هنا نُوضح كيفية تربية المكسيكي تترا Astyanax المكسيكي، ورفع اليرقات، وتنفيذ الكيمياء المناعية على اليرقات في مرحلة ما بعد لمقارنة الأنماط الظاهرية للأسماك المتكيفة مع الأنهار والكهوف. نحن نربي الأسماك بنفس الكثافة على نظام غذائي غني بالمغذيات من الروتيفر. هذه التقنية تضمن نموًا ثابتًا وتوفر مزايا في التكلفة والأمن البيولوجي وجودة المياه.
للبدء، ضع شبكة بلاستيكية في الجزء السفلي من خزان خمسة غالون. ثم ملء الخزان مع الأسماك الجاهزة المياه. الصق سخان المياه على جانب الخزان.
إضافة أنثى واحدة واثنين من الذكور Astyanax الأسماك المكسيكية التي هي أكثر من سنة واحدة من العمر إلى الخزان. تعيين درجة حرارة سخان المياه إلى 24 درجة مئوية. بعد 24 ساعة، وزيادة درجة الحرارة بمقدار درجة مئوية واحدة.
تألق مصباح يدوي في الجزء السفلي من الخزان كل يوم للتحقق من وجود البيض. مرة واحدة يتم تحديد البيض في خزان التربية، وإزالة الأسماك الكبار وشبكة بلاستيكية. استخدمي القارص لتقليل عمق الماء إلى 10 سم.
لتقدير وقت الإخصاب، استخدم ماصة نقل لوضع عدة بيضات في طبق بتري وعرضها بمجهر ستيريو لتحديد مرحلتها. إزالة البيض أو البراز غير شفاف. ثم ملء الخزان مع المياه الجاهزة الأسماك وإضافة سبع قطرات من الميثيلين الأزرق إلى الماء.
بعد هذا، إضافة سخان وحوض فقاعات الحوض إلى الخزان. تعيين سخان إلى 24 درجة مئوية وضبط منظم تيار الهواء لإنتاج تيار لطيف من فقاعات. ثم تغطية الخزان للحفاظ على درجة حرارة المياه.
إضافة 20 غراما من الملح إلى ثمانية لترات من الأسماك الماء الجاهز ويحركها حتى يتم حلها. ثم يضاف لتر واحد من المياه المعدة لكل حاوية حضانة. بعد ذلك استخدام ماصة نقل لنقل 20 من اليرقات مفقست إلى كل حاوية الحضانة.
تهيج المياه في خزان أكبر لضمان أن جميع اليرقات قد أزيلت. لتحضير طعام السمك، أضف ثلاثة مل من خليط الطحالب إلى لتر واحد من الروتيفر المحصّن. خمسة أيام بعد الإخصاب إضافة ثلاثة مل من الغذاء الأسماك إلى كل حاوية الحضانة.
يجب أن تكون الروتيفر مرئية في مجموعات كثيفة عند زاوية الحاويات ما لم تكن مرئية بالقرب من المركز. تحقق من الحاوية ل rotifers كل يوم وإضافة المزيد من المواد الغذائية إذا تم استنفاد التركيز. إزالة أي يرقات ميتة.
أولا، لمسح الجهاز الهضمي من محتويات الطعام، صب حاوية الحضانة مع الأسماك في السن المطلوب من خلال مصفاة شبكة النايلون. ضع المصفاة في حاوية مع مياه نظيفة جاهزة للأسماك وحجب الطعام لمدة 24 ساعة. بعد القتل الرحيم الأسماك، وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية، واستخدام ماصة نقل لنقل الأسماك إلى أنبوب مخروطي.
استبدل حل القتل الرحيم بالثبت. واحتضان أنبوب مع هزاز بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية. بعد ذلك، قم بإزالة المثبت واستبدالها بـ PBST.
احتضان الأنبوب لمدة 15 دقيقة أخرى مع هزاز. وكرر عملية الغسيل مرة أخرى. بعد ذلك، استخدم ماصة نقل لنقل الأسماك إلى قارورة زجاجية أربعة مل مع غطاء أعلى المسمار.
إزالة PBST من القارورة وإضافة ثلاثة مل من حل حظر. احتضان القارورة في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة مع هزاز. بعد ذلك، استخدم ماصة نقل لإزالة حل الحجب واستبداله بالأجسام المضادة الأولية المخففة في محلول الحجب.
احتضان القارورة بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة مع الانفعالات. بعد ذلك ، قم بغسل الأسماك مع PBST ثلاث مرات ، كما هو موضح سابقًا. استبدال PBST مع الأجسام المضادة الثانوية المخففة في حل حظر.
واحتضان القارورة بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة مع الانفعالات. وأخيرا، يغسل الأسماك ثلاث مرات لمدة 15 دقيقة مع PBST. باستخدام هذا البروتوكول، ولدت الأسماك السطحية تيناجا، مولينو وباكون كهوف الأسماك في خزانات تربية ثابتة.
السطح و Pachon يولد، مع الأجنة المخصبة، تنتج دائما يرقات مفقمة. في حين أن مولينو وتيناجا لم تنجح بعض الوقت. بشكل عام، أنتجت الأسماك السطحية أكبر عدد من اليرقات لكل تفرخ، تليها باشون، تيناجا، ومولينو على التوالي.
تم استخدام تقنية المناعة كاملة التركيب بنجاح لتسمية الخلايا العصبية وخلايا البنكرياس في مراحل تصل إلى 12.5 يوم بعد الإخصاب. من المهم إزالة أي أسماك نافقة وأنت ترفع اليرقات وتسجل عدد الأسماك الباقية. إذا كان العديد من الأسماك تموت قد يكون ذلك بسبب التلوث البكتيري أو الفطري.
يجب تعقيم الخزانات بنسبة 70٪ من الإيثانول قبل الاستخدام. تم استخدام تقنية الكبت المناعي التي وصفناها بنجاح للأجسام المضادة المدرجة في جدول المواد. بعد المناعة، يمكن أن تكون الأسماك كاملة شنت أو مقطعة لعرض أي نسيج من الاهتمام.
وفي الجمع بين ذلك، يوفر إجراء التربية والتفقيس وكبت المناعة طريقة قوية لتقييم النشاط الجيني NC2 بطريقة قابلة للمقارنة بين المختبرات.
