وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة (R01HL056046 بال وK99HL116769 لجمعية الصحفيين التونسيين)، ومعهد الأبحاث في مستشفى الصعيد الوطني للطفولة (لPAL وجمعية الصحفيين التونسيين).

بيان الأخلاق: أجريت هذه الدراسة وفقا لالمعاهد الوطنية للصحة المبادئ التوجيهية، وتمت الموافقة من قبل مؤسسة رعاية الحيوان واستخدام اللجنة في مستشفى الصعيد الوطني للطفولة. 1. إعداد / إعداد ملاحظة: هذه التقنية العزلة يتطلب ملفين Langendorff التدفئة وضعه جنبا إلى جنب على موقف حلقة، ومتصلة بالتوازي مع حمام الماء المتداولة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على تعميم حمام مائي وضبط درجة الحرارة إلى تحقيق درجة الحرارة النهائية من 33-34 درجة مئوية في غيض من قنية Langendorff (حمام المياه المستخدمة في هذا انشاء تعيين إلى 40 درجة مئوية بسبب فقدان C 6-7 ° في درجة الحرارة عبر الأنابيب). تشغيل مضخات نضح وتحديد معدل نضح إلى 0.5 مل / دقيقة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنظيف كل من لفائف التدفئة تغلف المياه، وأنابيب المرفقة وقياس 25 قنية عن طريق تنظيف كل مع 50 مل من الايثانول 70٪، تليها 100 مل من الماء عالى النقاء تعقيمها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مسح ملفات التسخينعن طريق دفع الهواء مع حقنة ويغسل مع 10 مل من هانك في محلول الملح المتوازن (HBSS) دون أحمر الفينول. ترك HBSS في ملفات التسخين والأنابيب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرفاق العقيمة 10 مل LUER قفل حقنة مليئة درجة حرارة الغرفة HBSS دون الفينول الأحمر إلى الأنابيب. ضمان عدم وجود فقاعات الهواء محاصرون داخل الأنابيب والتدفئة لفائف عندما ربط حقنة مليئة HBSS-لأن ذلك قد يسبب الصمات الهواء أثناء عملية الهضم أن تؤثر سلبا على العزلة VSMC. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة قنية قياس 25 من لفائف التدفئة ومكان على العقيمة حقنة 10 مل أخرى مليئة الجليد الباردة HBSS دون الفينول الأحمر. الحفاظ على هذا على الجليد حتى جاهزة للاستخدام. أكرر للقنية أخرى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد انزيم الهضم الحل. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزن نوع كولاجيناز 2 وفقا لعدد الكثير محدد ل75 مل من محلول الهضم لتحقيق تركيز النهائي من 300 وحدة / مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل كولاجيناز في 75 مل من HBSS مع الفينول الأحمر. المقبل، إضافة 1.5 مل من 00.1 ملغ / مل مثبط التربسين فول الصويا و 75 ميكرولتر من 1 M CaCl 2 إلى الخليط. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في حالة استخدام الحل الهضم فورا، الحارة إلى 37 درجة مئوية. إن لم يكن، وضعه في 4 درجة مئوية لمدة تصل إلى 6 ساعات. يجب أن يتم هذا الحل الطازجة يوميا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد وسائل الإعلام توقف الحل / الطلاء. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 100 مل الحرارة المعطل FBS و 5 مل من L-الجلوتامين، 5 مل من الأحماض الأمينية غير الأساسية، 5 مل من HEPES، و 1 مل من primocin إلى 500 مل من ارتفاع نسبة الجلوكوز (4.5 جم / لتر) DMEM. ويوصى تصفية التعقيم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قسامة 6 مل من محلول توقف في كل من اثني عشر أنابيب مخروطية 15 مل، مرقمة A1-A6 و B1-B6، ومكان في 4 درجات مئوية. قسامة 50 مل من توقف الحل في المخروطية 50 مل ومكان في الحاضنة 37 درجة مئوية. ملاحظة: يمكن أيضا أن هذه الخطوة تكون مستعدة في اليوم السابق للعزلة إذا لزم الأمر. وسوف تستخدم هذا الحل وقف مثل وسائل الإعلام الطلاء بعد عزل الخلية. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد اثنين 1 مل الحقن مجهزة 30 إبرة Gمع 100 ميكرولتر من الهيبارين (1000 وحدة / مل). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع قطعة 5 سم من 5-0 الحرير الجراحي. ربط عقدة الذراع فضفاض في الحرير الجراحي مع نهاية واحدة مرتين ما دام الآخر. مكان على قنية عيار 25، ولكن لا تشديد. كرر لأخرى 25 G قنية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملء أربعة 35 ملم أطباق بتري معقمة (# 1-4) مع 2 مل من عقيم، المثلج، HBSS دون الفينول الأحمر. الحفاظ على الجليد. </li></ol> 2. القتل الرحيم، عزل القلب وكيفية تركيب الكانيولا <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل عزلة القلب، وضمان أن الحل الهضم والمخروطية 50 مل من توقف حل الحارة. إزالة حقنة مليئة HBSS مع المرفقة 25 G قنية من الجليد ووضعه في السحاحة المشبك (أو المشبك حلقة الحامل) على موقف حلقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفئران باستخدام 3٪ آيزوفلوران. تأكيد هو تخدير الماوس عن طريق لمسة إصبع على كل أطرافه الخلفية. إذا كان تشنجات الساق، والماوس لا تخدير بعد ذلك انتظر 1 دقيقة، وتكرار لمسة إصبع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فضح حبل الوريد عن طريق إزالة الفراءالجلد الثاني على الجزء الأمامي من الرقبة مع مقص. المقبل، واستخدام الملقط لإزالة بعناية أي الدهون المحيطة حبل الوريد. بعد إزالة الدهون، حقن ببطء 100 ميكرولتر من الهيبارين (1000 وحدة / مل). وضع اسفنجة جراحية خلال الوريد لتجنب النزيف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 1 دقيقة والصدر المفتوح لفضح القلب، ورفع القلب مع ملقط المنحنية والمكوس باستخدام مقص، والتأكد من الحفاظ الأبهر الصاعد سليمة من خلال فرع عضدي رأسي الأول. المكان على الفور القلب في طبق 35 ملم (رقم 1) مع الجليد الباردة HBSS دون الفينول الأحمر وشطف. ملاحظة: إجراء 4 خطوات التالية باستخدام نطاق تشريح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع G قنية 25 التي شنت على عصابة تقف في زاوية 45 درجة بحيث يقع على طرف فقط تحت سطح الجليد الباردة HBSS في صحن رقم 2 ويكون مرئيا من خلال المجهر تشريح بشكل واضح. نقل القلب إلى صحن رقم 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملقط دومون، فضح الشريان الأورطي عن طريق إزالة بلطف الدهنية الزائدة عن طريق تشريح حادة إلى pتعطيب revent أو تمزق الشريان الأورطي. المقبل، واستخدام ملقط لحرك الشريان الأبهر فوق G قنية 25. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توجيه قنية الهبوط من خلال الشريان الأورطي، وثيق، ولكن ليس أبعد من الصمام الأبهري، والتي سوف تؤثر سلبا على سلامة صمام وبالتالي، نضح الوراء. مرة واحدة قنية في مكان، حرك الحرير وتعادل قبل أكثر من الشريان الأورطي، وتشديد. ربط عقدة ثانية لتشكيل عقدة مربعة حول الشريان الأورطي لتأمين القلب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة يتم ربط الشريان الأورطي آمن، تدفق بلطف الدم المتبقية من الدورة الدموية التاجية مع HBSS الجليد الباردة في الحقنة التي تعلق على G قنية 25. الحرص على عدم دفع أكثر من اللازم لتجنب الضغط المفرط التاجي. فقط بحاجة لتدفق بطيء جدا ولطيف لاستكمال مطاردة. ويمكن أيضا إقناء؛ إدخال القنية الأبهر مجانا للتسرب ملاحظتها خلال هذا الاحمرار لطيف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على مضخة نضح لبدء تدفق HBSS. إزالة G قنية 25 (مع قلب المرفقة) من حقنة مليئة HBSS، مع الحرص علىالحفاظ على مركز قنية مليئة HBSS، وتوصيله إلى الحارة لفائف التدفئة شغل HBSS. يبدأ نضح القلب مع مضخة نضح بمعدل 0.5 مل / دقيقة لمدة 8 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد مقنى القلب الأول، ويجري perfused على النظام، كرر الخطوات من 2،1-2،8 للقلب الثاني. سيتم على مراحل هذه العزلة عن كل القلب ومن ثم يطلب من التخطيط الدقيق والتوقيت. </li></ol> 3. الهضم <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد التنظيف مع HBSS، تغيير 10 مل HBSS حقنة حاليا على مضخة واحدة مليئة 10 مل من محلول الهضم قبل تحسنت. يروي كل قلب مع حل الهضم لمدة 12 دقيقة بمعدل 0.5 مل / دقيقة. لا جمع الكسور الناجمة عن هذا الهضم الأول حيث سيؤدي ذلك إلى احتواء أي دم بقايا والخلايا البطانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 12 دقيقة، تغيير معدل نضح إلى 0.4 مل / دقيقة، ووضع مخروطي 15 مل (أنبوب A1 أو B1، الموافق قلب الأول أو الثاني لكل الهضم) مليئة البارد توقف solutأيون في دلو الجليد تحت القلب من أجل البدء في التخصيب VSMC جمع سائل الإرواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 15 دقيقة، تغيير المخروطية جمع لأنبوب A2 أو B2 والمخروطية تدور أنبوب A1 و B1 في 89 x ج لمدة 10 دقيقة على الفور بعد جمع كل من الكسور. عندما حقنة مليئة الحل الهضم على مضخة لديه أقل من 1 مل من محلول، مع استبدال شغلها طازجة حقنة 10 مل من محلول الهضم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الطرد المركزي، ونضح طاف من كل أنبوب جمع، وترك ما يقرب من 0.5 مل. Resuspend بيليه من A1 مع 2 مل من محلول توقف الدافئة (أو طلاء وسائل الإعلام). إضافة إعادة تعليق من أنبوب A1 إلى أنبوب B1 ومكان أنبوب في الحاضنة 37 درجة مئوية مع غطاء فضفاض. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوات من 3.3 و 3.4 حتى جميع الأنابيب (من خلال A6 و B6) تستخدم لفترة ما مجموعه 90 دقيقة جمع. في 80 دقيقة من عملية الهضم، وقطع فتح ذروة القلب لطرد أي الخلايا التي قد تكون محاصرين داخل البطين، وجمع هذه الخلايا في A6 أنبوب وB6، respectively. ملاحظة: أحيانا قلب سوف تسقط قنية السابقة إلى نقطة زمنية 90 دقيقة. إذا حدث هذا، استرداد القلب والمكان الى العقيمة 35 ملم طبق بتري مليئة 2 مل من محلول الهضم. قطع ذروة القلب وشطف بلطف القلب مع حل الهضم. التالي، تصفية 2 مل من محلول الهضم من خلال العقيمة 100 ميكرومتر مصفاة الخلية في 50 مل المخروطية وإضافة إلى A6 أنبوب أو B6. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد كل دورة من أنابيب اللاحقة (A2 و B2)، إضافة VSMCs معلق في أنبوب جمع السابق (جنبا إلى جنب A1 و B1). أيضا، والحرص على عدم ترك حل الهضم في مضخة نفد وتبديل 10 مل الحقن اللازمة في جميع انحاء الهضم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد يتم الجمع بين جميع الأنابيب، أجهزة الطرد المركزي تعليق-VSMC الغنية في 89 x ج لمدة 10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح قدر طاف من أنابيب جمع ممكن. Resuspend وبيليه المتبقية في 2 مل من الطلاء وسائل الاعلام ولوحة على واحد صحن الثقافة 35 مم. مكان الطبق الثقافة طن 37 درجة مئوية الحاضنة لمدة 24 ساعة. </li></ol> الثقافة 4. خلية ملاحظة: أكمل الخطوات المتبقية في مجلس الوزراء للسلامة الأحيائية. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 24 ساعة، ونضح بلطف وسائل الإعلام الطلاء. إن ثقافة وعادة ما يكون كمية كبيرة من الحطام. لغسل الخلايا، إضافة 2 مل من الحارة، برنامج تلفزيوني العقيمة والاستفادة بلطف الطبق ضد اثنين من أصابع في حين تناوب في حركة عقارب الساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الدوران 360 درجة، نضح في برنامج تلفزيوني وأكرر مرة ثانية. نضح في برنامج تلفزيوني وإضافة آخر 2 مل من عقيم، PBS الدافئ. تحقق الطبق الثقافة تحت المجهر للتأكد من وجود قليل من دون الحطام على طبق من ذهب. ويمكن أيضا التقاء خلية يتحدد في هذا الوقت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا بقي الحطام في الطبق الثقافة، كرر الخطوة 4.2. إذا طبق ثقافة واضح من الحطام، ونضح برنامج تلفزيوني وإضافة 2 مل من وسائل الاعلام الطلاء الدافئ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 24 ساعة، وغسل الخلايا مرة أخرى مع دافئ، برنامج تلفزيوني العقيمة لإزالة أي حطام النهائي أو الخلايا الميتة من الثقافة. نضح في برنامج تلفزيوني وصالحذاء 2 مل أخرى من وسائل الاعلام الطلاء دافئة على الخلايا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق من الخلايا كل يوم وتغذية كل 48 ساعة مع وسائل الإعلام تصفيح درجة حرارة جديدة. في هذه المرحلة، والخلايا يمكن استخدامها لتجارب زراعة الخلية القياسية. وينبغي أن يكون VSMCs ما يقرب من 80٪ متموجة 4-5 أيام بعد الطلاء، على الرغم من أن قد يستغرق ما يصل إلى 7 أيام حتى يتم الكمال الداخلي. إذا التقسيم إلى فقرات لاحقة، واستخدام الحد الأقصى من 1: 4 35 أطباق ملم (أو إلى منطقة مماثلة من الأطباق الثقافة). </li></ol>

