Murin Artrit Dokusundan Primer Sinovyal Makrofaj ve Fibroblastların İzolasyonu ve Kültürü

Özet

Bu çalışma, sinovyal makrofajları ve fibroblastları murin inflamatuar artrit dokusundan izole etmek için modifiye edilmiş bir protokol sunmaktadır.

Özet

Romatoid artrit, eklemlerin kronik iltihaplanmasına yol açan otoimmün bir hastalıktır. Romatoid artrit patogenezinde sinovyal makrofajlar ve sinovyal fibroblastlar merkezi rol oynarlar. İnflamatuar artritte patolojik progresyon ve remisyonun altında yatan mekanizmaları ortaya çıkarmak için her iki hücre popülasyonunun fonksiyonlarını anlamak önemlidir. Genel olarak in vitro deneysel koşullar, mümkün olduğunca in vivo ortamı taklit etmelidir. Primer doku kaynaklı hücreler, artritte sinovyal fibroblastları karakterize eden deneylerde kullanılmıştır. Buna karşılık, inflamatuar artritte makrofajların biyolojik fonksiyonlarını araştıran deneylerde, hücre hatları, kemik iliği kaynaklı makrofajlar ve kan monosit kaynaklı makrofajlar kullanılmıştır. Bununla birlikte, bu tür makrofajların aslında dokuda yerleşik makrofajların işlevlerini yansıtıp yansıtmadığı belirsizdir. Yerleşik makrofajlar elde etmek için, önceki protokoller, inflamatuar artrit fare modelinde sinovyal dokudan hem primer makrofajları hem de fibroblastları izole etmek ve genişletmek için değiştirildi. Bu primer sinovyal hücreler, inflamatuar artritin in vitro analizi için yararlı olabilir.

Giriş

Romatoid artrit (RA), sinovyumun hiperplazisi ile karakterize, eklem yıkımına yol açan otoimmün bir hastalıktır ^1,2. Dokuda yerleşik makrofajlar ve fibroblastlar, eklem homeostazını korumak için sağlıklı sinovyumda bulunur. RA hastalarında, sinovyal fibroblastlar (SF'ler) çoğalır ve monositler de dahil olmak üzere bağışıklık hücreleri, inflamasyonla ilişkili süreçler^olan sinovyum ve eklem sıvısına sızar ^1,3,4. Yerleşik makrofajları ve periferik kan monosit kaynaklı makrofajları içeren sinovyal makrofajlar (SM'ler) ve ....

Protokol

Hayvanları içeren deneyler, Ehime Üniversitesi Hayvan Deneyleri Komitesi tarafından onaylandı ve Ehime Üniversitesi Hayvan Deneyleri Yönergesi'ne (37A1-1*16) uygun olarak gerçekleştirildi.

1. Aletlerin, reaktiflerin ve kültür ortamının hazırlanması

1. Kültür ortamını aşağıdaki gibi hazırlayın: Dulbecco'nun Modifiye Eagle Medium'unu (DMEM) %10 fetal sığır serumu (FBS) ve %1 antibiyotik-antimikotik solüsyon (anti-anti) ile takviye edin.
2. Sindirim ortamını aşağıdaki gibi hazırlayın: kültür ortamını 1 mg / mL kollajenaz tip IV ile destekleyin. Kullanmadan hemen önce kollajenaz konsantrasyonunu ayarlayın.
<....

Tartışmalar

Burada geliştirilen bu yöntem, hem SF'leri murin artritinden hem de yerleşik makrofajları bir dizi organdan izole etmek için önceki teknikleri geliştirir ^7,11. Modifiye yöntem, hem makrofajları hem de fibroblastları enflamatuar sinovyumdan yüksek saflıkta izole edebilir ve basit ve tekrarlanabilir. Yöntem, hücre sıralayıcı gibi karmaşık aletler gerektirmediğinden, herkes bunu gerçekleştirebilir. Ek olarak, mevcut teknik, antikorlarla tedavi .......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
5.0 g/L Trypsin/5.3 mmol/L EDTA solution	nacalai tesque	35556-44	Diluted with HBSS
Antibiotic–antimycotic (anti/anti)	Gibco	15240-062
Butterfly needle	TERUMO	SV-23DLK	23G
Cell strainer	Falcon	352340	40 µm pore, Nylon
Cellmatrix Type I-C	Nitta gelatin	637-00773	Type I-C collagen
Centriguge tube 15	TPP	91014	15 mL tube
Centriguge tube 50	TPP	91050	50 mL tube
Collagenase from C. Histolyticum	Sigma	C5138	Type IV collagenase
Dulbecco’s Modified Eagle Medium GlutaMax (DMEM)	Gibco	10569-010
Fetal bovine serum (FBS)	SIGAM	173012	Heat inactivation was performed
Hanks' balanced salt solution (HBSS)	Wako	085-09355
Scissors	Bio Research Center	PRI28-1525A
Tissue culture dish 40	TPP	93040	For cell culture
Tissue culture dish 60	TPP	92006	For cell culture
Tweezers	KFI	1-9749-31	Fine-point
Tweezers	Bio Research Center	PRI28-1522	Serrated tip
ZEISS Stemi 305	ZEISS	STEMI305-EDU	Stereomicroscope