A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Method Article
يعد وضع الغرسات في نموذج الفئران إجراء تجريبيا أساسيا للبحث السريري. تقدم هذه الدراسة بروتوكولا جراحيا شاملا لزرع غرسات التيتانيوم في قصبة نماذج الفئران المصابة بداء السكري وهشاشة العظام.
لطالما خدم الجرذ كنموذج حيواني قيم في زراعة الأسنان وجراحة العظام ، لا سيما في دراسة التفاعلات بين المواد الحيوية والأنسجة العظمية. غالبا ما يتم اختيار قصبة الفئران بسبب سهولة الوصول الجراحي إليها من خلال طبقات الأنسجة الرقيقة (الجلد والعضلات) والشكل المسطح لوجهها الإنسي ، مما يسهل الإدخال الجراحي للأجهزة داخل العظم. بالإضافة إلى ذلك ، يتيح هذا النموذج تحريض أمراض معينة ، ومحاكاة الحالات السريرية المختلفة لتقييم الاستجابات البيولوجية لظروف الزرع المختلفة مثل الهندسة أو نسيج السطح أو الإشارات البيولوجية. ومع ذلك ، على الرغم من تركيبتها القشرية القوية ، قد تتطلب بعض الأجهزة داخل العظم تعديلات في التصميم والحجم لنجاح عملية الزرع. لذلك ، يعد إنشاء طرق جراحية موحدة لمعالجة كل من الأنسجة الرخوة والصلبة في منطقة الزرع أمرا ضروريا لضمان وضع جهاز الزرع أو المسمار بشكل صحيح ، لا سيما في مجالات مثل طب الأسنان المزروع وجراحة العظام. شملت هذه الدراسة ثمانين فأرا من Sprague Dawley مقسمة إلى مجموعتين بناء على أمراض كل منها: المجموعة 1 المصابة بهشاشة العظام والمجموعة 2 المصابة بداء السكري من النوع 2. تم إجراء عمليات الزرع في 4 أسابيع و 12 أسبوعا ، مع نفس الجراح بعد تقنية جراحية متسقة. لوحظت استجابة بيولوجية إيجابية ، مما يشير إلى الاندماج العظمي الكامل لجميع الغرسات الموضوعة. تؤكد هذه النتائج نجاح البروتوكول الجراحي ، والذي يمكن تكراره لدراسات أخرى ويكون بمثابة معيار لمجتمع المواد الحيوية. والجدير بالذكر أن قيم الاندماج العظمي ظلت مستقرة في كل من 4 أسابيع و 12 أسبوعا لكلا نموذجي المرض ، مما يدل على تكامل دائم للزرع بمرور الوقت والتأكيد على إنشاء اتصال عظمي حميم في وقت مبكر من 4 أسابيع.
يرجع الاختيار الشائع للفئران كمواضيع تجريبية إلى حقيقة أنها سهلة التكاثر وغير مكلفة نسبيا مقارنة بالنماذج الحيوانية الأكبر. إن ظهور إجراءات جديدة ، مثل التكاثر الموثوق للاضطراب ، على سبيل المثال ، هشاشة العظام أو مرض السكري ، يجعل هذا النموذج مفيدا بشكل خاص لتحليل الاستخدام المحتمل للعلاجات و / أو تأثير المرض في الاستجابة البيولوجية للأدوية والأجهزة الجراحية أو الإجراءات1،2.