<ol>
	<li>Katz, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+arterioles+in+type+2+diabetic+(db/db)+mice+undergo+a+distinct+pattern+of+remodeling+associated+with+decreased+vessel+stiffness.">Coronary arterioles in type 2 diabetic (db/db) mice undergo a distinct pattern of remodeling associated with decreased vessel stiffness.</a> Basic Res Cardiol. 106 (6), 1123-1134 (2011).</li><li>Husarek, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+angiotensin+receptor+blocker+losartan+reduces+coronary+arteriole+remodeling+in+type+2+diabetic+mice.">The angiotensin receptor blocker losartan reduces coronary arteriole remodeling in type 2 diabetic mice.</a> Vascul Pharmacol. , (2015).</li><li>Teng, B., Ansari, H. R., Oldenburg, P. J., Schnermann, J., Mustafa, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+coronary+endothelial+and+smooth+muscle+cells+from+A1+adenosine+receptor-knockout+mice.">Isolation and characterization of coronary endothelial and smooth muscle cells from A1 adenosine receptor-knockout mice.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 290 (4), H1713-H1720 (2006).</li><li>Oldenburg, P. J., Wyatt, T. A., Sisson, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethanol+attenuates+contraction+of+primary+cultured+rat+airway+smooth+muscle+cells.">Ethanol attenuates contraction of primary cultured rat airway smooth muscle cells.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 43 (5), 539-545 (2010).</li><li>Xu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+two-phase+Ca2++release+and+apoptosis+controlled+by+TRP-ML1+channel+activity+in+coronary+arterial+myocytes.">Intracellular two-phase Ca2+ release and apoptosis controlled by TRP-ML1 channel activity in coronary arterial myocytes.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 304 (5), C458-C466 (2013).</li><li>Skrzypiec-Spring, M., Grotthus, B., Szelag, A., Schulz, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolated+heart+perfusion+according+to+Langendorff---still+viable+in+the+new+millennium.">Isolated heart perfusion according to Langendorff---still viable in the new millennium.</a> J Pharmacol Toxicol Methods. 55 (2), 113-126 (2007).</li><li>Owens, G. K., Kumar, M. S., Wamhoff, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+regulation+of+vascular+smooth+muscle+cell+differentiation+in+development+and+disease.">Molecular regulation of vascular smooth muscle cell differentiation in development and disease.</a> Physiol Rev. 84 (3), 767-801 (2004).</li><li>Li, L., Miano, J. M., Cserjesi, P., Olson, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SM22+alpha,+a+marker+of+adult+smooth+muscle,+is+expressed+in+multiple+myogenic+lineages+during+embryogenesis.">SM22 alpha, a marker of adult smooth muscle, is expressed in multiple myogenic lineages during embryogenesis.</a> Circ Res. 78 (2), 188-195 (1996).</li><li>Santiago, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+fibroblast+to+myofibroblast+differentiation+in+vivo+and+in+vitro:+expression+of+focal+adhesion+components+in+neonatal+and+adult+rat+ventricular+myofibroblasts.">Cardiac fibroblast to myofibroblast differentiation in vivo and in vitro: expression of focal adhesion components in neonatal and adult rat ventricular myofibroblasts.</a> Dev Dyn. 239 (6), 1573-1584 (2010).</li><li>Fisher, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+smooth+muscle+phenotypic+diversity+and+function.">Vascular smooth muscle phenotypic diversity and function.</a> Physiol Genomics. 42A (3), 169-187 (2010).</li><li>Archer, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversity+of+phenotype+and+function+of+vascular+smooth+muscle+cells.">Diversity of phenotype and function of vascular smooth muscle cells.</a> J Lab Clin Med. 127 (6), 524-529 (1996).</li><li>Souza-Smith, F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenteric+resistance+arteries+in+type+2+diabetic+db/db+mice+undergo+outward+remodeling.">Mesenteric resistance arteries in type 2 diabetic db/db mice undergo outward remodeling.</a> PLoS One. 6 (8), e23337 (2011).</li><li>Thuroff, J. W., Hort, W., Lichti, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diameter+of+coronary+arteries+in+36+species+of+mammalian+from+mouse+to+giraffe.">Diameter of coronary arteries in 36 species of mammalian from mouse to giraffe.</a> Basic Res Cardiol. 79 (2), 199-206 (1984).</li></ol>

الكتاب تعلن أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

وكان الغرض من هذه الدراسة هو التكيف مع بروتوكولات العزل الخلية الحالية لزيادة الغلة من التاجي والأوعية الدموية على نحو سلس من قلوب الفئران. تم تنفيذ أكثر من عمل رائد في الأوعية الدموية البيولوجيا العضلات الملساء مع مثقف الفئران الأبهر خلايا العضلات الملساء. قدمت هذ?...

والهدف من هذه الطريقة هو عزل خلايا الأوعية الدموية العضلات الملساء (VSMCs) من الدورة التاجية الفئران لاستخدامها في زراعة الخلايا وتجارب زراعة الخلية القياسية. قمنا بتطوير هذه التقنية لتقييم الآليات الجزيئية لإعادة الأوعية الدموية في مرض السكري. لقد ذكرت سابقا الداخل إعادة الضخامي في الشرايين التاجية الحاجز في نموذج الفأر ديسيبل / ديسيبل من مرض السكري 1. ويرجع ذلك إلى كمية محدودة من الأنسجة الموجودة في التاجية الحاجز الفئران، وتقنيات تجريبية قياسية التحقيق التغييرات البروتين (مثل لطخة غربية) في الفئران ديسيبل / ديسيبل والسيطرة صعبة في أحسن الأحوال. وبالإضافة إلى ذلك، لقد أظهرنا سابقا أن مانع مستقبلات أنجيوتنسين (ARB) اللوسارتان يقلل من إعادة عرض لوحظت في الفئران ديسيبل DB / 2. لذلك، عزل VSMCs الابتدائية من الدورة التاجية يسمح لنا لمواصلة التحقيق التغيرات في النمط الظاهري VSMC أو مسارات تنشيط يشير في الفئران من السكري، والتي قد تكون contribuتينغ إلى سلبي إعادة شرين التاجي. وإجمال العديد من الدراسات مسارات الإشارات الكنسي باستخدام VSMCs معزولة من الشريان الأورطي القوارض، وليس في كل سرير الأوعية الدموية محددة. ومع ذلك، لقد أثبتنا الأوعية الدموية سريرا إعادة محددة في التاجي، الأبهر، والتداولات المساريقي من ديسيبل الفئران ديسيبل / 1، مما يشير إلى VSMCs في كل سرير الأوعية الدموية قد يكون مختلفا. وبالتالي، فمن الضروري عزل VSMCs من كل سرير الأوعية الدموية من أجل فهم أفضل للتغيرات المرضية التي تحدث في كل مجموعة من VSMCs. وهناك عدد كبير من الطرق المختلفة لعزل وزراعة VSMCs الأبهر. ومع ذلك، في الوقت الراهن، هناك دراسة واحدة فقط التي تم نشرها على عزل VSMCs من الماوس التاجي تداول 3. تنغ وآخرون. كان أول من أشار إلى وسيلة لعزل VSMCs من الماوس الدورة الدموية التاجية. ومع ذلك، قمنا بتعديل البروتوكول بشكل كبير لأنها أيضا معزولة سل البطانيةليرة سورية. وقد استخدمت مختبرات أخرى أيضا البروتوكول من تنغ وآخرون لعزل myocytes الشرايين التاجية والهوائية خلايا العضلات الملساء 4،5. فإن التعديلات أدخلنا تسفر عن مجموعة من الخلايا التخصيب لVSMCs من الدورة التاجية. نضح الوراء من قلب الثدييات معزولة، أو تقنية Langendorff، وقد تم تأسيسها في عام 1897 6 أوسكار Langendorff، ولا يزال يستخدم على نطاق واسع اليوم لعزل خلايا القلب والأوعية الدموية. تقنية المعروضة هنا، إلى جانب النهوض التعديلات الجينية الفئران الحديثة، ويوفر أداة قيمة لتوثيق التحقيق في سلوك الجزيئي للVSMCs من الدورة التاجية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="758">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Fetal bovine serum</td>
			<td style="width:143px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">16140-071</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">HEPES 1M solution</td>
			<td style="width:143px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">MT-25-060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Primocin - 20mL</td>
			<td>Invivogen</td>
			<td>ant-pm-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM (High Glucose, Sodium Pyruvate, L-Glutamine)&#160;</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11995-065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MEM NEAA 10 mM 100X</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11140-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-Glut 200 mM - Gibco</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>25030-081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sterile Cell Strainer 100um nylon mesh</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>22363549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nunclon Polystrene dish with lid, sterile, 35 mm</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>12-565-91</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Harvard Apparatus black silk suture 5-0</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-516-124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagenase Type-2&#160;</td>
			<td>Worthington Biochemical</td>
			<td>LS004176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Soybean Trypsin Inhibitor 25mg</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T6522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hanks&#39; Balanced Salt Solution (HBSS) (1X), liquid (clear)</td>
			<td style="width:143px;">Life Technologies</td>
			<td>14175-103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hanks&#39; Balanced Salt Solution (HBSS) (1X), liquid (phenol red)</td>
			<td style="width:143px;">Life Technologies</td>
			<td>14170-161</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5.0 ml heating coil with degassing bubble trap</td>
			<td>Radnoti</td>
			<td>158830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">11 plus pump</td>
			<td style="width:143px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:119px;">70-2208</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Circulating heated water pump</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>any brand will work</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of murine coronary vascular smooth muscle cells

في حين تم تأسيس العزلة والثقافة من خلايا العضلات الملساء الوعائية (VSMCs) من السفن الكبيرة بشكل جيد، وسعينا إلى عزل والثقافة VSMCs من الدورة التاجية. أزيلت قلوب مع أقواس الأورطي سليمة وperfused عبر Langendorff الوراء مع حل الهضم تحتوي على 300 وحدة / مل من نوع كولاجيناز الثاني، 0.1 ملغ / مل مثبط التربسين فول الصويا و 1 M CaCl 2. وقد تم جمع perfusates في 15 دقيقة فترات لمدة 90 دقيقة، مكعبات بواسطة الطرد المركزي، معلق في وسائل الإعلام والطلاء، ومطلي على أطباق زراعة الأنسجة. تميزت VSMCs التي كتبها جود SM22α، α-SMA، وفيمنتين. واحدة من أهم مزايا استخدام هذه التقنية هو القدرة على عزل VSMCs من الدورة التاجية للفئران. على الرغم من أن عدد قليل من الخلايا التي تم الحصول عليها يمكن أن تحد من بعض التطبيقات التي يمكن استخدامها الخلايا، VSMCs التاجي معزولة يمكن استخدامها في مجموعة متنوعة من تقنيات زراعة الخلايا راسخة وأسايس. يمكن لدراسات التحقيق VSMCs من الفئران المعدلة وراثيا توفر مزيد من المعلومات حول بنية وظيفة ويشير العمليات المرتبطة بأمراض الأوعية الدموية.

ويرجع ذلك إلى جانب رواية لدينا التاجية تقنية VSMC العزلة، سعينا إلى تحديد نقاء العزلة الخلية. وقد تم تحديد الماوس VSMCs التاجي على أساس من التشكل والمناعي تلطيخ حتى مرور 2. بناء على التشكل من الخلايا في الثقافة بعد غسل الأولى، وإجراء العزل يزيل بشكل فعال ...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Murine Coronary Vascular Smooth Muscle Cells at JoVE.com

Isolation of Murine Coronary Vascular Smooth Muscle Cells

والغرض من هذا البروتوكول هو للتدليل على تقنيات العزل وثقافة الخلايا الأولية الفئران الأوعية الدموية العضلات الملساء (VSMCs) من الدورة التاجية. مرة واحدة وقد تم عزل VSMCs، ويمكن استخدامها في العديد من تقنيات زراعة القياسية.

عزل الفئران التاجي الأوعية الدموية خلايا العضلات الملساء

While the isolation and culture of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from large vessels is well established, we sought to isolate and culture VSMCs ...

isolation-of-murine-coronary-vascular-smooth-muscle-cells

Research

JoVE Journal

Biology

14.0K Views.  The Ohio State University College of Medicine.  والغرض من هذا البروتوكول هو للتدليل على تقنيات العزل وثقافة الخلايا الأولية الفئران الأوعية الدموية العضلات الملساء (VSMCs) من الدورة التاجية. مرة واحدة وقد تم عزل VSMCs، ويمكن استخدامها في العديد من تقنيات زراعة القياسية. 

Video: Isolation of Murine Coronary Vascular Smooth Muscle Cells

Focal Ca2+ Transient Detection in Smooth Muscle

Ca2+ imaging of smooth muscle provides insight into cellular mechanisms that may not result in changes of membrane potential, such as the release of Ca2+ from internal stores, and allows multiple cells to be monitored simultaneously to assess, for example, coupling in syncytial tissue. Subcellular Ca2+ transients are common in smooth muscle, yet are difficult to measure accurately because of the problems caused by their stochastic occurrence, over an often wide field of view, in an organ that it prone to contract. To overcome this problem, we've developed a series of imaging protocols and analysis routines to acquire and then analyse, in an automated fashion, the frequency, location and amplitude of such events. While this approach may be applied in other contexts, our own work involves the detection of local purinergic Ca2+ transients for locating transmitter release with submicron resolution. 
ATP is released as a cotransmitter from autonomic nerves, where it binds to P2X1 receptors on the smooth muscle of the detrusor and vas deferens. Ca2+ enters the smooth muscle, resulting in purinergic neuroeffector Ca2+ transients (NCTs). The focal Ca2+ transients allow the optical monitoring of neurotransmitter release in a manner that has many advantages over electrophysiology. Apart from the greatly improved spatial resolution, optical recording has the additional advantage of allowing the recording of transmitter release from many distinguishable sites simultaneously. Furthermore, the optical plane of focus is easier to maintain or correct during long recording series than is the repositioning of an intracellular sharp microelectrode. 
In summary, a method for imaging of Ca2+ fluorescence is outlined which details the preparation of tissue, and the acquisition and analysis of data. We outline the use of several scripts for the analysis of such Ca2+ transients.

Focal Ca2+ Transient Detection in Smooth Muscle

Details methods for high-resolution Ca2+ imaging of smooth muscle within isolated organs, including: preparation of the tissue, image acquisition and data analysis.

تنسيق كا 2 + الكشف العابر في العضلات الملساء

Ca2+ imaging of smooth muscle provides insight into cellular mechanisms that may not result in changes of membrane potential, such as the release of Ca2+ ...

Isolation of Human Umbilical Arterial Smooth Muscle Cells (HUASMC)

The human umbilical cord (UC) is a biological sample that can be easily obtained just after birth. This biological sample is, most of the time, discarded and their collection does not imply any added risk to the newborn or mother s health. Moreover no ethical concerns are raised. The UC is composed by one vein and two arteries from which both endothelial cells (ECs) 1 and smooth muscle cells (SMCs) 2, two of the main cellular components of blood vessels, can be isolated. In this project the SMCs were obtained after enzymatic treatment of the UC arteries accordingly the experimental procedure previously described by Jaffe et al 3. After cell isolation they were kept in t-flash with DMEM-F12 supplemented with 5% of fetal bovine serum and were cultured for several passages. Cells maintained their morphological and other phenotypic characteristics in the different generations. The aim of this study was to isolate smooth muscle cells in order to use them as models for future assays with constrictor drugs, isolate and structurally characterize L-type calcium channels, to study cellular and molecular aspects of the vascular function 4 and to use them in tissue engineering.

Isolation of Human Umbilical Arterial Smooth Muscle Cells HUASMC

The umbilical cords are used to isolate smooth muscle cells by different ways. In this work we used the enzymatic treatment to isolated smooth muscle cells.

عزل الشريان السري الإنسان خلايا العضلات الملساء (HUASMC)

The human umbilical cord (UC) is a biological sample that can be easily obtained just after birth. This biological sample is, most of the time, discarded ...

Adult and Embryonic Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells

Cultured embryonic and adult skeletal muscle cells have a number of different uses. The micro-dissected explants technique described in this chapter is a robust and reliable method for isolating relatively large numbers of proliferative skeletal muscle cells from juvenile, adult or embryonic muscles as a source of skeletal muscle stem cells. The authors have used micro-dissected explant cultures to analyse the growth characteristics of skeletal muscle cells in wild-type and dystrophic muscles. Each of the components of tissue growth, namely cell survival, proliferation, senescence and differentiation can be analysed separately using the methods described here. The net effect of all components of growth can be established by means of measuring explant outgrowth rates. The micro-explant method can be used to establish primary cultures from a wide range of different muscle types and ages and, as described here, has been adapted by the authors to enable the isolation of embryonic skeletal muscle precursors.
Uniquely, micro-explant cultures have been used to derive clonal (single cell origin) skeletal muscle stem cell (SMSc) lines which can be expanded and used for in vivo transplantation. In vivo transplanted SMSc behave as functional, tissue-specific, satellite cells which contribute to skeletal muscle fibre regeneration but which are also retained (in the satellite cell niche) as a small pool of undifferentiated stem cells which can be re-isolated into culture using the micro-explant method.

The micro-dissected explants technique is a robust and reliable method for isolating proliferative skeletal muscle cells from juvenile, adult or embryonic muscles as a source of skeletal muscle stem cells. Uniquely, these cells have been clonally derived to produce skeletal muscle stem cell lines used for in vivo transplantation.

الكبار والعضلات والهيكل العظمي الجنينية Microexplant الثقافة وعزل خلايا جذعية عضلية هيكلية

Cultured embryonic and adult skeletal muscle cells have a number of different uses. The micro-dissected explants technique described in this chapter is a ...

Isolation and Differentiation of Stromal Vascular Cells to Beige/Brite Cells

Brown adipocytes have the ability to uncouple the respiratory chain in mitochondria and dissipate chemical energy as heat. Development of UCP1-positive brown adipocytes in white adipose tissues (so called beige or brite cells) is highly induced by a variety of environmental cues such as chronic cold exposure or by PPAR&gamma; agonists, therefore, this cell type has potential as a therapeutic target for obesity treatment. Although most immortalized adipocyte lines cannot recapitulate the process of "browning" of white fat in culture, primary adipocytes isolated from stromal vascular fraction in subcutaneous white adipose tissue (WAT) provide a reliable cellular system to study the molecular control of beige/brite cell development. Here we describe a protocol for effective isolation of primary preadipocytes and for inducing differentiation to beige/brite cells in culture. The browning effect can be assessed by the expression of brown fat-selective markers such as UCP1.

Primary white preadipocytes isolated from white adipose tissues in mice can be differentiated into beige/brite cells. Presented here is a reliable cellular model system to study the molecular regulation of "browning" of white fat.

العزلة وتمايز الخلايا إلى خلايا الأوعية الدموية اللحمية بيج / برايت

Brown adipocytes have the ability to uncouple the  respiratory chain in mitochondria and dissipate chemical energy as heat.  Development of UCP1-positive ...

Isolation, Culture, and Transplantation of Muscle Satellite Cells

Muscle satellite cells are a stem cell population required for postnatal skeletal muscle development and regeneration, accounting for 2-5% of sublaminal nuclei in muscle fibers. In adult muscle, satellite cells are normally mitotically quiescent. Following injury, however, satellite cells initiate cellular proliferation to produce myoblasts, their progenies, to mediate the regeneration of muscle. Transplantation of satellite cell-derived myoblasts has been widely studied as a possible therapy for several regenerative diseases including muscular dystrophy, heart failure, and urological dysfunction. Myoblast transplantation into dystrophic skeletal muscle, infarcted heart, and dysfunctioning urinary ducts has shown that engrafted myoblasts can differentiate into muscle fibers in the host tissues and display partial functional improvement in these diseases. Therefore, the development of efficient purification methods of quiescent satellite cells from skeletal muscle, as well as the establishment of satellite cell-derived myoblast cultures and transplantation methods for myoblasts, are essential for understanding the molecular mechanisms behind satellite cell self-renewal, activation, and differentiation. Additionally, the development of cell-based therapies for muscular dystrophy and other regenerative diseases are also dependent upon these factors.

However, current prospective purification methods of quiescent satellite cells require the use of expensive fluorescence-activated cell sorting (FACS) machines. Here, we present a new method for the rapid, economical, and reliable purification of quiescent satellite cells from adult mouse skeletal muscle by enzymatic dissociation followed by magnetic-activated cell sorting (MACS). Following isolation of pure quiescent satellite cells, these cells can be cultured to obtain large numbers of myoblasts after several passages. These freshly isolated quiescent satellite cells or ex vivo expanded myoblasts can be transplanted into cardiotoxin (CTX)-induced regenerating mouse skeletal muscle to examine the contribution of donor-derived cells to regenerating muscle fibers, as well as to satellite cell compartments for the examination of self-renewal activities.

The isolation and culture of a pure population of quiescent satellite cells, a muscle stem cell population, is essential to the understanding of muscle stem cell biology and regeneration, as well as stem cell transplantation for therapies in muscular dystrophy and other degenerative diseases.&#160;

العزلة والثقافة، وزرع خلايا العضلات الأقمار الصناعية

Muscle satellite cells are a stem cell population required for postnatal skeletal muscle development and regeneration, accounting for 2-5% of sublaminal ...

Isolation of Pulmonary Artery Smooth Muscle Cells from Neonatal Mice

Pulmonary hypertension is a significant cause of morbidity and mortality in infants. Historically, there has been significant study of the signaling pathways involved in vascular smooth muscle contraction in PASMC from fetal sheep. While sheep make an excellent model of term pulmonary hypertension, they are very expensive and lack the advantage of genetic manipulation found in mice. Conversely, the inability to isolate PASMC from mice was a significant limitation of that system. Here we described the isolation of primary cultures of mouse PASMC from P7, P14, and P21 mice using a variation of the previously described technique of Marshall et al.26 that was previously used to isolate rat PASMC. These murine PASMC represent a novel tool for the study of signaling pathways in the neonatal period. Briefly, a slurry of 0.5% (w/v) agarose + 0.5% iron particles in M199 media is infused into the pulmonary vascular bed via the right ventricle (RV). The iron particles are 0.2 &#956;M in diameter and cannot pass through the pulmonary capillary bed. Thus, the iron lodges in the small pulmonary arteries (PA). The lungs are inflated with agarose, removed and dissociated. The iron-containing vessels are pulled down with a magnet. After collagenase (80 U/ml) treatment and further dissociation, the vessels are put into a tissue culture dish in M199 media containing 20% fetal bovine serum (FBS), and antibiotics (M199 complete media) to allow cell migration onto the culture dish. This initial plate of cells is a 50-50 mixture of fibroblasts and PASMC. Thus, the pull down procedure is repeated multiple times to achieve a more pure PASMC population and remove any residual iron. Smooth muscle cell identity is confirmed by immunostaining for smooth muscle myosin and desmin.

We have developed a novel and reproducible technique to isolate primary cultures of pulmonary artery smooth muscle cells (PASMC) from mice as young as P7, thereby allowing better study of the signaling pathways involved in neonatal smooth muscle cell contraction and relaxation.

عزل الشريان الرئوي خلايا العضلات الملساء من الفئران حديثي الولادة

Pulmonary hypertension is a significant cause of morbidity and mortality in infants. Historically, there has been significant study of the signaling ...

Isolation of Murine Valve Endothelial Cells

Normal valve structures consist of stratified layers of specialized extracellular matrix (ECM) interspersed with valve interstitial cells (VICs) and surrounded by a monolayer of valve endothelial cells (VECs). VECs play essential roles in establishing the valve structures during embryonic development, and are important for maintaining life-long valve integrity and function. In contrast to a continuous endothelium over the surface of healthy valve leaflets, VEC disruption is commonly observed in malfunctioning valves and is associated with pathological processes that promote valve disease and dysfunction. Despite the clinical relevance, focused studies determining the contribution of VECs to development and disease processes are limited. The isolation of VECs from animal models would allow for cell-specific experimentation. VECs have been isolated from large animal adult models but due to their small population size, fragileness, and lack of specific markers, no reports of VEC isolations in embryos or adult small animal models have been reported. Here we describe a novel method that allows for the direct isolation of VECs from mice at embryonic and adult stages. Utilizing the Tie2-GFP reporter model that labels all endothelial cells with Green Fluorescent Protein (GFP), we have been successful in isolating GFP-positive (and negative) cells from the semilunar and atrioventricular valve regions using fluorescence activated cell sorting (FACS). Isolated GFP-positive VECs are enriched for endothelial markers, including CD31 and von Willebrand Factor (vWF), and retain endothelial cell expression when cultured; while, GFP-negative cells exhibit molecular profiles and cell shapes consistent with VIC phenotypes. The ability to isolate embryonic and adult murine VECs allows for previously unattainable molecular and functional studies to be carried out on a specific valve cell population, which will greatly improve our understanding of valve development and disease mechanisms.

The ability to isolate heart valve endothelial cells (VECs) is critical for understanding mechanisms of valve development, maintenance, and disease. Here we describe the isolation of VECs from embryonic and adult Tie2-GFP mice using FACS that will allow for studies determining the contribution of VECs in developmental and disease processes.

