הגירה גרעינית באוקיטה של דרוסופילה

טכניקה זו מאפשרת לבחון תהליכים ביולוגיים ארוכים בתאי ביצים מפורקים של דרוזופילה, כגון הגירה גרעינית של ביציות, באמצעות מיקרוסקופיה חיה של הדמיה. פרוטוקול זה מתאר כיצד לשמור על תאי הביצים נותחו בחיים במשך 12 שעות כדי לבצע מיקרוסקופיה הדמיה חיה. בתור התחלה, פיפטה 200 מיקרוליטרים של שניידר בינוני בתוספת עם 30 microliters של 10 מיליגרם לאינסולין מיליליטר, ולאחר מכן להוסיף ארבעה microliters של סרום עגל עוברי מומת חום.

השתמש קצה פיפטה כדי להחיל כמות קטנה של שומן סיליקון סביב החור בצד התחתון של השקופית המנוקבת. מקם כיסוי, והשתמש בקצה הרחב של קצה פיפטה כדי להפעיל לחץ על כיסוי כדי לשטח את שומן הסיליקון ליצירת פנים טבעת סיליקון לשקופית. מעבירים את זבובי הנקבה המרדימה לבאר הניתוח המכילה 150 מיקרוליטרים של מדיום ההדמיה.

לצורך ניתוח הנקבה, השתמש במלקחיים כדי לתפוס את בית החזה ולצבוט את בטן הבטן עם זוג שני של מלקחיים. הסר בזהירות את הרחם, oviduct, נדן שרירים. לבודד ולנתק את זוג השחלות הנראות על פתח חתך.

מניחים טיפה של 10 עד 15 מיקרוליטרים של מדיום ההדמיה על השחלות, ומעבירים שחלה אחת לתא ההדמיה. להפרדת השחלות, השתמש במחט כדי להחזיק את הקצה האחורי של השחלה. השתמש במחט אחרת כדי למשוך בזהירות את הנבט להקניט את השחלות לגזרים.

החזק את הנדן עם מחט אחת ולמשוך את השחלה דרך התאים הגדולים יותר עם מחט אחרת כדי להסיר את נדן השריר הנותר על תאי הביצים. אפשרו לחלותות שלא נושלו לשקוע ולצור קשר עם כיסוי. הסר את השלבים המאוחרים ואת שאר השחלות מן microchamber באמצעות מלקחיים.

השתמש במחטים כדי להרחיק בזהירות את השחלות כדי להקל על הרכישה. חותכים ריבוע קטן של 10 על 10 מ"מ של הממברנה החדירות. יש למרוח בזהירות את הממברנה על החלק העליון של מדיום ההדמיה כדי לגרש את כל בועות האוויר.

ואז לאטום הרמטית את התא עם שכבה דקה של שמן halocarbon סביב הבאר על קווי המתאר של הממברנה. מקם את הגדרת ההדמיה על מחזיק השקופית של המיקרוסקופ ההפוך והשתמש במטרה פי 40. נדידת גרעין הביצית של תא ביצים מסוג בר נתפסה באמצעות מיקרוסקופיה חיה של הדמיה.

הגרעין מגיע לקרום הפלזמה הנעים או לקרום הפלזמה לרוחב לפני שהוא מחליק לאורך המסלולים כדי להגיע למיקומו הסופי בצומת של שתי קרום הפלזמה. עיוותים בממברנה, תאי זקיקים לא מאורגנים, תאים מעוכבים וגרעינים מכווצים הם הסימנים הראשונים לתאי ביצים גוססים. oocyte מנוון לפני שמונה שעות של הדמיה אינו מזוהה בדרך כלל.

עם זאת, מקרים נדירים של ניוון מוקדם נובעים מבעיות במהלך השלבים התת-ניתוח או הרכבה. פגיעה בתאי הביצים מסכנת את הישרדותם. אז ניתוח יד עדין מדויק והכנת המיקרו-צ'מבר הם בעלי חשיבות עליונה.

הליך זה איפשר לנו לדמיין כי גרעין ביציות יכול לקחת שלושה מסלולים שונים במהלך נדידתו ואברונים שונים לווסת מסלולים אלה בתוך ביציות.