マウスの外科的腰椎交感神経切除術

要約

この原稿は、マウスから節後腰椎交感神経ニューロンを外科的に除去するためのプロトコルを示しています。この手順は、遠位組織標的における交感神経支配の役割を調査することを目的とした多数の研究を促進します。

要約

末梢神経損傷は一般的であり、損傷後の完全な機能回復は患者のわずか10%で達成されます。交感神経系は、身体の恒常性を維持する上で多くの重要な役割を果たしていますが、末梢神経損傷の文脈で研究されることはほとんどありませんでした。末梢の遠位標的における節後交感神経神経機能の程度は、現在のところ不明です。末梢標的の交感神経支配の役割をよりよく探求するために、外科的「ノックアウト」モデルは代替アプローチを提供します。これは化学的に達成できますが、節後交感神経ニューロンの化学的破壊は非特異的で用量依存的である可能性があります。マウスでの外科的腰椎交感神経切除術の使用は、かつては小動物では「事実上実行不可能」と考えられていましたが、後肢を神経支配する節後交感神経ニューロンの特異的な標的化を可能にします。この原稿では、生存手術としてマウスからL2-L5腰椎交感神経節を外科的に切除する方法について説明しており、これにより後足の汗反応と坐骨神経の交感神経軸索の数が確実に減少します。

概要

末梢神経損傷 (PNI) は、遠位組織ターゲットの運動障害、感覚障害、および交感神経障害を引き起こす可能性があり、完全に機能を回復することはめったにありません¹。PNIの研究は、多くの場合、運動および感覚の再生に焦点を当ててきました。しかし、ラットの坐骨神経のほぼ4分の1は、無髄交感神経軸索で構成されています²。それにもかかわらず、末梢組織における交感神経支配の役割は完全には理解されていません³。交感神経系は、免疫調節、体温調節、血管緊張、ミトコンドリア生合成などに関与し、身体の恒常性を維持する上で主要な役割を果たしています4,5,6,7,8,9,10,11 .神経筋接合部での交感神経支配が失われると、運動ニューロン神経支配が維持されているにもかかわらず、持続的....

プロトコル

すべての実験は、エモリー大学の動物実験委員会(IACUC)によって承認されました（IACUCプロトコル番号PROTO201700371の下で)。この研究では、14週齢、体重16〜21 gの4匹の成体雌野生型C57BL / 6Jマウスを使用しました。ここで使用する試薬や機器の詳細は 、材料表に記載されています。

1. 術前準備

1. 手術器具をオートクレーブします:鋭利なハサミ1組、先端の細いピンセット2本、ニードルドライバー1本。
2. 加熱パッドを37°Cに温め、手術用テーブルトップの下に置きます。
3. 麻酔導入室を含む手術部位に消毒液をスプレーし、ペーパータオルで十分に拭き取ります。
4. マウスを取り扱う前に、適切なガウンと手洗いを確認してください。
5. マウスにメロキシカムを5 mg / kg体重で供給し、マウスが薬を完全に飲み込むのに十分な時間を置いて、誘導中の誤嚥を避けます。.
6. 1 L / minの酸素中に3%イソフルランを使用してマウスを麻酔下で誘導します(施設で承認されたプロトコルに従います)。
7. マウスに麻酔をかけたら(つま先をつまんでも反応しない)、マウスを手術台、仰臥位に置き、鼻を取り付けた鼻円錐形に置きます。
8. マウスがノーズコーンに適切に装着されたら、麻酔....

ディスカッション

腰椎交感神経節は、多くの重要な腹部臓器や大きな血管の後ろにある非常に小さな構造です。したがって、この手順にはかなりの精度と精度が必要です。困難の多くは、術中に交感神経節を特定することにあります。学習者は、生きたマウスでこの手順を試みる前に、まずマウスの死体で神経節を特定できることをお勧めします。トラブルシューティングは、腸の迂回後に交感神経節を特定?.......

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
5-0 absorable suture	CP Medical	421A
5-0 nylon suture	Med-Vet International	MV-661
70% ethanol	Sigma-Aldrich	E7023-4L
Anesthesia Induction Chamber	Kent Scientific VetFlo	VetFlo-0530XS
Anesthesia Vaporizer	Kent Scientific VetFlo	13-005-202
Betadine	HealthyPets	BET16OZ
C57BL/6J mice	Jackson Laboratory	#000664
Chicken anti-neurofilament-heavy	Abcam	ab72996
Cryostat	Leica	CM1850
Data Analysis Software	Prism
Fine-tipped tweezers	World Precision Instruments	500233
Fluorescent microscope	Nikon	Ti-E
Goat anti-chicken 488	Invitrogen	A32931
Goat anti-rabbit 647	Invitrogen	A21245
Heating pad	Braintree Scientific	39DP
Image Analysis Software	Fiji
Imaging Software	Nikon	NIS-Elements
Isoflurane	Med-Vet International	RXISO-250
Meloxicam	Med-Vet International	RXMELOXIDYL32
Needle driver	Roboz Surgical Store	RS-7894
Normal Goat Serum	Abcam	ab7481
Ophthalmic ointment	Refresh	Refresh P.M.
Phox2bCre:tdTomato mutant mice	Jackson Laboratory	#016223, #007914
Pilocarpine hydrochloride	Sigma-Aldrich	P6503
Rabbit anti-tyrosine hydroxylase	Abcam	ab112
Small straight scissors	Fine Science Tools	14084-09
Sterile cotton swabs 2x2	Dynarex	3252
Sterile cotton tipped applicators	Dynarex	4301
Sterile drape	Med-Vet International	DR4042
Sterile saline solution	Med-Vet International	1070988-BX
ThCre:mTmG mutant mice	Mutant Mouse Resource and Research Centers	strain #017262-UCD	Jackson Laboratory, strain #007576
ThCre:tdTomato mutant mice	European Mouse Mutant Archive	strain #00254	Jackson Laboratory, strain #007914