عزل خلايا الفئران صمام غشائي

Normal valve structures consist of stratified layers of specialized extracellular matrix (ECM) interspersed with valve interstitial cells (VICs) and ...

Isolation and Primary Culture of Mouse Aortic Endothelial Cells

The vascular endothelium is essential to normal vascular homeostasis. Its dysfunction participates in various cardiovascular disorders. The mouse is an important model for cardiovascular disease research. This study demonstrates a simple method to isolate and culture endothelial cells from the mouse aorta without any special equipment. To isolate endothelial cells, the thoracic aorta is quickly removed from the mouse body, and the attached adipose tissue and connective tissue are removed from the aorta. The aorta is cut into 1 mm rings. Each aortic ring is opened and seeded onto a growth factor reduced matrix with the endothelium facing down. The segments are cultured in endothelial cell growth medium for about 4 days. The endothelial sprouting starts as early as day 2. The segments are then removed and the cells are cultured continually until they reach confluence. The endothelial cells are harvested using neutral proteinase and cultured in endothelial cell growth medium for another two passages before being used for experiments. Immunofluorescence staining indicated that after the second passage the majority of cells were double positive for Dil-ac-LDL uptake, Lectin binding, and CD31 staining, the typical characteristics of endothelial cells. It is suggested that cells at the second to third passages are suitable for in vitro and in vivo experiments to study the endothelial biology. Our protocol provides an effective means of identifying specific cellular and molecular mechanisms in endothelial cell physiopathology.

The vascular endothelial cells play a significant role in many important cardiovascular disorders. This article describes a simple method to isolate and expand endothelial cells from the mouse aorta without using any special equipment. Our protocol provides an effective means of identifying mechanisms in endothelial cell physiopathology.

العزلة والثقافة الابتدائية من خلايا الفأر الأورطي غشائي

The vascular endothelium is essential to normal vascular homeostasis. Its dysfunction participates in various cardiovascular disorders. The mouse is an ...

Isolation of Mouse Coronary Endothelial Cells

Endothelial cells line the inner wall of blood vessels and play an important role in the regulation of vascular tone, vascular permeability, and new vascular formation. Endothelial cell dysfunction is implicated in the development and progression of many cardiovascular diseases including ischemic heart disease. To examine the function and characterization of coronary endothelial cells, cell isolation is the first step and it requires high purity and quantity to conduct subsequent experiments. This protocol describes an efficient method to isolate adult mouse coronary endothelial cells. The mouse heart is dissected and minced into small pieces. After the digestion of the heart using dispase and collagenase II, cells are washed&#160;and incubated with magnetic beads which are conjugated with anti-CD31 antibody. The beads with endothelial cells are washed several times and are ready to use in various applications, including imaging and molecular biological experiments. Efficient isolation yields approximately 104 cells per one heart with over 90% purity.

This protocol is prepared to share our method of isolating mouse coronary endothelial cells for the purpose of imaging or to conduct molecular biological experiments.

عزل خلايا الفأر التاجي غشائي

Endothelial cells line the inner wall of blood vessels and play an important role in the regulation of vascular tone, vascular permeability, and new ...

Murine Aortic Crush Injury: An Efficient In Vivo Model of Smooth Muscle Cell Proliferation and Endothelial Function

Arterial reconstruction, whether angioplasty or bypass surgery, involves iatrogenic trauma causing endothelial disruption and vascular smooth muscle cell (VSMC) proliferation. Common murine models study small vessels such as the carotid and femoral arteries. Herein we describe an in vivo system in which both VSMC proliferation and endothelial barrier function can be simultaneously assessed in a large vessel. We studied the infrarenal aortic response to injury in C57BL/6 mice. The aorta was injured from the left renal vein to the aortic bifurcation by 30 transmural crushes of 5-seconds duration with a cotton-tipped applicator. Morphological changes were assessed with conventional histology. Aorta wall thickness was measured from the luminal surface to the adventitia. EdU integration and counter staining with DAPI and alpha-actin was used to demonstrate VSMC proliferation. Activation of ERK1/2, a known moderator of intimal hyperplasia formation, was determined by Western Blot analysis. The effect of inflammation was determined by immunohistochemistry for B-cells, T-cells, and macrophages. En face sections of endothelium were visualized with scanning electron microscopy (SEM). Endothelial barrier function was determined with Evans Blue staining. Transmural injury resulted in aortic wall thickening. This injury induced VSMC proliferation, most prominently at 3 days after injury, and early activation of ERK1/2 and decreased p27kip1 expression. Injury did not result in increased B-cells, T-cells, or macrophages infiltration in the vessel wall. Injury caused partial endothelial cell denudation and loss of cell-cell contact. Injury resulted in a significant loss of endothelial barrier function, which returned to baseline after seven days. The murine transmural blunt aortic injury model provides an efficient system to simultaneously study both VSMC proliferation and endothelial barrier function in a large vessel.

Murine Aortic Crush Injury: An Efficient In Vivo Model of Smooth Muscle Cell Proliferation and Endothelial Function

Restenosis following cardiovascular procedures (bypass surgery, angioplasty, or stenting) is a significant problem reducing the durability of these procedures. An ideal therapy would inhibit smooth muscle cell (VSMC) proliferation while promoting regeneration of the endothelium. We describe a model for simultaneous assessment of VSMC proliferation and endothelial function in vivo.

الفئران الأرواح سحق إصابة: كفاءة<em&gt; في فيفو</em&gt; نموذج من انتشار الخلايا العضلية السلس والوظيفة البطانية

Arterial reconstruction, whether angioplasty or bypass surgery, involves iatrogenic trauma causing endothelial disruption and vascular smooth muscle cell ...

عزل الفئران التاجي الأوعية الدموية خلايا العضلات الملساء

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

تنسيق كا^{2 +} الكشف العابر في العضلات الملساء