우리는 쥐에 거대한 pontine 출혈을 설정하는 프로토콜을 제공합니다. 이 모델은 쉽게 설정, 반복 가능하고 매우 성공적입니다. 자가 쥐 방법의 증류 주입은 뇌 영역중 어느 에서출혈을 만들기 위해 사용될 수있다.
이러한 기술을 시도하려는 사람들은 입체 프레임을 사용하는 방법을 배우고, pontine 해부학에 익숙해져야한다. 먼저 마우스 위에 외과 커튼을 배치합니다. 표시된 중간선을 따라 메스로 절개를 합니다.
면 봉봉을 사용하여 잠재적인 혈액을 제거하십시오. 그런 다음 두개골을 노출하기 위해 두피 플랩의 각 측면에 집게 조각을 놓습니다. 면봉을 0.9% 식염수에 담그고 두개골 뼈에서 결합 조직을 부드럽게 제거합니다.
마커 펜을 사용하여 브레그마의 중심점을 원점으로 표시합니다. 마이크로 드릴을 사용하여 두개골 절제술을 수행하여 신중하게 진행합니다. 완료되면 스테레오탁스 프레임에서 마이크로 드릴을 제거합니다.
100 마이크로 리터 해밀턴 주사기를 스테레오 탁스 홀더에 넣습니다. 사출 펌프 스위치를 켭니다. 빠른 흡입 버튼을 클릭합니다.
그런 다음 100 마이크로 리터에 헤파린 용액을 흡인하고 완전히 배출합니다. 클로르헨시딘과 75%의 알코올 수술 스크럽을 뿌리부터 팁까지 적어도 세 번 바르면 피부를 소독하고, 흥분을 완화하고 꼬리 정맥을 팽창하여 주사성공률을 높입니다. 두피 침술을 1밀리리터 주사기에 부착한 다음 두피 침술을 꼬리 끝에서 3센티미터 떨어진 측면 꼬리 정맥에 삽입하고 150마이크로리터의 혈액을 섭취합니다.
1 밀리리터 주사기에서 두피 침술을 제거하고 튜브로 혈액을 전달합니다. 혈액 응고를 방지하기 위해 신속하게 작업. 수술 장갑을 변경합니다.
인출 모드를 선택합니다. 볼륨을 100 마이크로리터로 설정하고 속도를 분당 200 마이크로리터로 설정합니다. 실행 버튼을 클릭하고, 해밀턴 주사기에 혈액의 100 마이크로 리터를 흡인.
인퓨즈 모드로 전환하고 속도를 분당 하나의 마이크로리터로 설정합니다. 팁이 뇌 표면 아래 9.2 밀리미터에 도달 할 때까지 주사기를 진행하고 혈액의 처음 10 마이크로 리터를 주입합니다. 실행 버튼을 클릭합니다.
주사를 멈추고 주사기를 20분 동안 제자리에 두어 혈액이 지주막 공간으로 흘러들어가는 것을 방지하십시오. 팁이 뇌 표면 아래 9밀리미터에 도달할 때까지 주사기를 철회한 다음 잔류 혈액이 완전히 주입될 때까지 분당 1마이크로리터의 동일한 속도로 주사를 다시 시작합니다. 혈류를 피하기 위해 주사기를 10 분 동안 제자리에 둡니다.
뇌에서 주사기를 천천히 제거합니다. 그런 다음 뼈 시멘트를 사용하여 두개골 구멍을 덮습니다. 시멘트가 건조하면 4 0 폴리아미드 봉합사 필라멘트로 상처를 봉합합니다.
바느질 후 서너 바늘 넥타이 2 원 - 1 표준 수술 매듭. 15분마다 쥐를 관찰하여 마취에서 완전히 회복한 다음, 그 밑에 가열 패드가 있는 원래 케이지로 되돌려 놓습니다. 쥐에게 음식과 물을 무료로 이용할 수 있도록 하십시오.
총 25마리의 동물이 30마이크로리터, 60마이크로리터, 100개의 마이크로리터 혈액 주사를 제어하는 데 사용되었습니다. 행동 검사는 수술 후 1 일, 3, 7 및 14 일에 실시되었습니다. 폰틴 출혈은 각막 반사 및 순환 감소 와 같은 신경 학적 적자를 일으켰습니다.
혈액의 100 마이크로 리터의 주사는 또한 근상증을 유도. MRI 스캐닝은 수술 후 24시간 후에 수행되었습니다. 혈액 주사 그룹에서 출혈은 연못의 바실러 부분에서 약간 과중한 코어에 ISO가있는 저격 림으로 검출되었습니다.
출혈의 부피가 주사 부피로 증가했습니다. 쥐는 수술 후 24 시간 14 일에 희생되었다. 그리고 2 밀리미터 두께의 섹션이 만들어졌습니다.
출혈은 주사 부위를 둘러싸고 연못 의 기지에서 분배되는 것을 감지했다. 100 마이크로 리터 혈액 주사 그룹에서 출혈 주위에 약간의 부종이 있었다. 일부 쥐는 수술 후 3 일 희생되었고 파라핀 섹션은 HE 염색을 위해 만들어졌습니다.
결과는 파라 출혈 영역에서 농축 된 혈액 주사 그룹에서 혈글로빈이 그대로 적혈구로 함유 된 채로 남아 있는 것으로 나타났습니다. 이 프로토콜을 시도할 때 는 주입 위치를 기억해야 합니다. 이 방법은 임의의 특정 뇌 영역에서 출혈을 유도하는 데 사용될 수 있다.
