки, включая моноциты, проникают в синовиальную оболочку и суставную жидкость, процессы, связанные с воспалением ^1,3,4. Синовиальные макрофаги (СМ), к которым относятся резиде....

протокол

Эксперименты с участием животных были одобрены Комитетом по экспериментам на животных Университета Эхимэ и проводились в соответствии с Руководством Университета Эхимэ по проведению экспериментов на животных (37A1-1*16).

1. Подготовка инструментов, реагентов и питательных сред

1. Приготовьте питательную среду следующим образом: дополните модифицированную орлиную среду (DMEM) Dulbecco 10% фетальной бычьей сывороткой (FBS) и 1% раствором антибиотика-антимикотика (анти-анти).
2. Среду для переваривания готовят следующим образом: добавляют в питательную среду 1 мг/мл коллагеназы IV типа. Регулируйте концентрацию к....

Результаты

Самки мышей C57BL/6 в возрасте 7-8 недель перенесли артрит, индуцированный коллагеновыми антителами. Макрофагоподобные клетки и фибробластоподобные клетки были независимо выделены из ткани воспалительного артрита в соответствии с процедурой, описанной выше (рис. 2А, Б<.......

Обсуждение

Этот метод, разработанный здесь, является улучшением предыдущих методов выделения как СФ из мышиного артрита, так и резидентных макрофагов из ряда органов ^7,11. Модифицированный метод позволяет выделять как макрофаги, так и фибробласты из воспалительной ?.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
5.0 g/L Trypsin/5.3 mmol/L EDTA solution	nacalai tesque	35556-44	Diluted with HBSS
Antibiotic–antimycotic (anti/anti)	Gibco	15240-062
Butterfly needle	TERUMO	SV-23DLK	23G
Cell strainer	Falcon	352340	40 µm pore, Nylon
Cellmatrix Type I-C	Nitta gelatin	637-00773	Type I-C collagen
Centriguge tube 15	TPP	91014	15 mL tube
Centriguge tube 50	TPP	91050	50 mL tube
Collagenase from C. Histolyticum	Sigma	C5138	Type IV collagenase
Dulbecco’s Modified Eagle Medium GlutaMax (DMEM)	Gibco	10569-010
Fetal bovine serum (FBS)	SIGAM	173012	Heat inactivation was performed
Hanks' balanced salt solution (HBSS)	Wako	085-09355
Scissors	Bio Research Center	PRI28-1525A
Tissue culture dish 40	TPP	93040	For cell culture
Tissue culture dish 60	TPP	92006	For cell culture
Tweezers	KFI	1-9749-31	Fine-point
Tweezers	Bio Research Center	PRI28-1522	Serrated tip
ZEISS Stemi 305	ZEISS	STEMI305-EDU	Stereomicroscope