يحدث اكتساب كتلة عظام الفئران في الغالب خلال الأشهر ال 6 الأولى من الحياة ، على الرغم من أن بعض الباحثين يعتقدون أن العظم الطويل ينمو باستمرار لمدة عام على الأقل مع زيادة تدريجية في الطول1. مع الشيخوخة ، هناك انتقال من النمذجة إلى إعادة البناء ، والذي لا يحدث في جميع الحالات بالتساوي في جميع أنحاء العظام2. تنمو إناث فئران Sprague Dawley بشكل أبطأ من ذكور الفئران وتحقق ذروة وزن أقل من ذكور الفئران1. الاستطالة المستمرة للعظام وديناميكيات إعادة تشكيل العظام المتنوعة في الفئران هي عوامل يجب أخذها في الاعتبار عند معالجة قضايا صحة الإنسان. ومع ذلك ، لم يكن من الممكن حتى الآن العثور على أي بحث تجريبي يظهر إما تطور عظام الفئران مدى الحياة أو عدم قدرة الأنواع على إعادة تشكيل العظام1. إذا بدأت التجربة حوالي 10 أشهر من العمر ، فيجب ترك هامش لا يقل عن 1 مم من صفيحة نمو الساق سليما بسبب نمو العظام الطولي هذا ، وهي مشكلة يجب مراعاتها في دراسات زراعة الأسنان2. الهرمونات هي أيضا معلمة رئيسية في أبحاث العظام لأنه في عمر 8 أشهر ، وجد أن ذكور الفئران لديها عرض عظمي أكبر بنسبة 22٪ وقوة كسر أكبر بنسبة 33٪ من الإناث في الساق3.
وبالتالي ، فإن التكاثر الموثوق به للاضطراب مهم جدا في جراحة العظام وزراعة الأسنان لأن الاندماج العظمي لبرغي العظام أو زراعة الأسنان هو عملية معقدة تعتمد على العديد من العوامل التي تؤثر على الاستجابة الجهازية لزرع الجهاز في العظام. من المعروف أن الاضطرابات الجهازية مثل هشاشة العظام والسكري تؤثر على معدل النجاح في جراحة العظام وزراعة الأسنان ، لذلك يمكن تطبيق التكاثر الموثوق لتلك الاضطرابات في نماذج الفئران لاستكشاف طرق للتغلب على هذه القيود.
إن عظم الساق الجرذ ، نظرا لسهولة الوصول الجراحي ، وحجم العظام المعتدل ، والشكل المسطح على الصفيحة الإنسية ، يجعله مناسبا لتجارب زرع العظام الجراحية 4,5 ، وقد تم استخدامه في العديد من الدراسات البحثية التي تستكشف آثار سطح الزرع على الاندماج العظمي4،5،6. يقيم عدد متزايد من الدراسات التأثيرات على الاندماج العظمي للطلاءات والمواد المضافة إلى سطح الزرع في كل من السليمة7 وفي المعرضة للخطر المصابة بمرض السكري أو هشاشة العظام8،9،10،11،12،13،14.
عدد أجهزة الزرع الموضوعة في قصبة فأر واحد محدود ويمكن أن يختلف حسب نوع الدراسة. اعتمادا على عدد الغرسات أو ظروف الدراسة ، يجب تكييف أبعاد الأجهزة لتقليل الصدمات الجراحية. في الدراسات التي أجريت على غرسة واحدة ، يمكن وضع غرسة بحجم الإنسان تقريبا (قطرها 2.0 مم وطولها من 4 إلى 5 مم) ، ويمكن تحقيق مرساة ثنائية القشرة6،7،15،16. يجب أن تعتمد أبعاد الغرسات في بروتوكولات الغرسات المتعددة حجم غرسة مناسب (قطرها 1.5 مم وطولها 2.5 مم)4,17.
تهدف الدراسة الحالية إلى وصف بروتوكول جراحي موحد لوضع غرسة التيتانيوم على قصبة ساق نموذجين من الفئران: هشاشة العظام ونموذج فئران السكري. علاوة على ذلك ، تسمح هذه الدراسة باختبار البروتوكول الجراحي لتقييم أنواع مختلفة من الوظائف الحيوية لسطح الزرع وتأثيرها على الاندماج العظمي.
