A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

تقدم هذه المخطوطة بروتوكولا لإزالة الخلايا العصبية القطنية الودية بعد العقدة جراحيا من الفأر. سيسهل هذا الإجراء العديد من الدراسات التي تهدف إلى التحقيق في دور التعصيب الودي في أهداف الأنسجة البعيدة.

Abstract

إصابات الأعصاب الطرفية شائعة ، ويتم تحقيق الشفاء الوظيفي الكامل بعد الإصابة في 10 ٪ فقط من المرضى. يلعب الجهاز العصبي السمبثاوي العديد من الأدوار المهمة في الحفاظ على الاتزان الداخلي الجسدي، ولكن نادرا ما تمت دراسته في سياق إصابة العصب الطرفي. مدى الوظائف العصبية الودية بعد العقدة في الأهداف البعيدة في المحيط غير واضح حاليا. لاستكشاف دور التعصيب الودي للأهداف المحيطية بشكل أفضل ، يوفر نموذج "الضربة القاضية" الجراحي نهجا بديلا. على الرغم من أنه يمكن تحقيق ذلك كيميائيا ، إلا أن التدمير الكيميائي للخلايا العصبية الودية بعد العقد يمكن أن يكون غير محدد ويعتمد على الجرعة. يسمح استخدام استئصال الودي القطني الجراحي في الفئران ، الذي كان يعتقد أنه "غير عملي عمليا" في الصغيرة ، باستهداف محدد للخلايا العصبية الودية بعد العقدة التي تعصب الأطراف الخلفية. تصف هذه المخطوطة كيفية إزالة العقد القطنية الودية L2-L5 جراحيا من الفأر كجراحة للبقاء على قيد الحياة ، مما يقلل بشكل موثوق من استجابة عرق المخلب الخلفي وعدد المحاور العصبية الودية في العصب الوركي.

Introduction

يمكن أن تؤدي إصابات الأعصاب المحيطية (PNIs) إلى عجز حركي وحسي وودي في أهداف الأنسجة البعيدة التي نادرا ما تتعافى وظيفيا بالكامل1. غالبا ما ركزت أبحاث PNI على التجديد الحركي والحسي. ومع ذلك ، فإن ما يقرب من ربع العصب الوركي للفئران يتكون من محاور عصبية متعاطفة غير ميالينية2. ومع ذلك ، فإن دور التعصيب الودي في الأنسجة المحيطية غير مفهوم تماما3. يلعب الجهاز العصبي السمبثاوي دورا رئيسيا في الحفاظ على التوازن الجسدي ، والمشاركة في التنظيم المناعي ، والتنظيم الحراري ، ونغمة الأوعية الدموية ، والتكوين الحيوي للميتوكوندريا ، والمزيد4،5،....

Protocol

تمت الموافقة على جميع التجارب من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام (IACUC) بجامعة إيموري (بموجب رقم بروتوكول IACUC PROTO201700371). تم استخدام أربع إناث بالغة من الفئران البرية C57BL / 6J ، تتراوح أعمارها بين 14 أسبوعا وتزن ما بين 16-21 جم ، في هذه الدراسة. تفاصيل الكواشف والمعدات المستخدمة هنا مدرجة في جدول المواد.

1. التحضير قبل الجراحة

  1. الأوتوكلاف الأدوات الجراحية: 1 زوج من مقص حاد ، 2 ملاقط ذات رؤوس دقيقة ، 1 سائق إبرة.
  2. سخني وسادة التدفئة إلى 37 درجة مئوية وضعيها تحت سطح الطاولة الجراحية.
  3. رش المنطقة الجراحية ، بما في ذلك غرفة تحريض التخدير ، بمطهر وامسحها جيدا باستخدام منا....

النتائج

يصف هذا البروتوكول الاستئصال الجراحي للخلايا العصبية القطنية الودية بعد العقد من الفأر. تلقى فئران استئصال الودي القطني ، وعمل فئران كعناصر تحكم. لتحقيق استئصال جراحي ناجح للودي القطني ، يجب تحقيق تصور كاف على الأقل للعقد القطنية الودية الثنائية L2 و L3 ، كما هو موضح في الشكل 1

Discussion

العقد القطنية الودية هي هياكل صغيرة جدا تقع خلف العديد من أعضاء البطن الحرجة والأوعية الكبيرة. لذلك ، يتطلب هذا الإجراء دقة ودقة كبيرة. يكمن جزء كبير من الصعوبة في تحديد العقد المتعاطفة أثناء الجراحة. يقترح أن يكون المتعلم قادرا أولا على التعرف على العقد في جثة فأر قبل محاولة هذا الإجراء ف?.......

Disclosures

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للكشف عنه.

Acknowledgements

تم دعم هذا العمل من قبل المعهد الوطني للاضطرابات العصبية والسكتة الدماغية التابع للمعاهد الوطنية للصحة بموجب الجائزة رقم K01NS124912 وجزئيا من خلال منحة تنموية من مركز إيموري المتخصص للتميز البحثي في الاختلافات بين الجنسين الممول من المعاهد الوطنية للصحة U54AG062334 وبرنامج تدريب العلماء الطبيين في كلية الطب بجامعة إيموري. شكرا لديفيد كيم ، ما بعد البكالوريا ، لتقسيم الأعصاب الوركية وإلى HaoMin SiMa ، أخصائي الأبحاث ، لطباعة 3D حامل هاتف لمجهرنا الاستريو الذي سمح بتصوير الفيديو.

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
5-0 absorable sutureCP Medical421A
5-0 nylon sutureMed-Vet InternationalMV-661
70% ethanolSigma-AldrichE7023-4L
Anesthesia Induction ChamberKent Scientific VetFloVetFlo-0530XS
Anesthesia VaporizerKent Scientific VetFlo13-005-202
BetadineHealthyPetsBET16OZ
C57BL/6J miceJackson Laboratory#000664
Chicken anti-neurofilament-heavyAbcamab72996
CryostatLeicaCM1850
Data Analysis SoftwarePrism
Fine-tipped tweezersWorld Precision Instruments500233
Fluorescent microscopeNikonTi-E
Goat anti-chicken 488InvitrogenA32931
Goat anti-rabbit 647InvitrogenA21245
Heating padBraintree Scientific39DP
Image Analysis SoftwareFiji
Imaging SoftwareNikonNIS-Elements
IsofluraneMed-Vet InternationalRXISO-250
MeloxicamMed-Vet InternationalRXMELOXIDYL32
Needle driverRoboz Surgical StoreRS-7894
Normal Goat SerumAbcamab7481
Ophthalmic ointmentRefreshRefresh P.M.
Phox2bCre:tdTomato mutant miceJackson Laboratory #016223, #007914
Pilocarpine hydrochlorideSigma-AldrichP6503
Rabbit anti-tyrosine hydroxylaseAbcamab112
Small straight scissors Fine Science Tools14084-09
Sterile cotton swabs 2x2Dynarex3252
Sterile cotton tipped applicatorsDynarex4301
Sterile drapeMed-Vet InternationalDR4042
Sterile saline solutionMed-Vet International1070988-BX
ThCre:mTmG mutant miceMutant Mouse Resource and Research Centersstrain #017262-UCDJackson Laboratory, strain #007576
ThCre:tdTomato mutant miceEuropean Mouse Mutant Archivestrain #00254Jackson Laboratory, strain #007914

References

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

JoVE 209

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved