Sympathectomie lombaire chirurgicale chez la souris

Résumé

Ce manuscrit présente un protocole pour l’ablation chirurgicale des neurones sympathiques lombaires postganglionnaires d’une souris. Cette procédure facilitera une multitude d’études visant à étudier le rôle de l’innervation sympathique dans les cibles du tissu distal.

Résumé

Les lésions des nerfs périphériques sont fréquentes, et la récupération fonctionnelle complète après une blessure n’est obtenue que chez 10% des patients. Le système nerveux sympathique joue de nombreux rôles essentiels dans le maintien de l’homéostasie corporelle, mais il a rarement été étudié dans le contexte des lésions nerveuses périphériques. L’étendue des fonctions neuronales sympathiques postganglionnaires chez les cibles distales de la périphérie n’est actuellement pas claire. Pour mieux explorer le rôle de l’innervation sympathique des cibles périphériques, un modèle chirurgical « knock-out » propose une approche alternative. Bien que cela puisse être réalisé chimiquement, la destruction chimique des neurones sympathiques postganglionnaires peut être non spécifique et dépendante de la dose. L’utilisation d’une sympathectomie lombaire chirurgicale chez la souris, que l’on pensait autrefois « pratiquement impraticable » chez les petits animaux, permet de cibler spécifiquement les neurones sympathiques postganglionnaires qui innervent les membres postérieurs. Ce manuscrit décrit comment enlever chirurgicalement les ganglions sympathiques lombaires L2-L5 d’une souris dans le cadre d’une chirurgie de survie, ce qui diminue de manière fiable la réponse sudoripare-transpiration de la patte arrière et le nombre d’axones sympathiques dans le nerf sciatique.

Introduction

Les lésions des nerfs périphériques (PNI) peuvent entraîner des déficits moteurs, sensoriels et sympathiques dans les cibles du tissu distal^{qui se} rétablissent rarement complètement 1. La recherche PNI s’est souvent concentrée sur la régénération motrice et sensorielle ; Cependant, près d’un quart du nerf sciatique du rat est constitué d’axones sympathiques² non myélinisés. Le rôle de l’innervation sympathique dans les tissus périphériques n’est cependant pas entièrement compris³. Le système nerveux sympathique joue un rôle majeur dans le maintien de l’homéostasie corporelle, participant à la régu....

Protocole

Toutes les expériences ont été approuvées par l’Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) de l’Université Emory (sous le numéro de protocole IACUC PROTO201700371). Quatre souris femelles adultes de type sauvage C57BL/6J, âgées de 14 semaines et pesant entre 16 et 21 g, ont été utilisées dans cette étude. Les détails des réactifs et de l’équipement utilisés ici sont répertoriés dans la table des matériaux.

1. Préparation préopératoire

1. Autoclavez les outils chirurgicaux : 1 paire de ciseaux tranchants, 2 pinces à épiler à pointe fine, 1 tourne-aiguille.
2. Réchauffez un coussin chau....

Discussion

Les ganglions sympathiques lombaires sont de très petites structures situées derrière de nombreux organes abdominaux critiques et de gros vaisseaux. Par conséquent, cette procédure nécessite une précision et une exactitude considérables. Une grande partie de la difficulté réside dans l’identification des ganglions sympathiques en peropératoire. Il est suggéré que l’apprenant soit d’abord capable d’identifier les ganglions dans un cadavre de souris avant de tenter cette procédure chez une souris viva.......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
5-0 absorable suture	CP Medical	421A
5-0 nylon suture	Med-Vet International	MV-661
70% ethanol	Sigma-Aldrich	E7023-4L
Anesthesia Induction Chamber	Kent Scientific VetFlo	VetFlo-0530XS
Anesthesia Vaporizer	Kent Scientific VetFlo	13-005-202
Betadine	HealthyPets	BET16OZ
C57BL/6J mice	Jackson Laboratory	#000664
Chicken anti-neurofilament-heavy	Abcam	ab72996
Cryostat	Leica	CM1850
Data Analysis Software	Prism
Fine-tipped tweezers	World Precision Instruments	500233
Fluorescent microscope	Nikon	Ti-E
Goat anti-chicken 488	Invitrogen	A32931
Goat anti-rabbit 647	Invitrogen	A21245
Heating pad	Braintree Scientific	39DP
Image Analysis Software	Fiji
Imaging Software	Nikon	NIS-Elements
Isoflurane	Med-Vet International	RXISO-250
Meloxicam	Med-Vet International	RXMELOXIDYL32
Needle driver	Roboz Surgical Store	RS-7894
Normal Goat Serum	Abcam	ab7481
Ophthalmic ointment	Refresh	Refresh P.M.
Phox2bCre:tdTomato mutant mice	Jackson Laboratory	#016223, #007914
Pilocarpine hydrochloride	Sigma-Aldrich	P6503
Rabbit anti-tyrosine hydroxylase	Abcam	ab112
Small straight scissors	Fine Science Tools	14084-09
Sterile cotton swabs 2x2	Dynarex	3252
Sterile cotton tipped applicators	Dynarex	4301
Sterile drape	Med-Vet International	DR4042
Sterile saline solution	Med-Vet International	1070988-BX
ThCre:mTmG mutant mice	Mutant Mouse Resource and Research Centers	strain #017262-UCD	Jackson Laboratory, strain #007576
ThCre:tdTomato mutant mice	European Mouse Mutant Archive	strain #00254	Jackson Laboratory, strain #007914