هذا البروتوكول مناسب للبحث في مختلف جوانب ونتائج آلام الحروق وعلاجها ، ومن المتوقع أن يجلب معلومات مهمة إلى هذا المجال البحثي. ينشئ هذا البروتوكول نموذجا حيوانيا للحرق الناجم عن الماء الساخن ويقترح طريقة لقياس الألم ذي الصلة واضطرابات المشي والاستجابات السلوكية الشبيهة بالاكتئاب. سيوضح الإجراء جايهيوك كيم ، طالب الماجستير في مختبر الدكتور كيم.
للبدء ، قم بإيواء الفئران ICR الذكور التي تزن من 20 إلى 25 جراما في غرفة خفيفة يتم التحكم في درجة حرارتها. السماح للفئران بالحصول على الطعام والماء مجانا والتأقلم لمدة أسبوع واحد على الأقل قبل بدء التجربة. بعد أسبوع واحد ، قم بتعيين الفئران بشكل عشوائي إلى المجموعة التجريبية أو الضابطة واستخدم أرقام الحيوانات كرموز لإجراء تجارب عمياء.
قبل إجراء تحريض الحروق ، ارتد ثوبا جراحيا وقفازات وقناعا. بعد ذلك ، بعد تخدير الماوس بعمق ، قم بتطهير حول المخلب الخلفي الأيمن بنسبة 70٪ من الإيثانول وتطبيق مرهم العيون على العينين لمنع تجفيف القرنية ، ثم ضع علامة على كاحل كل فأر واغمر المخلب الخلفي الأيمن في الماء الساخن عند 65 درجة مئوية لمدة ثلاث ثوان. بعد إصابة الحروق ، ضع الماوس على وسادة تدفئة في قفص منزلي نظيف حتى يتعافى من التخدير.
أحضر الفئران إلى غرفة الاختبار السلوكي واتركها تتأقلم لمدة 30 دقيقة على الأقل قبل الاختبار. بينما تتأقلم الفئران ، ارتد ثوبا جراحيا وقفازات وقناعا. بعد ذلك ، ضع الفئران في صندوق مربع على أرضية شبكية معدنية واتركها تتأقلم لمدة 30 دقيقة أخرى.
ثم لتقييم العتبة الميكانيكية للمخلب الخلفي باستخدام طريقة التحفيز التصاعدي ، قم بكز المخلب بلطف بسلسلة من خيوط فون فراي في فترات من خمس إلى ثماني ثوان لتحفيز الأخمص الخلفي. قم بإجراء خمس تجارب لتقييم العتبات الميكانيكية لكل مخلب خلفي جانبي. لتحليل المشية ، تأقلم الفئران في نظام تحليل المشية يوميا لمدة 10 إلى 15 دقيقة تبدأ قبل خمسة أيام من إصابة الحرق.
في يوم الاختبار ، بعد ارتداء الثوب الجراحي والقفازات والقناع ، أحضر الفئران إلى غرفة الاختبار السلوكية واتركها تتأقلم لمدة 30 دقيقة قبل الاختبار ، ثم ابدأ برنامج تحليل المشي وانقر على قائمة إنشاء تجربة جديدة لتعيين المجلد لحفظ البيانات. بعد التعيين ، اضبط الحد الأقصى لوقت التشغيل على خمس ثوان والحد الأقصى المسموح به لتغيرات السرعة إلى 50٪ بعد ذلك ، في علامة التبويب "الإعداد" للبرنامج ، حدد كاميرا مسجلة واضبط طول الممر على 30 سم. ثم في علامة التبويب المكتسبة من قائمة البرنامج ، حدد فتح الاكتساب وبناء على رسائل الحالة ، انقر فوق زر الخلفية المفاجئة للحصول على صورة خلفية لممر فارغ.
بعد ذلك ، انقر فوق زر بدء الاستحواذ ووضع الماوس عند مدخل الممر الأيسر / الأيمن القابل للعرض. سيبدأ التسجيل تلقائيا بعد الحركة الحرة للماوس. بعد التسجيل الناجح ، حدد تصنيف يعمل من علامة التبويب المكتسبة في قائمة البرنامج ، ثم حدد التشغيل المراد تحليله وانقر فوق الزر التصنيف التلقائي.
بعد اكتمال التصنيف التلقائي ، قم بإزالة الأنف والتعرف على الأعضاء التناسلية وسوء التعرف على الكفوف إلى البيانات غير المرغوب فيها في كل تشغيل ، ثم قم بتحليل البيانات. بعد فترة تأقلم مدتها 30 دقيقة في غرفة الاختبار السلوكي ، ضع الماوس في أسطوانة زجاجية شبكية واضحة تحتوي على 15 سم من الماء لمدة 15 دقيقة. في اليوم التالي ، ضع الماوس في الأسطوانة مرة أخرى في ظل نفس الظروف وقم بقياس وقت الجمود ، أي عندما يتوقف الماوس عن التسلق أو السباحة ويطفو برأسه فوق سطح الماء.
بعد ذلك ، لقياس الوظيفة الحركية الطبيعية ، ضع الحيوان على منصة أسطوانية متداولة معلقة على ارتفاع 16 سم فوق الجزء السفلي من الجهاز. قبل التسبب في إصابة الحروق ، اسمح للفئران بالتدريب مرة واحدة في اليوم على الروتارد لمدة خمسة أيام على الأقل. بعد تناول الدواء ، قم بإجراء اختبار روتارود كل 20 دقيقة لمدة ساعتين مع وقت انقطاع قدره دقيقتان.
قم بقياس المدة الزمنية التي يعمل فيها الماوس على قضيب دوار بسرعة ثابتة تبلغ 15 دورة في الدقيقة دون سقوط. انخفضت عتبة انسحاب مخلب الفئران الناجمة عن إصابة الحروق بعد اليوم الأول واستمرت لمدة سبعة أيام مقارنة بالمجموعة الضابطة. قللت إدارة الأسيتامينوفين بشكل كبير من الانخفاض الناجم عن الحرق في عتبة انسحاب المخلب.
بالإضافة إلى ذلك ، أظهرت المنطقة الخاضعة لتحليل المنحنى أن إدارة الأسيتامينوفين قللت بشكل كبير من الألودينيا الميكانيكية الناجمة عن إصابة الحروق. كما انخفضت منطقة طباعة المخلب الخلفي بشكل كبير بعد تحريض إصابة الحروق واستمرت لمدة سبعة أيام. حسنت إدارة الأسيتامينوفين بشكل كبير منطقة طباعة المخلب الخلفي مقارنة بمعالجة السيارة.
علاوة على ذلك ، خفضت إصابة الحروق الموقف الفردي للمخلب الخلفي الجانبي بعد اليوم الأول وتم الحفاظ على هذا الانخفاض لمدة سبعة أيام. تم تحسين موقف مخلب الخلفية من قبل إدارة الأسيتامينوفين. في اختبار السباحة القسري ، زادت أوقات عدم الحركة للفئران الناجمة عن إصابة الحروق بعد سبعة أيام من الإصابة مقارنة بالمجموعة الضابطة.
قللت إدارة الأسيتامينوفين بشكل كبير من الزيادة الناجمة عن إصابة الحروق في وقت الجمود. في اختبار الروتارود ، كانت أوقات تشغيل الفئران الناجمة عن إصابة الحروق مماثلة لتلك الخاصة بالمجموعة الضابطة بعد سبعة أيام من تحريض الحرق. في المقابل ، انخفضت أوقات تشغيل الفئران المعالجة بألفاكسولون بشكل كبير بحوالي 60 دقيقة ، مما يشير إلى أن طريقة إصابة الحروق هذه لا تسبب ضعفا حركيا.
يجب أن يبقى مدى الحرق المطبق على كل ثابتا للحصول على نتائج دقيقة. يمكن أيضا تطبيق طرق التحليل التجريبي السلوكي المختلفة المقترحة في هذه الدراسة على النماذج الحيوانية الأخرى المتعلقة بالألم واضطراب المشي والسلوك الشبيه بالاكتئاب. يمكن لطرق التحليل المقترحة تحديد الأعراض المختلفة بعد تحريض إصابة الحروق ، والتي ستكون مفيدة لتطوير طرق البحث والعلاج المتعلقة بالحروق في المستقبل.