تم تقسيم عينة من 80 فأرا إلى مجموعتين. في المجموعة 1 ، تم اختيار 40 أنثى Sprague Dawley التي تم استئصال المبيض بها و 5 صورية ، بمتوسط وزن 484 جم ومتوسط عمر 12 أسبوعا. بناء على توصيات البائعين (انظر جدول المواد) ، بعد ثلاثة أشهر من الخصي ، بدأت التجربة. ضمنت فترة الانتظار هذه اختفاء الهرمونات الجنسية. تم تأكيد هشاشة العظام في وقت الجراحة بناء على تحليل العظام بالتصوير المقطعي الدقيق (micro-CT) ، والذي يعكس فقدان العظام بنسبة 20٪ في المتوسط مقارنة بالمجموعة الوهمية. تألفت المجموعة 2 من 40 فأر BBDR (مقاومة مرض السكري للتربية الحيوية) المعدلة وراثيا Sprague Dawley المصابة بداء السكري من النوع الثاني. كان متوسط الوزن 730 جم ، وكان متوسط العمر 12 أسبوعا. قبل الجراحة ، تم تأكيد حالة مرض السكري مع ثلاثة أيام متتالية من قياسات الجلوكوز مع نتائج أعلى من 200 ملغ / ديسيلتر. تم قياس الجلوكوز باستخدام جهاز قياس السكر في 6 ساعات من الصيام ، وتم جمع قطرة دم عن طريق ثقب الذيل.
تم استخدام غرسات التيتانيوم من الدرجة 3 بطول 2 مم وقطر 1.8 مم. تم تعقيم جميع الغرسات في ظروف الغرفة النظيفة ، من خلال تنظيفها بالموجات فوق الصوتية في سيكلو هكسان (3 مرات لمدة 2 دقيقة) ، الأسيتون (مرة واحدة لمدة 1 دقيقة) ، الماء منزوع الأيونات (3 مرات لمدة دقيقتين) ، الإيثانول (3 مرات لمدة دقيقتين) ، والأسيتون (3 مرات لمدة دقيقتين) باستخدام حمام الموجات فوق الصوتية (230 فولت تيار متردد ، 50/60 هرتز ، 360 واط). بعد ذلك ، تم تجفيف العينات بغاز النيتروجين ، وتم تطبيق حزمة نيتروجين عند 0.5 بار مباشرة على العينات. قبل الزرع ، تم نقع الغرسات أولا في ماء منزوع الأيونات ثم غمرها في 70٪ إيثانول (v / v) لمدة 10 دقائق. بعد ذلك ، تم نقل الغرسات إلى أنابيب طرد مركزي دقيقة معقمة ، وبقيت تحت ظروف معقمة حتى الجراحة.
تم إجراء جميع الإجراءات التجريبية وفقا للمبادئ التوجيهية للجماعة الأوروبية لحماية المستخدمة للأغراض العلمية (التوجيه 2010/63 / EU) كما هو مطبق في القانون الإسباني (المرسوم الملكي 53/2013) ولوائح Generalitat de Catalunya (المرسوم 214/97). تم الحصول على الموافقة الأخلاقية لجميع الإجراءات والمناولة الحيوانية من لجنة الأخلاقيات للتجارب على التابعة لمعهد Vall D'Hebron في Recerca (رقم التسجيل 72/18 CEEA). بالنسبة لنموذج هشاشة العظام ، تم استخدام إناث فئران Sprague Dawley بمتوسط وزن 484 جم ومتوسط عمر 12 أسبوعا. أما بالنسبة لنموذج السكري ، فقد تم استخدام إناث الفئران المعدلة وراثيا BBDR (المقاومة لمرض السكري الحيوي (Bio Breeding Diabetes Resistant) بمتوسط وزن 730 جم ومتوسط عمر 12 أسبوعا. تم الحصول على جميع من مورد تجاري. يتم سرد التفاصيل المحددة للحيوانات والكواشف والمعدات المستخدمة في الدراسة في جدول المواد.
1. التخدير / الصيدلة وإعداد
2. التحضير للجراحة
3. الجراحة
4. التصوير المقطعي المحوسب الدقيق
5. رعاية ما بعد الجراحة
6. القتل الرحيم
7. تحليل ما بعد الجراحة
المرحلة الجراحية
من المهم الإشارة إلى أن كلا النموذجين الحيوانيين المستخدمين في هذه الدراسة يمثلان قيودا معينة بسبب الأمراض المستحثة. تنعكس هذه القيود المتعلقة بالتلاعب بالأنسجة الصلبة والرخوة أثناء العملية الجراحية.
في نموذج السكري ، يكون ا...
على الرغم من أن الجرذ هو نموذج يستخدم على نطاق واسع لدراسة الاندماج العظمي ، فمن المهم تحديد ووصف تقنية جراحية قابلة للتكرار لوضع الغرسات بشكل مناسب. ويمكن أن تكون هذه التقنية بمثابة دليل للمجتمع العلمي. علاوة على ذلك ، فإن حقيقة أن بعض الأمراض ، مثل هشاشة العظام والسكري ...
نعلن بموجب هذا أنه لا يوجد تضارب في المصالح فيما يتعلق بهذه المقالة العلمية.
يشكر المؤلفون وكالة الأبحاث الحكومية الإسبانية على الدعم المالي من خلال المشاريع PID2020-114019RBI00 و PID2021-125150OB-I00.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
22 G needles+A2:C30 | Terumo | NN-2238R | |
4/0 monofilament synthetic resorbable suture | Braun ( MonoSyn) | ||
5 mL, 10 mL syringes | Braun | 4617100V-02 4606051V | |
Adson forceps | Antão Medical | Ref: A586 | |
BBDR ( Biobreeding Diabetes Resistant ) Sprague Dawley Rats | Janvier Labs | ||
Betadine | Mylan | ||
Buprecare | Animalcare (UK) | ||
Castroviejo Caliper 0-40 mm 15 cm angled | UL AMIN Industries | ||
Castroviejo Needle Holder | Antão Medical | Ref: AM1702 | |
Dental surgery scissors curved and straight | Antão Medical | AMA603 / AMA600 | |
Electric shaver | Oster Pro 3000i | 34264482227 | |
Extra Fine Graefe Forceps | F.S.T | Ref: 11150-10 | |
Gauze pads | COVIDIEN | 441001 | |
Glucometer | Menarini (Italy) | ||
Helicoidal Drill / OSTEO-PIN DRILL Ø1.6 mm | soadco | Ref. OS-8001 | |
Implants / SCREW OSTEO-PIN Ø1.8 x 2.0 mm | soadco | Ref. OS-3 | |
Isoflo | Le Vet Pharma (Netherlands) | ||
Lance pilot drill / Lanceolate Drill (DS) | soadco | Ref. 10 02 01 T | |
Latex gloves - Surgical gloves sterile | Hartmann | Ref: 9426495 | |
Lucas Surgical Curette | Antão Medical | Ref: AMA940-3 | |
Metacam | Boehringer Ingelheim(Germany) | ||
Micro forceps straight | nopa | Ref: AB 542/12 | |
Micro-CT scan( Quantum Fx microCT ) | Perkin Elmer (US) | ||
Osteoporotic Sprague Dawley females Rats | Janvier Labs | ||
Periosteal elevator - Molt 2-4 | Antão Medical | Ref: A1564 | |
Physiologic solution for Irrigation | Hygitech | Ref:10238 | |
Scalpel Blade Carbon Steel 15C | Razor Med | Ref: 02846 | |
Sterile Gauze Swabs | Alledental | Ref: 270712 | |
Sterile Irrigation system | Hygitech | Ref:HY1-110001D | |
Sterile towels (1 piece per animal) | Dinarex | 4410 | |
Surgical contra-angle handpiece | W&H | Ref: WS-75 LED G | |
Surgical contra-angle handpiece | W&H | SN 08877 | |
Surgical contra-angle handpiece | W&H | SN 01309 | |
Surgical Electric Motor | WH Implantmed Type: SI-1023 | Ref: 30288000 | |
Surgical scalpel handle | AsaDental | Ref: 0350-3 | |
Towel clamps | Xelpov surgical | AF-773-11 | |
Ultrasonic device | J.P. Selecta, Abrera, Spain |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved