A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
تقدم هذه المخطوطة بروتوكولا لإزالة الخلايا العصبية القطنية الودية بعد العقدة جراحيا من الفأر. سيسهل هذا الإجراء العديد من الدراسات التي تهدف إلى التحقيق في دور التعصيب الودي في أهداف الأنسجة البعيدة.
إصابات الأعصاب الطرفية شائعة ، ويتم تحقيق الشفاء الوظيفي الكامل بعد الإصابة في 10 ٪ فقط من المرضى. يلعب الجهاز العصبي السمبثاوي العديد من الأدوار المهمة في الحفاظ على الاتزان الداخلي الجسدي، ولكن نادرا ما تمت دراسته في سياق إصابة العصب الطرفي. مدى الوظائف العصبية الودية بعد العقدة في الأهداف البعيدة في المحيط غير واضح حاليا. لاستكشاف دور التعصيب الودي للأهداف المحيطية بشكل أفضل ، يوفر نموذج "الضربة القاضية" الجراحي نهجا بديلا. على الرغم من أنه يمكن تحقيق ذلك كيميائيا ، إلا أن التدمير الكيميائي للخلايا العصبية الودية بعد العقد يمكن أن يكون غير محدد ويعتمد على الجرعة. يسمح استخدام استئصال الودي القطني الجراحي في الفئران ، الذي كان يعتقد أنه "غير عملي عمليا" في الصغيرة ، باستهداف محدد للخلايا العصبية الودية بعد العقدة التي تعصب الأطراف الخلفية. تصف هذه المخطوطة كيفية إزالة العقد القطنية الودية L2-L5 جراحيا من الفأر كجراحة للبقاء على قيد الحياة ، مما يقلل بشكل موثوق من استجابة عرق المخلب الخلفي وعدد المحاور العصبية الودية في العصب الوركي.
يمكن أن تؤدي إصابات الأعصاب المحيطية (PNIs) إلى عجز حركي وحسي وودي في أهداف الأنسجة البعيدة التي نادرا ما تتعافى وظيفيا بالكامل1. غالبا ما ركزت أبحاث PNI على التجديد الحركي والحسي. ومع ذلك ، فإن ما يقرب من ربع العصب الوركي للفئران يتكون من محاور عصبية متعاطفة غير ميالينية2. ومع ذلك ، فإن دور التعصيب الودي في الأنسجة المحيطية غير مفهوم تماما3. يلعب الجهاز العصبي السمبثاوي دورا رئيسيا في الحفاظ على التوازن الجسدي ، والمشاركة في التنظيم المناعي ، والتنظيم الحراري ، ونغمة الأوعية الدموية ، والتكوين الحيوي للميتوكوندريا ، والمزيد4،5،....
تمت الموافقة على جميع التجارب من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام (IACUC) بجامعة إيموري (بموجب رقم بروتوكول IACUC PROTO201700371). تم استخدام أربع إناث بالغة من الفئران البرية C57BL / 6J ، تتراوح أعمارها بين 14 أسبوعا وتزن ما بين 16-21 جم ، في هذه الدراسة. تفاصيل الكواشف والمعدات المستخدمة هنا مدرجة في جدول المواد.
1. التحضير قبل الجراحة
يصف هذا البروتوكول الاستئصال الجراحي للخلايا العصبية القطنية الودية بعد العقد من الفأر. تلقى فئران استئصال الودي القطني ، وعمل فئران كعناصر تحكم. لتحقيق استئصال جراحي ناجح للودي القطني ، يجب تحقيق تصور كاف على الأقل للعقد القطنية الودية الثنائية L2 و L3 ، كما هو موضح في الشكل 1
العقد القطنية الودية هي هياكل صغيرة جدا تقع خلف العديد من أعضاء البطن الحرجة والأوعية الكبيرة. لذلك ، يتطلب هذا الإجراء دقة ودقة كبيرة. يكمن جزء كبير من الصعوبة في تحديد العقد المتعاطفة أثناء الجراحة. يقترح أن يكون المتعلم قادرا أولا على التعرف على العقد في جثة فأر قبل محاولة هذا الإجراء ف?.......
ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للكشف عنه.
تم دعم هذا العمل من قبل المعهد الوطني للاضطرابات العصبية والسكتة الدماغية التابع للمعاهد الوطنية للصحة بموجب الجائزة رقم K01NS124912 وجزئيا من خلال منحة تنموية من مركز إيموري المتخصص للتميز البحثي في الاختلافات بين الجنسين الممول من المعاهد الوطنية للصحة U54AG062334 وبرنامج تدريب العلماء الطبيين في كلية الطب بجامعة إيموري. شكرا لديفيد كيم ، ما بعد البكالوريا ، لتقسيم الأعصاب الوركية وإلى HaoMin SiMa ، أخصائي الأبحاث ، لطباعة 3D حامل هاتف لمجهرنا الاستريو الذي سمح بتصوير الفيديو.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
5-0 absorable suture | CP Medical | 421A | |
5-0 nylon suture | Med-Vet International | MV-661 | |
70% ethanol | Sigma-Aldrich | E7023-4L | |
Anesthesia Induction Chamber | Kent Scientific VetFlo | VetFlo-0530XS | |
Anesthesia Vaporizer | Kent Scientific VetFlo | 13-005-202 | |
Betadine | HealthyPets | BET16OZ | |
C57BL/6J mice | Jackson Laboratory | #000664 | |
Chicken anti-neurofilament-heavy | Abcam | ab72996 | |
Cryostat | Leica | CM1850 | |
Data Analysis Software | Prism | ||
Fine-tipped tweezers | World Precision Instruments | 500233 | |
Fluorescent microscope | Nikon | Ti-E | |
Goat anti-chicken 488 | Invitrogen | A32931 | |
Goat anti-rabbit 647 | Invitrogen | A21245 | |
Heating pad | Braintree Scientific | 39DP | |
Image Analysis Software | Fiji | ||
Imaging Software | Nikon | NIS-Elements | |
Isoflurane | Med-Vet International | RXISO-250 | |
Meloxicam | Med-Vet International | RXMELOXIDYL32 | |
Needle driver | Roboz Surgical Store | RS-7894 | |
Normal Goat Serum | Abcam | ab7481 | |
Ophthalmic ointment | Refresh | Refresh P.M. | |
Phox2bCre:tdTomato mutant mice | Jackson Laboratory | #016223, #007914 | |
Pilocarpine hydrochloride | Sigma-Aldrich | P6503 | |
Rabbit anti-tyrosine hydroxylase | Abcam | ab112 | |
Small straight scissors | Fine Science Tools | 14084-09 | |
Sterile cotton swabs 2x2 | Dynarex | 3252 | |
Sterile cotton tipped applicators | Dynarex | 4301 | |
Sterile drape | Med-Vet International | DR4042 | |
Sterile saline solution | Med-Vet International | 1070988-BX | |
ThCre:mTmG mutant mice | Mutant Mouse Resource and Research Centers | strain #017262-UCD | Jackson Laboratory, strain #007576 |
ThCre:tdTomato mutant mice | European Mouse Mutant Archive | strain #00254 | Jackson Laboratory, strain #007914 |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved