الهجرة النووية في كريات الدم البيضاء Drosophila

هذه التقنية تجعل من الممكن مراقبة العمليات البيولوجية الطويلة في غرف بيض دروسوفيلا المتشرذم ، مثل الهجرة النووية البويضات ، باستخدام المجهر التصوير الحي. يصف هذا البروتوكول كيفية الحفاظ على غرف البيض المتشريح على قيد الحياة لمدة 12 ساعة لإجراء المجهر التصوير الحي. للبدء، ماصة 200 ميكرولتر من شنايدر المتوسطة وتكملة مع 30 ميكرولتر من 10 ملليغرام لكل ملليلتر الأنسولين، ثم إضافة أربعة ميكرولترات من الحرارة المعطل مصل العجل الجنين.

استخدام طرف ماصة لتطبيق كمية صغيرة من الشحوم السيليكون في جميع أنحاء حفرة على الجانب السفلي من الشريحة ثقب. ضع غطاء، واستخدم الطرف العريض من طرف ماصة للضغط على غطاء الغطاء لتسطيح شحوم السيليكون لإنشاء حلقة سيليكون داخلية على الشريحة. نقل الذباب الأنثوي المخدر إلى بئر التشريح الذي يحتوي على 150 ميكرولتر من وسيط التصوير.

لتشريح الأنثى، استخدم ملقط للاستيلاء على الصدر وقرصة كفاح البطن الظهري مع زوج ثان من ملقط. إزالة الرحم، أوفيدوكت، وغمد العضلات بعناية. عزل وفصل زوج من المبيضين مرئية على فتحة لطيف.

ضع قطرة من 10 إلى 15 ميكرولتر من وسيط التصوير على المبيضين، ونقل مبيض واحد إلى غرفة التصوير. لفصل المبيضين، استخدم الإبرة لعقد النهاية الخلفية للمبيض. استخدام إبرة أخرى لسحب بعناية الجرثومة لإغاظة ovarioles وبصرف النظر.

عقد غمد مع إبرة واحدة وسحب ovariole من خلال غرف أكبر مع إبرة أخرى لإزالة غمد العضلات المتبقية على غرف البيض. السماح للovariole غير المورثة تغرق والاتصال coverlip. إزالة المراحل المتأخرة وبقية المبيضين من غرفة النوم الدقيقة باستخدام ملقط.

استخدام الإبر لمسافة بعناية ovarioles لتسهيل عملية الاستحواذ. قطع صغيرة 10 في 10 ملليمتر مربع من الغشاء نفاذية. تطبيق بعناية الغشاء على الجزء العلوي من وسيلة التصوير لطرد أي فقاعات الهواء.

ثم ختم بإحكام الغرفة مع طبقة رقيقة من زيت الهالوكربون حول البئر على كفاف الغشاء. ضع إعداد التصوير على حامل الشريحة للمجهر المقلوب واستخدم هدف 40X. تم التقاط هجرة نواة البويضات لغرفة بيض من النوع البري باستخدام المجهر التصوير الحي.

تصل النواة إما إلى غشاء البلازما الأمامي أو غشاء البلازما الجانبي قبل الانزلاق على طول المسارات للوصول إلى موقعها النهائي عند تقاطع غشاءي البلازما. تشوهات الأغشية، والخلايا الجريبية غير المنظمة، وتوقف الخلايا، والنوى تقلصت هي العلامات الأولى لغرف البيض الموت. لا يتم الكشف عن البويضات المتحللة قبل ثماني ساعات من التصوير عادة.

ومع ذلك ، فإن الحالات النادرة من الانحطاط المبكر ترجع إلى مشاكل أثناء التشريح أو الخطوات المتصاعدة. إتلاف غرف البيض يعرض بقاءهم للخطر. تشريح دقيق اليد الدقيقة جدا وإعداد غرفة الميكروشامبر هي ذات أهمية قصوى.

سمح لنا هذا الإجراء بتصور أن نواة البويضات يمكن أن تتخذ ثلاثة مسارات مختلفة أثناء هجرتها وتنظم العضيات المختلفة هذه المسارات داخل البويضات.