Хирургическая поясничная симпатэктомия у мышей

Резюме

В данной рукописи представлен протокол хирургического удаления постганглионарных поясничных симпатических нейронов у мыши. Эта процедура будет способствовать проведению множества исследований, направленных на изучение роли симпатической иннервации в дистальных тканевых мишенях.

Аннотация

Повреждения периферических нервов встречаются часто, а полное функциональное восстановление после травмы достигается только у 10% пациентов. Симпатическая нервная система играет много важных ролей в поддержании гомеостаза организма, но она редко изучается в контексте повреждения периферических нервов. Степень постганглионарных симпатических нейронных функций в дистальных мишенях на периферии в настоящее время неясна. Чтобы лучше изучить роль симпатической иннервации периферических мишеней, хирургическая модель «нокаута» предлагает альтернативный подход. Хотя это может быть достигнуто химическим путем, химическая деструкция постганглионарных симпатических нейронов может быть неспецифической и дозозависимой. Использование хирургической поясничной симпатэктомии у мышей, которое когда-то считалось «практически непрактичным» у мелких животных, позволяет целенаправленно воздействовать на постганглионарные симпатические нейроны, которые иннервируют задние конечности. В данной рукописи описывается, как хирургическое удаление поясничных симпатических ганглиев L2-L5 у мыши в качестве операции по выживанию, которая надежно снижает потовую реакцию задней лапы и количество симпатических аксонов в седалищном нерве.

Введение

Повреждения периферических нервов (ПНИ) могут приводить к двигательному, сенсорному и симпатическому дефициту в дистальных тканевых мишенях, которые редко полностью функционально восстанавливаются¹. Исследования PNI часто сосредоточены на моторной и сенсорной регенерации; Тем не менее, почти четверть седалищного нерва крысы состоит из немиелинизированных симпатических^{аксонов2}. Роль симпатической иннервации в периферических тканях, тем не менее, до конца не изучена³. Симпатическая нервная система играет важную роль в поддержании гомеостаза организма, участвуя в иммунной регуляции, терморегуляции, т....

протокол

Все эксперименты были одобрены Комитетом по институциональному уходу за животными и их использованию (IACUC) Университета Эмори (в соответствии с протоколом IACUC No PROTO201700371). В этом исследовании были использованы четыре взрослые самки мышей дикого типа C57BL/6J в возрасте 14 недель и весом от 16 до 21 г. Подробная информация об используемых здесь реагентах и оборудовании приведена в Таблице материалов.

1. Предоперационная подготовка

1. В автоклаве хирургические инструменты: 1 пара острых ножниц, 2 пинцета с тонким наконечником, 1 игольчатый инструмент.
2. Нагрейте грелку до 37 °C и пол....

Результаты

Этот протокол описывает хирургическое удаление постганглионарных поясничных симпатических нейронов у мыши. Две мыши получили поясничную симпатэктомию, а две мыши служили контрольной группой. Для достижения успешной хирургической поясничной симпатэктомии должна быть достигнута аде.......

Обсуждение

Поясничные симпатические ганглии – это очень мелкие структуры, расположенные позади многих критически важных органов брюшной полости и крупных сосудов. Поэтому данная процедура требует значительной точности и аккуратности. Большая часть трудностей заключается в интраоперационной ?.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
5-0 absorable suture	CP Medical	421A
5-0 nylon suture	Med-Vet International	MV-661
70% ethanol	Sigma-Aldrich	E7023-4L
Anesthesia Induction Chamber	Kent Scientific VetFlo	VetFlo-0530XS
Anesthesia Vaporizer	Kent Scientific VetFlo	13-005-202
Betadine	HealthyPets	BET16OZ
C57BL/6J mice	Jackson Laboratory	#000664
Chicken anti-neurofilament-heavy	Abcam	ab72996
Cryostat	Leica	CM1850
Data Analysis Software	Prism
Fine-tipped tweezers	World Precision Instruments	500233
Fluorescent microscope	Nikon	Ti-E
Goat anti-chicken 488	Invitrogen	A32931
Goat anti-rabbit 647	Invitrogen	A21245
Heating pad	Braintree Scientific	39DP
Image Analysis Software	Fiji
Imaging Software	Nikon	NIS-Elements
Isoflurane	Med-Vet International	RXISO-250
Meloxicam	Med-Vet International	RXMELOXIDYL32
Needle driver	Roboz Surgical Store	RS-7894
Normal Goat Serum	Abcam	ab7481
Ophthalmic ointment	Refresh	Refresh P.M.
Phox2bCre:tdTomato mutant mice	Jackson Laboratory	#016223, #007914
Pilocarpine hydrochloride	Sigma-Aldrich	P6503
Rabbit anti-tyrosine hydroxylase	Abcam	ab112
Small straight scissors	Fine Science Tools	14084-09
Sterile cotton swabs 2x2	Dynarex	3252
Sterile cotton tipped applicators	Dynarex	4301
Sterile drape	Med-Vet International	DR4042
Sterile saline solution	Med-Vet International	1070988-BX
ThCre:mTmG mutant mice	Mutant Mouse Resource and Research Centers	strain #017262-UCD	Jackson Laboratory, strain #007576
ThCre:tdTomato mutant mice	European Mouse Mutant Archive	strain #00254	Jackson Laboratory, strain #007914