드로소필라 오키테의 핵 이주

이 기술은 살아있는 화상 진찰 현미경 검사를 사용하여 oocyte 핵 이주와 같은 해부 Drosophila 계란 챔버에서 긴 생물학적 과정을 관찰할 수 있게 합니다. 이 프로토콜은 살아있는 화상 진찰 현미경 검사를 능력을 발휘하기 위하여 12 시간 동안 살아 있는 해부한 계란 방을 유지하는 방법을 설명합니다. 시작하려면, 파이펫 200 슈나이더 매체의 마이크로 리터와 보충 30 밀리 리터 당 10 밀리그램의 마이크로 리터, 다음 열 불활성화 태아 종아리 혈청의 네 마이크로 리터를 추가.

파이펫 팁을 사용하여 구멍이 뚫린 슬라이드의 아래쪽에 있는 구멍 주위에 소량의 실리콘 그리스를 적용합니다. 커버슬립을 배치하고, 파이펫 팁의 넓은 끝을 사용하여 커버슬립에 압력을 가하여 실리콘 그리스를 평평하게 하여 슬라이드에 실리콘 링 내부를 만듭니다. 마취된 암컷 파리를 이미징 배지의 150마이크로리터를 함유한 해부 우물로 이송한다.

암컷을 해부하려면 집게를 사용하여 흉부를 잡고 두 번째 집게로 등복부 표피를 꼬집습니다. 조심스럽게 자궁, oviduct 및 근육 칼집을 제거합니다. 큐티클 개구부시 보이는 난소 쌍을 분리하고 분리합니다.

난소에 이미징 배지의 10-15 마이크로리터를 떨어뜨리고, 하나의 난소를 이미징 챔버로 옮기다. 혈관을 분리하려면 바늘을 사용하여 난소의 후방 끝을 잡습니다. 다른 바늘을 사용하여 바오리움을 따로 괴롭히기 위해 제마리움을 조심스럽게 당깁니다.

한 바늘로 칼집을 잡고 계란 챔버에 남아있는 근육 칼집을 제거하기 위해 다른 바늘로 큰 챔버를 통해 ovariole을 당깁니다. 흔들리지 않는 오바리오레가 가라앉고 커버슬립에 연락하도록 허용합니다. 집게를 사용하여 소실에서 후반 단계와 난소의 나머지 부분을 제거합니다.

바늘을 사용하여 오병의 거리를 조심스럽게 멀리하여 획득을 용이하게하십시오. 투과성 멤브레인의 작은 10 mm 사각형을 잘라냅니다. 이미징 매체 의 상단에 멤브레인을 조심스럽게 적용하여 기포를 배출합니다.

그런 다음 멤브레인의 윤곽에 우물 주위에 할로카본 오일의 얇은 층으로 챔버를 밀메트로 밀봉. 반전된 현미경의 슬라이드 홀더에 이미징 설정을 배치하고 40X 목표를 사용합니다. 야생 형 계란 챔버의 난소 핵의 이동은 살아있는 이미징 현미경 을 사용하여 캡처되었습니다.

핵은 두 혈장 멤브레인의 교차점에 도달하기 위하여 궤적을 따라 미끄러지기 전에 전방 플라즈마 막 또는 측측 혈장 막에 도달합니다. 막 기형, 무질서한 여포 세포, 기절한 세포 및 수축된 핵은 죽어가는 계란 챔버의 첫번째 표시입니다. 화상 진찰의 8 시간 전에 퇴화한 oocyte는 일반적으로 검출되지 않습니다.

그러나, 조기 변성의 드문 경우는 해부 또는 장착 단계 중 문제로 인한 것입니다. 계란 챔버를 손상 그들의 생존을 손상. 그래서 섬세한 손 정밀 한 해부 및 마이크로 챔버의 준비는 가장 중요 한.

이 절차를 통해 우리는 오낭 핵이 이주 하는 동안 세 가지 다른 궤적을 취할 수 있으며 다른 세포기관은 난구체 내에서 이러한 궤적을 조절할 수 있음을 시각화 할 수 있었습니다.